目的:研究18株野生云芝种质资源的农艺性状和药材品质,为筛选可供人工培育的高产优质云芝药材菌种提供理论参考.方法:测定18株云芝菌丝、子实体农艺性状及子实体多糖、浸出物、麦角甾醇含量和重金属含量,并进行综合评价.结果:菌株YUN5、HN04、JL3、NX17首茬子实体生物产量较高;菌株YUN4、YUN5、DB5、NX4子实体多糖含量均超过2020年版中国药典规定的3.2％;14个菌株子实体浸出物含量均超过药典标准规定的18％,YUN1、HN02、NX6、NX18未达药典标准.子实体中麦角甾醇含量最高菌株为NX4,达到0.58 mg/g;菌株YUN5、HN01、DB4、JL2、NX4子实体中Cr、Cu、As、Cd、Pb含量均未超过标准规定的限量值.结论:菌株NX4、DB5、YUN5在加权评分及主成分分析评价中排名前列且符合2020年版中国药典规定的云芝外观、多糖含量和浸出物含量要求,可作为优质云芝种质资源,同时也可作为云芝药材品质优良菌种;加权评分排名靠前的YUN2、YUN4以及主成分分析排名靠前的NX17子实体外观不符合药典要求,但菌株YUN4的多糖含量、菌株YUN2的浸出物和麦角甾醇含量、菌株NX17的麦角甾醇含量和单袋首茬产量上相对于其他菌株具有优势,可分别考虑作为有效成分提取的菌种资源.

目的 从体内及体外探讨云芝多糖B(CVPs-B)对溶血磷脂酰胆碱(LPC)诱导兔主动脉平滑肌细胞(SMCs)分泌的蛋白聚糖(PGs)结合低密度脂蛋白(LDL)的抑制作用,及其对LDL在兔主动脉滞留的影响.方法 分离新西兰白兔主动脉SMCs,应用凝胶迁移率移动分析法(GMSA)观察CVPs-B对LPC诱导兔主动脉SMCs分泌的PGs与LDL结合的影响.利用固相氧化剂Iodogen法对人LDL进行125 I-标记,应用γ计数法观察CVPs-B对LDL在新西兰白兔主动脉滞留的影响.结果 CVPs-B在500 mg/L剂量水平以上可抑制LPC(10μmol/L)诱导兔主动脉SMCs分泌的PGs(1250 cpm)与LDL(100 mg/L)结合;CVPs-B在10 mg/(kg·d)剂量水平以上静脉注射7 d,可减少125 I-LDL(10 mg)在兔主动脉的滞留.结论 CVPs-B可抑制兔主动脉PGs结合LDL,及抑制LDL在兔主动脉的滞留.

