目的:了解滇西鼠疫疫源地野外鼠形动物斑点热群立克次体（spotted fever group Rickettsiae，SFGR）和莫氏立克次体（ Rickettsia mooseri， R.mooseri）感染情况。 方法:应用磁珠法提取2015-2016年自滇西梁河县、剑川县和玉龙县鼠疫疫源地捕获的2 512只野外鼠形动物肝脏样本DNA，选用热休克蛋白groEL基因引物进行巢式PCR扩增。分别采用DNAStar 7.1软件和美国国家生物技术信息中心（NCBI）的GenBank进行基因序列剪切、拼接和Blast同源性比对分析，同时采用DNAStar 7.1软件和MEGA 6.0软件构建系统发育树。结果:感染SFGR的野外鼠形动物有锡金小鼠、斯氏家鼠、灰麝鼩和臭鼩鼱（各1只），总感染率为0.16%（4/2 512）；未检出 R.mooseri感染。梁河县和剑川县鼠疫疫源地野外鼠形动物SFGR感染率分别为0.49%（3/611）和0.10%（1/1 029），玉龙县鼠疫疫源地野外鼠形动物未检出SFGR感染。同源性分析显示，SFGR阳性样本的基因序列与参考序列同源性为95.45%~100.00%；4份阳性样本间groEL基因部分序列高度相似，同源性达89.60%~97.40%。序列进化分析显示，梁河县鼠疫疫源地的3个SFGR阳性样本序列聚在同一分支，同源性达94.40%~97.40%；剑川县鼠疫疫源地的1个阳性样本序列单独为1个分支。 结论:滇西鼠疫疫源地野外鼠形动物SFGR感染率较低，未发现 R.mooseri感染。

背景:脾脏具有储血、造血和免疫功能,随着年龄增长,脾脏结构退变、功能衰退引起免疫系统功能受损,进而加速机体衰老进程,而高活性脐带间充质干细胞治疗树鼩脾脏衰老尚未见报道.目的:探讨高活性脐带间充质干细胞对树鼩脾脏衰老的干预作用及机制.方法:从剖腹产的新生树鼩脐带组织中分离、培养和获得高活性脐带间充质干细胞,三系分化试剂盒检测成脂、成骨、成软骨分化能力,流式细胞术检测细胞周期和表面标志物.以感染复数值分别为100,120,140,160,180,200的吉凯基因绿色荧光蛋白转染第2代高活性脐带间充质干细胞,筛选最佳转染条件;转染后的第4代高活性脐带间充质干细胞尾静脉输注给老年治疗组树鼩,青年对照组和老年模型组不予特殊处理,治疗4个月时取脾脏组织,苏木精-伊红染色观察脾脏组织结构;β-半乳糖苷酶染色检测衰老相关半乳糖苷酶活性;免疫组织化学染色检测p21和p53蛋白表达水平;Ki67和PCNA免疫荧光染色检测细胞增殖活性;免疫荧光染色检测脾脏自噬蛋白分子Beclin1和APG5L/ATG5表达水平;活性氧荧光染色检测脾脏组织的活性氧含量;CD3免疫荧光染色检测总T淋巴细胞比例变化;酶联免疫吸附实验检测脾脏组织白细胞介素1β和转化生长因子β1分泌水平;DAPI复染细胞核观察绿色荧光蛋白标记的高活性脐带间充质干细胞在脾脏组织的分布情况.结果与结论:①高活性脐带间充质干细胞呈核小短梭形、鱼群样生长,G0/G1期占比大,具有向成脂、成骨和成软骨分化潜能.②感染复数为140且转染72 h为吉凯基因绿色荧光蛋白标记树鼩高活性脐带间充质干细胞的最佳条件.③与老年模型组相比,老年治疗组树鼩脾脏组织细胞排列紧密,白髓面积增加(P<0.01),红白髓界线清晰,生发中心占比无显著差异(P>0.05),脾脏组织衰老相关半乳糖苷酶活性水平降低(P<0.001),衰老蛋白分子p21和p53表达下调(P<0.001),增殖相关分子Ki67和PCNA表达上调(P<0.001,P<0.05),自噬相关分子Beclin1和APG5L/ATG5表达上调(P<0.001),活性氧含量降低(P<0.001),CD3+T细胞比例增加(P<0.05),衰老相关分泌表型中白细胞介素1β分泌水平降低(P<0.001),转化生长因子β1分泌水平无显著差异(P>0.05).与青年对照组相比,以上检测指标在老年治疗组中均有显著差异(P<0.05).④冰冻组织切片观察可见老年治疗组树鼩脾脏组织中有绿色荧光蛋白标记的绿色荧光细胞.结果表明:静脉输注高活性脐带间充质干细胞可迁移至脾脏组织,抑制活性氧产生,下调衰老相关蛋白分子表达,诱导细胞自噬,促进细胞增殖,降低慢性炎症,进而改善脾脏组织结构和功能.

