目的:探讨中性粒细胞胞外诱捕网（neutrophil extracellular traps，NETs）对人羊膜上皮细胞增殖和凋亡的影响。方法:取正常妊娠足月择期剖宫产孕妇术前外周血，体外提取中性粒细胞并诱导生成NETs。体外培养人羊膜上皮细胞（WISH细胞）并分为4组：（1）对照组：不经过任何处理；（2）NETs组：用NETs（500 ng/ml）刺激WISH细胞；（3）NETs+SB203580（p38激酶抑制剂）组：用SB203580（5 μmol/L）预处理WISH细胞30 min后加入NETs（500 ng/ml）；（4）SB203580组：只加入SB203580。处理48 h后，分别通过细胞增殖实验、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）检测实验和流式细胞技术检测各组细胞增殖比率、细胞上清LDH水平和细胞凋亡率。4组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD -t检验。 结果:（1）细胞增殖情况：NETs组细胞增殖比率低于对照组［（9.379±0.775）%与（36.560±1.208）%，LSD -t=20.78， P<0.001］；NETs+SB203580组WISH细胞增殖比率［（27.920±0.926）%］高于NETs组（LSD -t=14.18， P<0.001）。（2）LDH：NETs组细胞上清LDH水平高于对照组（1.518±0.038与0.274±0.004，LSD -t=44.25， P<0.05），NETs+SB203580组LDH水平（0.857±0.009）低于NETs组（LSD -t=23.51， P<0.001）。（3）细胞凋亡情况：NETs组细胞凋亡率较对照组增加［（14.290±0.141）%与（10.110±0.044）%，LSD -t=21.76， P<0.001］；NETs+SB203580组［（10.500±0.218）%］细胞凋亡率低于NETs组（LSD -t=19.70， P<0.001）。 结论:NETs可能通过p38/丝裂原活化蛋白激酶信号通路抑制人羊膜上皮细胞的增殖，并促进其凋亡。

急慢性创面严重威胁患者的生命健康和生活质量，因此创面修复是近年来国内外学者研究的热点问题。随着材料学与组织工程的发展，越来越多由天然成分制备的生物材料被用于创面修复的基础研究和临床治疗，此类材料可作为创面组织再生的模板，诱导自体细胞黏附、迁移，促进细胞外基质沉积，具有广阔的临床应用前景。该文对创面修复领域中目前研究热门的天然生物材料的特点及其应用进展作一综述，旨在为新型创面敷料及组织工程皮肤研发提供思路。

理想的支架材料可对组织器官病损进行形态、结构和功能进行重建，因此在组织工程领域受到广泛关注。天然生物材料理论和技术的迅速发展，使其逐渐成为再生医学领域的研究热点。天然生物材料具有高仿生性和良好的生物相容性，且来源广泛，非常适合用作组织工程的支架材料。按成分和原料来源大致分为蛋白质类生物材料（胶原、明胶、丝素和纤维蛋白）、糖类生物材料（纤维素、几丁质/壳聚糖、海藻酸盐和琼脂糖）、糖胺聚糖类（透明质酸、硫酸软骨素）和脱细胞基质移植物（羊膜、小肠黏膜下层、肌腱）。不同的支架材料具有独特的天然结构和理化性质。蛋白质类生物材料多通过聚合形成网状结构影响细胞迁移分化，且有一定的机械性能，可单独制成支架或配合其他合成材料使用；糖类生物材料因高比表面积可负载大量液体，但其机械性能较差，因此常被以凝胶形式控释细胞和生长因子配合其他材料应用在肌腱组织工程中；糖胺聚糖类生物材料具有抗炎、黏弹润滑以及高水合特性，多配合合成材料增加其生物相容性和亲水性。相比天然高分子材料，脱细胞基质不但具有更相仿的细胞外结构和营养成分，而且具有一定的机械性能，可对组织器官病损进行更好的形态、结构和功能重建，因此在组织工程中越来越被受到重视。不同材料的巧妙组合，使肌腱修复展现出更好的效果，也使天然生物材料具有更广阔的临床前景和应用价值。