目的:探讨香菇多糖(Lentinan,LNT)和云芝糖肽(Polysaccharopeptide,PSP)联合使用对免疫抑制小鼠和肺癌小鼠的免疫调节作用和抗肿瘤活性.方法:以Lewis肺癌细胞建立肺癌小鼠模型,随机分为空白组(B1组)、生理盐水组(N1组)、PSP+LNT组(C1组)和阿霉素(Adriamycin,ADM)组(A1组);以多柔比星KM小鼠建立免疫抑制模型,随机分为空白组(B2组)、生理盐水组(N2组)和PSP+LNT组(C2组);2模型中B1组和B2组小鼠不行肺癌细胞和ADM注射,2模型中N1组与N2组、C1与C2组在建模后连续20天分别通过灌胃法注入生理盐水0.2 mL和PSP+LNT的混合溶液0.2 mL,A1组小鼠连续3天腹膜内注射4 mg/(kg·d)ADM.采用自动血细胞分析仪对外周血白细胞(WBC)进行计数;比较各组小鼠胸腺指数、脾脏指数和抑瘤作用;采用流式细胞术测定外周血中CD4+和CD8+T淋巴细胞,并计算其比值;用微量样本多指标流式蛋白定量方法(CBA)和小鼠Th 1/Th2/Th 17细胞因子CBA分析试剂盒测定小鼠血清中白细胞介素-2 (Interleukin-2,IL-2)、肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF)、干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)、白细胞介素-4 (Interleukin-4,IL-4)、白细胞介素-6 (Interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-10 (Interleukin-10,IL-10)和白细胞介素-17A (Interleukin-17A,IL-17A)的含量.结果:肺癌模型中,与B1组比较,N1组外周WBC数量、胸腺指数、脾脏指数、CD4+/CD8+T比值、TNF、IFN-γ、IL-2和IL-17A均显著降低(P＜0.05),血清中IL-10的含量增高(P＜0.05);与N1组比较,C1组外周WBC数量、胸腺指数、脾脏指数、CD4+/CD8+T比值、TNF、IFN-γ、IL-2和IL-17A均显著提高(P＜0.05),血清中IL-10的含量降低(P＜0.05),平均肿瘤重量较低(P＜0.05);而A1组外周WBC数量、胸腺指数、脾脏指数、CD4+/CD8+T比值、TNF、IFN-γ、IL-2和IL-17A明显降低(P＜0.05),2组平均肿瘤重量没有差别.免疫抑制模型中,与B2组比较,N2组外周WBC数量、胸腺指数、脾脏指数、CD4+/CD8+T比值、TNF、IFN-γ、IL-2和IL-17A均显著降低(P＜0.05),血清中IL-10的含量增高(P＜0.05);与N2组比较,C2组外周WBC数量、胸腺指数、脾脏指数、CD4+/CD8+T比值、TNF、IFN-γ、IL-2和IL-17A均显著提高(P＜0.05),血清中IL-10的含量降低(P＜0.05).结论:LNT和PSP联合使用对Lewis肺癌小鼠有免疫促进作用和抗肿瘤作用.

目的 建立蒽酮-硫酸法测定复方木鸡颗粒(云芝提取物、核桃楸皮、山豆根、菟丝子)中粗多糖的含有量.方法 以葡萄糖为对照品,在626 nm波长处测定粗多糖含有量.结果 葡萄糖在10～ 60 μg/mL范围内呈良好的线性关系(r=O.999 1),平均加样回收率为98.1％,RSD为2.6％.结论 该方法简便稳定,可控性强,重复性好,可用于复方木鸡颗粒的质量控制.

目的:臭牡丹(CBS)在传统中医药中运用广泛,具有一定的抗菌性和提高人体免疫功能的功效,本文探讨CBS对地塞米松(DXMS)所致免疫抑制小鼠免疫功能的影响,为后续综合开发免疫性疾病新药提供参考.方法:通过不同浓度CBS提取物对致病大肠杆菌等6种细菌进行体外抑菌实验,根据外观和抑菌效果,选择合适供试品,用不同浓度CBS对免疫抑制小鼠进行腹腔注射,以云芝多糖(CVP)为阳性对照,检测腹腔免疫器官指数、巨噬细胞吞噬功能及T淋巴细胞亚群等免疫指标.结果:发现CBS水提物在125 g/L时,对致病大肠杆菌等6种细菌均有理想的抑制作用;CBS提纯处理后在10～20 g/L浓度范围内提高免疫器官指数及增强巨噬细胞吞噬功能,对剂量有依赖性,对免疫器官有明显保护作用,同时高浓度CBS使免疫抑制小鼠降低CD4+T细胞数量、升高CD8+T细胞数量、CD4+/CD8+T细胞数量明显降低至正常值,表明了高浓度CBS可使DXMS导致的细胞免疫功能正常化.结论:CBS可提高免疫抑制小鼠免疫器官及细胞的免疫功能,且效果优于CVP.