目的 建立树鼩永生化角膜基质细胞(corneal stromal cells,CSCs)系,并探讨其在病毒感染中的应用.方法 利用组织块贴壁培养法分离培养树鼩原代CSCs,将携带SV40T基因的慢病毒转染细胞后,再挑取单克隆进行传代培养,传至 50 代以上进行形态学观察并与 40 代细胞形态进行比较,波形蛋白(vimentin)和SV40T基因免疫荧光鉴定、核型鉴定、细胞增殖曲线测定.用单纯疱疹病毒 1 型(herpes simplex virus-1,HSV-1)(McKrae株)、寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)(GZ01 株)、登革病毒Ⅱ型以及甲型流感病毒H1N1(PR8 株)在该细胞上进行病毒感染实验.结果 传至 50 代以上的树鼩永生化CSCs呈梭形,细胞形态结构与 40 代相比仍较好.vimentin和SV40T基因免疫荧光表达阳性.增殖曲线结果显示:细胞生长旺盛,第4～5 天时处于对数生长期.原代细胞核型的染色体数稳定为 62 条,而永生化细胞第 21、56 代突变为64 条且保持稳定.病毒感染实验显示:树鼩永生化CSCs对HSV-1(McKrae株)、ZIKV(GZ01 株)、登革病毒Ⅱ型以及H1N1(PR8 株)病毒敏感,产生较高感染滴度,分别为 1.32×105、5.62×106、2.69×107、7.76×104 CCID50/mL.结论 成功建立了树鼩永生化CSCs细胞系,提示该细胞系可用于单纯疱疹病毒、寨卡病毒、登革病毒和甲型流感病毒感染眼角膜疾病的作用机制及抗病毒药物的研究.

目的 以线粒体细胞色素C氧化酶亚基(COI)基因为目的基因,利用DNA条形码技术对未知鼠样本进行鉴定.方法 采用夹夜法对九江市武宁县宋溪镇某村的鼠密度进行调查,经形态学初步鉴定后,以捕获的 1 只无法明确鉴定的大型鼠样本为对象,提取基因组DNA并采用COI基因通用引物BatL5310 和R6036R进行PCR扩增及测序,将测序结果在NCBI网站进行BLAST比对,采用MEGA7 软件选择最大似然法构建系统发育树.结果 共捕获小型兽类7 只,密度为3.38%,经形态学鉴定有褐家鼠2 只,黑线姬鼠2 只,臭鼩鼱2只,形态学初步鉴定为青毛巨鼠或小泡巨鼠的未知鼠1 只,提取的未知鼠样本DNA通过PCR成功扩增出COI基因目的条带,与NCBI基因库中小泡巨鼠(KP995219)序列同源性高达 100%,系统发育树显示该鼠样本与小泡巨鼠(KP995219、KP995203)处于同一分支,遗传距离分别为 0、0.0016,而青毛巨鼠(NC_036730)单独处于另一分支,遗传距离较远.结论 赣北地区首次报道小泡巨鼠,采用COI基因的DNA条形码技术可快速、准确的进行鼠种鉴定,有助于弥补非常见鼠形态学鉴定困难的不足.

在常规饲养5年的老龄雌性瑶山亚种树鼩中发现1例背腹部近髋关节处自发一大肿块.大体观察发现,该瘤体巨大,表面皮毛完整,未发生溃烂;该患病树鼩行动不便,精神状态尚可.异氟烷(2%～4%)吸入麻醉后,采血法安乐死,解剖剥离瘤体,肿瘤边界不清,向周围组织浸润.HE染色结果显示,肿瘤组织可见小灶多形性及大片脂肪母细胞,多形性肉瘤区域主要由异型的上皮样细胞组成,核分裂易见;脂肪母细胞大小显著不同,可见较多多形性脂肪母细胞,细胞体积大,核深染、畸形,边缘见压迹,胞质见多泡状脂滴.免疫组织化学染色结果显示,肿瘤细胞vimentin阳性,小灶多形性脂肪母细胞S-100阳性,Ki-67较高比例阳性.结合HE染色及免疫组织化学结果,综合诊断该例树鼩的自发肿瘤为多形性脂肪肉瘤.