患者男性，38岁，因"全身多处化学物烧伤5.5 h"入院。患者于5.5 h前在工厂工作时发生爆炸，致患者头面颈、躯干及四肢被化学物质（丙烯腈、三氯乙酰氯）烧伤，后出现意识不清，呼之无应答，急诊行"左颈内静脉穿刺置管术，快速补液，亚硝酸异戊酯解毒，留置导尿，气管切开"等治疗后，考虑"全身多处88% Ⅱ~Ⅲ度化学烧伤、吸入性损伤"，病情危重，收入本科。入院查体：体温36.8℃，脉搏96次/min，呼吸频率18次/min，血压108/59 mmHg，意识不清，双眼睑烧伤，球结膜缺血坏死，角膜基质深层水肿，混浊明显，瞳孔无法观察，气管切开，双肺呼吸音粗，无干湿性啰音，心律尚齐，肢端冷，创面位于头面颈、胸腹背臀及四肢，大部分成片状，部分散在，创面皮肤大部分呈灰色或棕黑色，部分苍白，肿胀明显，总面积约88%。进行辅助检查，血气分析：葡萄糖14.40 mmol/L，钾离子3.10 mmol/L，氯离子165 mmol/L，血浆乳酸2.9 mmol/L，高铁血红蛋白分数：2.1%，氧合血红蛋白分数：83.7%，酸碱度：7.28，二氧化碳分压：41 mmHg，氧分压60 mmHg，碱剩余-7.2 mmol/L，氧饱和度：86%，标准碳酸氢根浓度18.1 mmol/L。血常规：白细胞计数17.1×10 9/L，中性粒细胞比率77.1%。生化全套：丙氨酸氨基转移酶21U/L，天门冬氨酸氨基转移酶43 U/L，肌酐73 μmol/L，总胆红素15.2 μmol/L，乳酸脱氢酶287 U/L，肌酸激酶180 U/L，肌钙蛋白T 0.02ng/mL。头颅、胸部、全腹部CT：未见明显异常。入院诊断：(1)化学烧伤全身多处88%(Ⅱ~Ⅲ度)；(2)吸入性肺损伤；(3)眼烧伤；(4)气管切开；(5)呼吸衰竭；(6)休克；(7)丙烯腈中毒。入院后给予快速扩容补液，第1个24 h补充晶体8000 mL、胶体4000 mL、水分2000 mL；监测尿色及尿量，目标维持每小时至少0.5 mL/kg以上的清亮尿液；清创包扎，清除皮肤毒物残留。患者烧伤创面大，病情危重，予哌拉西林他唑巴坦针4.5静滴抗感染，每8小时1次，并予创面培养，余护胃、化痰等对症治疗。解毒方面则采用亚甲蓝联合硫代硫酸钠针治疗丙烯腈造成的氰化物中毒的方案。亚甲蓝（D1 400 mg、D2 600mg）、硫代硫酸钠针25.6 g分次静推解毒，患者高铁血红蛋白升高及血乳酸慢慢下降（图1）。入院第三天患者高铁血红蛋白降至正常，血压平稳，停硫代硫酸钠和亚硝酸异戊酯吸入，并予以甲强龙0.1 g每天１次静滴控制炎症反应。患者神志转清，病情稳定后前后行"四肢深度创面切削痂+自体皮浆、异体皮移植术"、"四肢残余创面扩创MEEK植皮术"，行"颈部疤痕切除松解+脱细胞异体真皮、自体大张刃厚皮移植术及多次双眼羊膜移植、眼睑缝合术及睑外翻畸形矫正术"，经过顺利，病情好转，后康复出院。

37岁，孕16 +周，G 2P 1A 0，因高龄无创产前检测结果提示胎儿4q35.1-q35.2区微缺失前来我院行产前诊断。孕妇既往体健，2014年剖宫产一健康男孩。孕期无胸闷、气促、双下肢浮肿等不适。孕早期超声检查未见异常。孕妇平均红细胞容积：75.5 fl(参考值82~100 fl)，血红蛋白A2：1.9%(参考值2.7~3.5%)，地中海贫血基因未见异常；血型：O型，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、致畸病毒五项IgM 、凝血功能、甲状腺功能筛查均阴性。夫妻身体健康，否认近亲结婚、家族遗传病和传染病史、农药化学物品接触史、手术外伤输血史和药物食物过敏史。丈夫无不良嗜好史，常规优生遗传检查未见异常。本研究经本院伦理委员会批准(202101221)。经患者签署知情同意书后，羊膜腔穿刺抽取送检羊水行染色体微陈列分析(chromosomal microarray analysis, CMA)、荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)和QF-PCR检测。CMA检测结果：Xq28(154 522 989-155 233 098)×3，arr[GRCh37] 4q35.1q35.2(184 132 838-190 957 460)×1，发现2处拷贝数变异(copy number variation，CNV)异常，Xq28位置发生重复，片段大小约710 kb；4q35.1-q35.2位置发生缺失，片段大小约6.83 Mb( 图1)。

