目的:探讨人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10，PTEN）对子宫内膜腔上皮细胞极性的调控及对胚胎着床的影响。方法:通过实时荧光定量PCR、Western blotting、细胞免疫荧光实验比较非容受态子宫内膜腔上皮细胞HEC-1A与容受态子宫内膜腔上皮细胞RL95-2之间PTEN的表达及定位差异；PTEN干扰质粒转染HEC-1A细胞，检测紧密连接相关蛋白质表达水平，透射电子显微镜检测紧密连接结构，Transwell实验检测细胞运动能力，与绒毛膜癌细胞JAR共培养检测HEC-1A细胞与JAR细胞之间的黏附水平；向体外培养的HEC-1A细胞分别加入二甲基亚砜、17β-雌二醇、孕酮、17β-雌二醇+孕酮，检测卵巢激素对PTEN表达的影响。结果:相较HEC-1A细胞，RL95-2细胞 PTEN基因及蛋白质表达水平均显著降低（ P均=0.003）；PTEN主要定位于RL95-2细胞核，而在HEC-1A细胞中，PTEN主要定位于细胞质；与质粒载体对照组相比，敲降 PTEN基因后，HEC-1A细胞紧密连接相关蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-4表达水平显著降低（ P<0.001， P=0.038， P<0.001），细胞间紧密连接长度降低（ P=0.046），迁移与侵袭能力增强（ P均<0.001），与JAR细胞之间黏附率增强（ P=0.016）；与空白对照组（二甲基亚砜组）相比，17β-雌二醇组、孕酮组及17β-雌二醇+孕酮组的PTEN蛋白表达水平均显著降低（ P均<0.001），17β-雌二醇+孕酮组的PTEN蛋白表达水平显著低于17β-雌二醇组和孕酮组（ P均=0.001），孕酮组与雌二醇组的PTEN蛋白表达水平差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:不同容受状态的子宫内膜细胞PTEN表达存在差异，雌二醇和孕酮可能通过抑制PTEN在子宫内膜的表达，进一步调控子宫内膜上皮细胞间紧密连接结构及细胞极性，从而增强子宫内膜容受性。

目的 探索二甲双胍诱导人胎盘绒毛癌细胞系JAR凋亡的作用机制.方法 将JAR细胞分为对照组和二甲双胍处理组(终浓度5、10、20、40、80 mmol/L)处理24 h后选取合适的药物浓度.激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡,分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和免疫蛋白印记(Western blot)检测凋亡相关基因AMPK,p-AMPK,mTOR,Caspase-3,Bcl-2和Bax的变化趋势.结果 40 mmol/L的二甲双胍处理能够引发JAR细胞凋亡,并且激活 AMPK 的磷酸化并下调mTOR的蛋白水平;同时上调Caspase-3和Bax的mRNA及蛋白水平,并且下调Bcl-2的mRNA和蛋白表达,降低Bcl-2和Bax的蛋白水平比例.结论二甲双胍可能是通过AMPK/mTOR和Caspase-3及Bcl-2/Bax两个通路的共同作用诱导JAR细胞发生凋亡.

目的 探讨热休克蛋白90(HSP90)抑制剂17-烯丙胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)对人绒毛膜癌JAR细胞系细胞周期和凋亡的影响及其相关机制.方法 体外培养人绒毛膜癌JAR细胞系,经不同浓度的17-AAG作用24 h后,采用TUNEL细胞凋亡法及Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期;Real-time PCR法和Western blotting法检测血管内皮生长因子(VEGF)、cyclinD1、cyclinA1和Caspase-3在mRNA和蛋白水平的表达情况.结果 17-AAG对JAR细胞生长具有明显的抑制作用,并存在浓度依赖性.各组细胞发生G2期阻滞及明显凋亡;5、10、20 mg/L 17-AAG作用24 h后,各组细胞增殖相关基因cyclinD1mRNA及蛋白表达水平相对于0 mg/L 17-AAG处理组(对照组)均下调,VEGF蛋白表达水平相对于0 mg/L 17-AAG处理组(对照组)下调,且下调程度与处理浓度成正比,而凋亡相关基因Caspase-3的mRNA未出现明显上调,但其在蛋白表达水平上调.结论 17-AAG能够抑制JAR细胞增殖活力,诱导细胞凋亡,17-AAG可能通过下调VEGF的表达,产生抗肿瘤血管新生作用;可能通过下调cyclinD1使细胞周期发生G2期阻滞;且可能通过上调Caspase-3诱导细胞凋亡.

