目的 通过在人胚肾-293T(human embryo kidney-293T,HEK-293T)细胞中过表达岩藻糖转移酶 2(fucosyl-transferases 2,FUT2)基因,进而催化诺如病毒受体人类组织血型抗原(histo-blood group antigen,HBGA)的形成,构建介导诺如病毒和受体发生相互作用的细胞系.方法 构建FUT2 慢病毒质粒,采用Lipofectamine 2000 将FUT2慢病毒质粒及pMD.2G和psPAX2 包装质粒共转染HEK-293T细胞,收获慢病毒颗粒.慢病毒颗粒感染对数生长期的HEK-293T细胞,嘌呤霉素加压筛选获得HEK-293T/FUT2 细胞系.PCR鉴定FUT2 基因是否整合到基因组中,RT-qPCR检测HEK-293T/FUT2 细胞FUT2 mRNA转录水平,流式细胞术分析HEK-293T/FUT2 细胞HBGAs的表达,间接免疫荧光法分析HEK-293T/FUT2 细胞与诺如病毒病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)的结合活性.结果 成功构建了序列正确的慢病毒质粒PLVX-IRES-Puro-FUT2,并获得了慢病毒颗粒.慢病毒颗粒感染HEK-293T细胞后,通过嘌呤霉素加压筛选获得了HEK-293T/FUT2 细胞系,PCR验证显示,FUT2 基因成功整合到HEK-293T细胞基因组中.HEK-293T/FUT2 细胞FUT2 mRNA水平提高了 330 倍.99.9%的HEK-293T/FUT2 细胞表达H2 型人类组织血型抗原.GI.1 重组诺如病毒VLP可以与HEK-293T/FUT2 细胞产生很好的结合反应,EC50为 2.007 μg/mL.结论 建立了H2 型人类组织血型抗原稳定高表达的HEK-293T细胞系,并基于该细胞系初步建立了GI.1 型重组诺如病毒VLP结合活性评价方法.

轮状病毒(rotavirus，RV)是当前全球婴幼儿严重腹泻的首要原因，已发现RV通过其结构蛋白VP8识别并结合人类组织血型抗原(histo-blood group antigens，HBGAs)，FUT2基因决定了HBGAs在上皮组织的表达及体液中的分泌。由于FUT2基因突变导致功能酶活性丧失的个体，称为非分泌者，不能在黏膜及体液表达和分泌HBGAs，研究发现非分泌者可抵抗RV引起的腹泻。微生物组成受宿主遗传调控，数百个基因位点参与调控人体肠道微生物组成，其中包括FUT2。无菌动物模型可降低RV感染率，提示肠道细菌与RV感染过程相关。这些研究揭示了分泌状态直接影响个体对RV的易感性，而其对肠道微生物组成的影响也会间接调节人体对RV的敏感性。该文综述了FUT2和肠道微生物组成与RV易感性的相关性，以期为RV感染个性化防治开辟新途径。

目的:利用Ph.D.-12噬菌体展示肽库筛选诺如病毒(NoV)的抗原模拟表位.方法:包被与GⅡ.4、GⅡ.6、GⅡ.17型NoV具有高特异性及中和能力较强的单链可变片段抗体(scFv),用Ph.D.-12噬菌体展示肽库进行3轮生物淘选.ELISA鉴定淘选所得噬菌体与scFv的结合活性及其与NoV P蛋白的竞争作用;阳性克隆测序后进行生物信息学分析,合成多肽鉴定其抗原性.结果:发现1段与GⅡ.6 VP1区同源性较高的氨基酸序列"MG-D-W",综合分析提示其可能为GⅡ.6 NoV的抗原模拟表位,且合成的包含"MG-D-W"的多肽可竞争抑制P蛋白与人类组织血型抗原(HBGAs)受体的结合.结论:"MG-D-W"是与NoV单链抗体高亲和力的肽段,可能模拟了GⅡ.6 NoV与scFv结合的抗原表位.

目的 异种器官移植是解决人类器官供体短缺的有效途径,但其面临严重的免疫排斥反应,包括血型差异导致的超急性排斥反应.建立稳定、便捷、可靠的猪血型鉴定方法,可快速筛选合适血型的供体猪用于异种器官移植研究.方法 选择版纳微型猪近交系、滇南小耳猪、巴马香猪为研究对象,用DNA提取试剂盒提取3种品系猪的血液、口腔颊黏膜和胎儿成纤维细胞中DNA,通过PCR法对猪ABO血型同源基因EAA第7号内含子附近的目标片段进行扩增.采用血液凝集反应检测猪前腔静脉全血加入抗A、B抗体后的溶血现象,采用免疫组织化学法检测猪心、肝、脾、肺、肾组织中A抗原表达水平,采用免疫荧光法检测猪口腔黏膜中A抗原表达水平.通过对比不同方法测定猪血型的结果,验证PCR方法的稳定性和可靠性,以此建立一种基于PCR的便捷式猪血型鉴定方法.结果 首先,69头版纳微型猪近交系、7头滇南小耳猪和34头巴马香猪的血液PCR结果显示AO血型20头,AA血型66头,OO血型24头.47头滇南小耳猪的胎儿成纤维细胞PCR结果显示47个胎儿均为OO血型,其中8头基因编辑克隆猪的口腔黏膜PCR结果与供体胎儿成纤维细胞的PCR结果一致,均为OO血型;8头野生型猪(2头版纳微型猪近交系、4头滇南小耳猪和2头巴马香猪)的口腔黏膜PCR结果均与血液PCR鉴定结果一致.然后,从中随机挑选11头版纳微型猪近交系、4头滇南小耳猪和2头巴马香猪进行血液凝集反应验证,结果均与血液及口腔黏膜PCR鉴定结果一致.而且,对1头版纳微型猪近交系和2头巴马香猪的心、肝、肺、肾、脾组织进行免疫组织化学分析,结果与血液PCR鉴定和血液凝集反应结果相一致.最后,采集其中2头版纳微型猪近交系和1头巴马香猪的口腔黏膜样本进行免疫荧光检测,结果与血液PCR鉴定结果一致.结论 通过采集胎儿细胞和活体猪的口腔黏膜样本进行PCR检测,可准确、高效地鉴定出猪的血型,为异种器官移植供体猪的血型筛选提供了一种简便方法.