目的 选育符合《中国药典》标准的高产优质云芝药材新品种.方法 采用系统选育法,从野生云芝菌株中选育出一株综合性状优良的云芝菌株——云芝1号.然后同时以当地主栽品种“云20”和本课题组同期系统选育的云芝菌株“云24”为对照,对“云芝1号”进行连续两年的多点品比试验.结果 “云芝1号”在两年的多点品比试验中遗传性状表现稳定一致,生产周期约118 d,绝对生物转化率可达到7％以上,内在品质均符合《中国药典》(2010年版)标准,浸出物和多糖含量两项关键指标均显著高于对照.结论 “云芝1号”是国内第一个通过审定的云芝新品种,具有适应性强、生产周期较短、产量高、内在品质优的特点,可满足市场对优质云芝药材的需求,具有较大的推广价值.

目的 比较灵芝、枸杞、云芝、黄芪、香菇五种植物粗多糖对C57BL/6小鼠骨髓来源树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BMDC)的体外诱导功能.方法 采用GM-CSF体外诱导和培养C57BL/6小鼠BMDC细胞,体外培养6 d后,分别加入灵芝、枸杞、云芝、黄芪和香菇五种植物粗多糖进行培养,24 h后,采用流式细胞术检测细胞表面CD80、CD86及MHCII分子的表达,采用ELISA检测BMDC细胞培养上清中细胞因子IL-6、IL-12和TFN-α的含量.结果 云芝多糖可显著诱导BMDC细胞表明的CD80、CD86和MHCII分子表达上调,并刺激BMDC细胞释放IL-6,IL-12p40和TFN-α.枸杞多糖、灵芝多糖和香菇多糖仅显著性的诱导IL-6释放增加.结论 云芝多糖对BMDC具有较强的诱导作用,具有潜在的疫苗佐剂活性.

叔丁基脂氢过氧化物（tbooH）、脂质过氧化修饰的低密度脂蛋白（mLDL）可引起巨噬细胞免疫功能损伤，显示明显的时间和浓度效应。tbooH （10μmol/L）和mLDL（1μmol/L）培养4小时使巨噬细胞Fc受体阳性率分别降至24.8%和46.3%（对照85.3%），吞噬阳性率分别降至44.1%和72.6%（对照92.1%）。当tbooH浓度增至100μmol/L作用1小时，可使巨噬细胞Fc受体阳性率和吞噬阳性率分别降至17.5%（对照87.8%）和42.1%（对照94.5%）。云芝多糖对脂质过氧化物引起的巨噬细胞免疫功能损伤显示明显的保护作用。

目的 探究复方木鸡颗粒中药效组分组成的各配伍组诱导肝癌HepG2细胞凋亡的药效学研究,筛选出药效组分最佳配伍比例,并将形成的新配伍复方与原复方进行药效差异性对比,从而较全面分析复方木鸡颗粒中药效组分诱导肝癌HepG2细胞凋亡的配伍规律,阐明其抗肝癌作用的药效物质基础.方法 以复方木鸡颗粒6种药效组分为研究对象,设计并制作该微流控芯片,并结合均匀设计方法,以细胞凋亡坏死率为评价指标,开展药效组分最佳配伍比例研究,进而形成新的组分配伍复方.结果 经灌注给药48 h后,复方木鸡颗粒各药效组分配伍组的细胞凋亡坏死率与空白组相比,均有显著性差异(P<0.05),且药效组分核桃楸皮黄酮,菟丝子黄酮,山豆根生物碱,山豆根多糖,菟丝子多糖,云芝多糖最佳配伍比例是4.35:5.80:15.03:10.73:1.36:1.20,并通过药效差异性对比试验,证明两者在相同剂量时,药效结果无显著性差异.结论 本研究通过与微流控芯片技术的结合,初步揭示了复方木鸡颗粒药效组分抗肝肿瘤的组分组成规律,遵循中药组方理念,为抗肝肿瘤类新药的开发及临床联合用药奠定前期实验基础.