目的 探讨17-烯丙胺-17-脱甲氧格尔得霉素(17-AAG) 对人绒癌JAR 细胞迁移和黏附的影响.方法 MTT 实验: 以5、10、20、40 μg/mL 浓度的17-AAG 处理绒癌JAR 细胞(实验组) ,设立空白对照组,空白对照组为与实验组相同体积的培养基,培养24 h后观察细胞形态,MTT 法检测细胞增殖抑制率,并计算IC50.划痕治愈实验: 以5、10 μg/mL 浓度的17-AAG 及空白对照组处理绒癌JAR 细胞(实验组) ,进行细胞划痕治愈实验,划痕后即刻及48 h后,拍照记录细胞划痕治愈情况,并计算划痕治愈率.Transwell实验:以5、10、20、40 μg/mL 浓度的17-AAG 处理绒癌JAR 细胞(实验组) ,设立空白对照组,培养12 h后,Transwell小室迁移实验检测细胞迁移能力.Western blot实验: 以5、10、20、40 μg/mL 浓度17-AAG 处理绒癌JAR 细胞(实验组) ,设立空白对照组,培养24 h后,蛋白免疫印迹(Western blot) 法检测细胞迁移黏附相关蛋白表达水平.结果 MTT 实验结果 显示,与空白对照组比较,实验组细胞增殖抑制率明显增加,呈浓度依赖性(P ＜ 0. 05) ,24 h后IC50均值为11. 951;划痕治愈实验结果 显示,与对照组比较,实验组划痕覆盖面积明显降低(P ＜ 0. 05);Transwell实验结果 显示,与空白对照组比较,实验组细胞穿膜数目逐渐降低,呈浓度依赖性(P ＜ 0. 05);Western blot实验结果 显示,与空白对照组比较,实验组E-cadherin蛋白表达水平显著增加(P ＜ 0. 05) ,同时N-cadherin、β-catenin蛋白表达水平降低(P ＜ 0. 05) .结论 17-AAG 能够抑制人绒癌JAR细胞增殖,并通过EMT 信号通路上调E-cadherin蛋白,下调N-cadherin、β-catenin蛋白的表达抑制人绒癌JAR 细胞的迁移和黏附.

目的 探讨二氢杨梅素(DMY) 联合依托泊苷(VP16) 对绒毛膜癌细胞JAR的抑制作用及其相关机制.方法 体外培养JAR细胞,设空白对照组、DMY组、VP16组以及DMY与VP16联合(DMY + VP16) 组.MTT法检测各组细胞增殖情况;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术分析各组细胞的凋亡率;克隆形成实验检测细胞生存能力;Western blotting法检测凋亡抑制蛋白Bcl-2、细胞凋亡抑制蛋白2(c-IAP2) 表达水平.结果 MTT检测结果显示,与空白对照组比较,DMY组、VP16组及DMY + VP16组在24 h和48 h时间点的细胞存活率均下降,且DMY+ VP16组细胞存活率下降最为明显;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术结果显示,与对照组相比各实验组凋亡率均有增高,DMY + VP16组凋亡率明显高于各单独用药组;克隆形成实验结果显示,对于JAR细胞,实验组的克隆球数目均少于对照组,且DMY + VP16组克隆球数目最少;对于正常肝脏HL7702细胞,DMY组与对照组相比无明显差异,VP16组与DMY + VP16相比亦无明显差异;Western blotting实验结果显示,与对照组相比,无论DMY和VP16单独还是联合使用均可下调Bcl-2、c-IAP2蛋白表达,同时DMY + VP16组下调作用最明显.结论 二氢杨梅素联合依托泊苷明显增强对绒毛膜癌细胞JAR的生长抑制作用,联合使用可以减少化疗药物VP16的用量,其抑制肿瘤细胞作用可能与下调Bcl-2、c-IAP2蛋白的表达有关.