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目的 探索通过灌胃攻毒的方法建立树鼩诺如病毒(Human Noroviruses,HuNoVs)感染动物模型的可行性.方法 分别灌胃两组6月龄树鼩攻毒GII.4型HuNoVs 2010和Sydney株粪便悬液,对照组灌同等体积的PBS(每组5只),攻毒后连续7 d观察体征和腹泻症状,每隔24 h采集粪便应用RT-PCR法检测HuNoVs RNA,处死树鼩后采集小肠组织,HE染色观察病理变化并应用免疫组化法检测病毒抗原,并对树鼩唾液进行人类组织血型抗原(histoblood group antigen,HBGAs)鉴定分析.结果 树鼩经HuNoVs灌胃攻毒后未出现明显感染症状和腹泻,粪便标本中未检测到HuNoVs RNA,小肠组织中未检测到HuNoVs抗原,病理变化不明显,树鼩唾液中HBGAs抗原为阴性.结论 树鼩对HuNoVs不易感原因可能与其不分泌表达HBGAs和普通级饲养繁殖条件等有关,HuNoVs感染树鼩小动物模型仍有待进一步探索.

目的 了解手足口病(hand,foot,and mouth disease,HFMD)与人类组织血型抗原(histo-blood group antigens,HBGA)的相关性.方法 收集2014年7月至2015年7月于南京医科大学附属儿童医院住院的HFMD患儿的咽拭子和唾液标本各170份.同期收集健康儿童的唾液和咽拭子标本各100份.采用Geneaid病毒RNA提取试剂盒II提取咽拭子中的病毒RNA并进行病原学鉴定.并应用ELISA检测唾液中ABO组织血型抗原和Lewis组织血型抗原的分布情况.结果 170份HFMD患儿咽拭子中肠道病毒71型(enterovirus 71,EV-A71)65份(38.2%),柯萨奇病毒(coxsackievirus,CV)A组16型(CV-A16)12份(7.1%),其他CV93份(54.7%).在100份健康儿童咽拭子中,未检出相关病毒.在HFMD患儿中,AB血型患儿所占比例低于健康对照组,差异有统计学意义(x2=4.759,P=0.029);而表达Lea+b+的HFMD患儿所占比例高于健康对照组,表达Lea-b+患儿所占的比例低于健康对照组,差异均有统计学意义(x2分别为76.689和96.405,均P<0.01).EV-A71组中表达Lea+b+患儿所占比例低于非EV-A71组,差异有统计学意义(x2=20.820,P<0.01);HFMD组表达Lex+y-患儿所占的比例高于健康对照组,差异有统计学意义(x2=4.201,P=0.040).结论 表达AB抗原的儿童更不容易患HFMD,表达Lea+b+、Lex+y-的儿童更容易患HFMD;而在HFMD患儿中,表达Lea+b+的患儿更不容易感染EV-A71.

为了进一步规范活体肾移植的临床技术操作,中华医学会器官移植学分会组织器官移植学专家从活体肾移植的基本原则、活体供肾者的医学评估和选择、活体肾移植受者的评估、活体供肾切取术等方面,制订本规范.

为了进一步规范ABO血型不相容亲属活体肾移植技术操作,中华医学会器官移植学分会组织器官移植学专家从ABO血型不相容肾移植(ABOi-KT)受者的选择、亲属活体供者的选择、受者的术前准备、免疫抑制剂的使用、凝血功能紊乱的监测与治疗、并发症及处理等方面,制订本规范.

2016年7月25日,经国家标准化管理委员会批准,输血医学增设为临床医学二级学科.输血医学的重要职能就是保障和指导临床安全、科学、精准输血,减少输血不良反应.血小板具有复杂的抗原系统,包括与其它组织或细胞所共有的抗原,如ABO血型系统抗原和人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA);血小板特异性抗原(human platelet antigen,HPA);与单核/巨噬细胞及有核红细胞共有的GPⅣ/CD36抗原等.妊娠、输血、器官移植等均可诱导机体产生血小板抗体,包括HLA抗体、HPA抗体和CD36抗体等.