树鼩是我国正在开发的具有自主知识产权的实验动物新品种,随着树鼩应用范围越来越广泛,实验树鼩的标准化重要性日益凸显.本文调研了 1978 至 2020 年树鼩微生物感染的文献,梳理了树鼩的微生物感染状况,以期为建立标准化的实验树鼩种群提供参考.

为明确长爪鼩鼱(Sorex unguiculatus)和细鼩鼱(Sorex gracillimus)的种群系统地理关系以及亚种分化,本文测定了我国东北地区长爪鼩鼱 11个样本和细鼩鼱 17个样本的Cyt b基因序列,并结合GenBank下载32个长爪鼩鼱和22个细鼩鼱的Cytb基因序列进行整合分析.两个物种不同地理种群表现出不同的地理分化格局:长爪鼩鼱系统进化树结果显示,其分子系统关系与地理分布无相关性;细鼩鼱系统进化树结果显示,中国东北的样本聚为一个独立的进化支,俄罗斯的样本和日本北海道的样本聚为一个进化支.中介网络分析也观察到相似分化格局.中性检验支持长爪鼩鼱在近期可能发生过种群扩张,而细鼩鼱未经历过数量急剧扩张.上述结果支持长爪鼩鼯无亚种分化,细鼩鼱可能包含两个地理亚种,分别对应我国东北的地理种群以及俄罗斯远东(马加丹南部到滨海边疆区,包括萨哈林岛)和日本北海道的地理种群.

目的 通过 D-半乳糖诱导法建立树鼩衰老模型,为卵巢衰老的研究提供模型参考方案.方法 (1)筛选青年树鼩 8 只,随机分为对照组(n=4)与模型组(n=4).(2)模型组按 8g/kg的剂量颈背部皮下注射 D-半乳糖 5 个月,采集卵巢,液氮冻存以及 4%多聚甲醛固定.(3)HE 染色观测卵巢组织结构;免疫组织化学染色观测衰老相关标志分子蛋白表达;Ki67 染色观测增殖活性;Tunel 染色观测细胞凋亡.结果 (1)对照组树鼩卵巢组织髓质与间质界限明显,细胞排列整齐,可见原始、初级、次级和成熟卵泡,有少量闭锁卵泡;模型组树鼩卵巢组织结构散乱,局部只见原始、初级卵泡,有大量闭锁卵泡.(2)模型组衰老相关标志分子 P53、P21、P16 蛋白表达水平明显高于对照组.(3)模型组细胞增殖活性显著低于对照组.(4)模型组卵巢细胞凋亡率显著高于对照组.结论 D-半乳糖可诱导卵巢组织结构散乱,卵泡闭锁,使细胞增殖活性减弱,凋亡率增加.

目的 完善树鼩心脏基础研究数据,探讨树鼩作为实验动物在心脏研究中的应用价值.方法 选用 10 只成年健康树鼩,雌雄各半,使用心电图机对树鼩进行肢体导联心电图检测,经皮无创超声心动图进行树鼩超声心动图检测,观察树鼩心脏结构并测定心功能,心脏取材后HE染色观察心脏组织形态.结果 (1)树鼩为窦性心律,心电图含P波、QRS波群、T波,与人正常心电图各波段组成一致,形态相似.(2)树鼩心脏含左右心房、左右心室共 4 个腔,二尖瓣频谱呈现E、A峰,通过超声心动图B型和M型检测,测定心脏左室壁厚度,获得树鼩射血分数(ejection fraction,EF)、短轴缩短率(fractional shorting,FS)等指标.(3)树鼩心室壁共 3 层,心内膜层、中层和心外膜层,心室壁肌纤维分浅、中、深 3 层,与人正常心肌分层一致.结论 树鼩心脏电生理、心脏功能、心脏结构与人类类似,具备用于建立人类心脏疾病研究动物模型的潜力.