[目的]探讨microRNA-506 (miR-506)在绒毛膜癌中对绒毛膜癌细胞的作用及其作用机制.[方法]通过qRT-PCR检测绒毛膜癌和正常早孕绒毛临床标本中miR-506及caveolin-1表达量及相关性;将绒毛膜癌细胞JEG3和JAR按照miR-506 mimic (mimic)、miR-506 in-hibitor (Inhi)、miR-506 mimic negative control(NC)和空白对照组(Blank)分别进行转染,通过MTr实验、Transwell实验和流式细胞术检测miR-506对绒毛膜细胞作用;通过双荧光素酶报告实验、qRT-PCR和Western blot检测miR-506、caveolin-1及相关蛋白的表达变化.[结果]与正常早孕绒毛相比,miR-506在绒毛膜癌组中表达显著降低(P＜0.05),并与caveolin-1表达呈负相关.MiR-506过表达明显抑制绒毛膜癌细胞的增殖、侵袭并促进凋亡.双荧光素酶报告实验表明miR-506过表达显著抑制野生型荧光素酶活性,qRT-PCR和Western blot结果显示miR-506过表达显著抑制caveolin-1表达,进而抑制相关蛋白表达.[结论]MiR-506可能通过靶向caveolin-1抑制绒毛膜癌细胞的增殖和侵袭.

目的 探讨二氢杨梅素(DMY)对绒毛膜癌(绒癌)JEG-3及JAR细胞增殖和迁移能力的影响.方法 MTT法检测不同浓度的二氢杨梅素(0 mg/L,20 mg/L,40 mg/L,60 mg/L,80 mg/L)作用一定时间后,对绒癌JEG-3和JAR细胞增殖能力的影响;细胞划痕实验和Transwell法检测不同浓度二氢杨梅素(0 mg/L,40 mg/L,60mg/L,80 mg/L)分别作用绒癌JEG-3细胞及JAR细胞一定时间后,对其迁移能力的影响;Real-time PCR和Westernblotting方法分别检测不同浓度二氢杨梅素(0 mg/L,40 mg/L,60 mg/L,80 mg/L)作用绒癌JEG-3及JAR细胞后,基质金属蛋白酶2(MMP-2) mRNA和蛋白表达水平的影响.结果 不同浓度二氢杨梅素作用绒癌JEG-3和JAR细胞24 h和48 h后,随着二氢杨梅素浓度增加,对JEG-3和JAR细胞增殖抑制作用增强(P＜0.05).二氢杨梅素作用绒癌JEG-3及JAR细胞后,显著抑制细胞迁移能力,且具有浓度依赖性(P＜0.05).不同浓度二氢杨梅素作用JEG-3和JAR细胞后,MMP-2的mRNA和蛋白表达水平明显下降(P＜0.05).结论 二氢杨梅素能够抑制JEG-3及JAR细胞的增殖能力且具有浓度依赖性,同时二氢杨梅素可能通过下调绒癌JEG-3及JAR细胞中MMP-2 mRNA和蛋白的表达,抑制绒癌细胞的侵袭迁移.

目的 分析中期因子(MK)在绒毛膜癌(以下简称绒癌)中的表达情况,探讨MK表达与绒癌病理特征的关系.方法培养人绒癌细胞株JEG-3、JAR,选择对数生长期的JEG-3、JAR细胞进行实验,采用Matrigel体外侵袭试验检测细胞体外侵袭能力,RT-PCR法检测细胞MK mRNA表达水平,Western blot法检测MK蛋白表达水平.选取32例绒癌患者的绒癌组织标本,采用免疫组织化学法检测绒癌组织MK蛋白表达情况,分析其与临床病理特征的关系,包括患者年龄、肿瘤临床分期、国际妇产科联盟(FIGO)预后评分等.结果JEG-3细胞穿膜数明显多于JAR细胞(P<0.05),即JEG-3细胞体外侵袭能力强于JAR细胞.培养12、24、48h时,JEG-3细胞MK mRNA表达水平均高于低侵袭性JAR细胞(均P<0.05).JEG-3细胞MK蛋白表达水平高于JAR细胞(P<0.05).绒癌组织中MK蛋白表达阳性率在<40岁与≥40岁患者间的差异无统计学意义(P>0.05),临床分期为Ⅲ～Ⅳ期的患者高于Ⅰ～Ⅱ期的患者(P<0.05),FIGO预后评分高危的患者高于低危的患者(P<0.05).结论MK在绒癌组织中高表达,且与绒癌细胞侵袭能力有关,其表达阳性率随绒癌分期的升高而增高,可作为判断绒癌恶性程度和预后的重要生物标志物.

目的 建立人绒毛膜癌裸鼠原位移植瘤模型.方法 培养人绒毛膜癌细胞系JAR,制备JAR单细胞悬液,给5只8周龄BALB/c裸鼠经皮下注射建立皮下移植瘤模型.待裸鼠皮下成瘤后,无菌条件下取瘤组织并切成1 mm3组织块,通过手术方式植入10只10周龄BALB/c裸鼠子宫腔内,裸鼠濒死状时4％水合氯醛(10 g/kg)腹腔注射麻醉处死,观察子宫成瘤及腹腔转移情况.解剖取子宫原位移植瘤、腹腔内转移瘤、腹腔淋巴结及其他脏器组织标本,通过组织病理学检查进行鉴定.结果 10只BALB/c裸鼠中共有7只裸鼠子宫内可见移植瘤肿块形成,其中2只可同时观察到子宫移植瘤和腹膜转移瘤.在病理学形态和结构上,皮下移植瘤模型、原位移植模型和腹膜转移瘤的瘤细胞与人绒毛膜癌细胞系JAR一致.结论 成功建立人绒毛膜癌JAR细胞的BALB/c裸鼠原位移植瘤模型.

目的 探讨miR-191-5p靶向调节AT富集序列特异性结合蛋白1(SATB1),对子痫前期(pre-eclampsia,PE)滋养层细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及细胞迁移的影响.方法 收集滋养层细胞系HTR-8/SVneo及人绒毛膜癌细胞系JEG-3、JAR.分组转染后qRT-PCR及Western blot检测细胞中miR-191-5p及SATB1的表达;Transwell检测细胞迁移;qRT-PCR及Western blot检测迁移侵袭相关因子MMP-9、MMP-2的表达;Western blot检测上皮间质转化相关因子的蛋白表达.结果 miR-191-5p在HTR-8/SVneo细胞系中高表达,SATB1低表达.Western blot检测发现过表达miR-191-5p后,SATB1蛋白水平表达下调,抑制miR-191-5p的表达后表达上调(均P<0.05).过表达miR-191-5p,细胞增殖、迁移能力降低,MMP-2及MMP-9表达下调,抑制细胞EMT的发生,抑制miR-191-5p表达则结果相反.而抑制SATB1表达后,与过表达miR-191-5p结果一致,过表达SATB1后结果与抑制miR-191-5p结果一致.结论 MiR-191-5p可靶向调节SATB1,降低细胞迁移能力,并抑制HTR-8/SVneo细胞EMT参与PE的发生.