由于角膜供体材料严重短缺，穿透角膜移植术及角膜内皮移植术的临床广泛开展受到严重制约，其根本原因在于健康角膜内皮的增生能力有限。随着组织工程技术和细胞工程技术不断发展，组织工程角膜研究已取得一定进展，应用组织工程技术体外培养高密度、具备健康内皮功能的角膜内皮细胞进行移植是当前研究的热点。组织工程角膜内皮技术研发的关键在于种子细胞、载体材料和移植方式的选择。目前，国内外大量研究的种子细胞来源包括人角膜内皮细胞、干细胞、血管内皮细胞及人羊膜上皮细胞等。常见的载体材料包括羊膜、脱细胞角膜基质、后弹力层、晶状体前囊膜等。体外培养的细胞采用穿透角膜移植术、角膜内皮移植术或前房注射细胞的方式进行移植。本文从角膜内皮种子细胞来源、移植载体选择以及角膜内皮移植方法等方面就组织工程角膜内皮移植研究进展进行综述，总结目前研究面临的问题并展望其前景。

患者，男性，41岁。2021年10月29日因双眼疼痛难忍加重3个月余，于保定市第一中心医院眼科就诊。主诉近3个月余于多家医院就诊，给予加替沙星、更昔洛韦、小牛血凝胶、玻璃酸钠、生长因子、普拉洛芬及自体血清等多种眼药治疗(用法用量不详)，症状无缓解且逐渐加重。曾于外院多次行细菌及真菌微生物检查，结果均为阴性。既往肾衰竭病史4年，2型糖尿病病史1年。双眼裸眼视力眼前手动，右眼眼压18 mmHg(1 mmHg＝0.133 kPa)，左眼眼压16 mmHg，双眼泪河极窄，结膜充血，角膜上皮大片剥脱，中央角膜坏死溶解，有溃疡灶，右眼较左眼严重。见图1。经疼痛数字等级量表评估，结果显示患者疼痛程度为8分，即重度疼痛，无法安静就坐，全身大汗。泪液分泌试验检查结果显示双眼均为1 mm/5 min。免疫相关化验检查结果显示类风湿因子、红细胞沉降率、抗链O及C反应蛋白等均为阴性。经进一步询问，主诉既往有外院住院史，并行盐酸丙美卡因滴眼液表面麻醉剂(生产厂家不详)点眼缓解疼痛，此后频繁使用此药点眼，>10次/d，3个月余。结合患者用药史、眼部表现及全身病史，诊断为双眼药物毒性角膜炎，双眼角膜溃疡，双眼重度干眼。经专家组讨论，停用患者目前眼部用药，当日给予双眼角膜溃疡清创联合双眼病灶羊膜覆盖手术治疗，并给予妥布霉素地塞米松膏(比利时s.a.ALCONCOUVERURn.v.公司生产)，2次/d；小牛血去蛋白提取物眼用凝胶(沈阳兴齐眼药股份有限公司生产)点双眼，3次/d；术后第3 d双眼羊膜脱落，但患者自觉疼痛缓解，见图2。遂再次给予双眼羊膜覆盖治疗，术后10 d双眼羊膜再次脱落，患者疼痛缓解明显。经疼痛数字等级量表再次评估，结果显示患者疼痛程度为5分，即中度疼痛，可安静平卧或坐位，疼痛持续但可耐受。2021年12月5日复查，患者裸眼远视力右眼0.05，左眼0.08；右眼眼压17 mmHg，左眼眼压15 mmHg，双眼泪河仍窄，结膜充血减轻，角膜上皮仍可见大片剥脱，中央角膜坏死区好转，溃疡灶愈合。考虑角膜上皮持续缺损未愈，随后给予患者第3次羊膜覆盖治疗，同时加用0.05%环孢素滴眼液(沈阳兴齐眼药股份有限公司生产)点眼，2次/d，以改善眼表微环境。7 d后患者再次因右眼疼痛难忍就诊，右眼视力光感，左眼0.1，右眼结膜混合充血，角膜黄绿色脓苔覆盖，眼内结构不明，左眼前节无变化。见图3。进一步行右眼病灶清创联合病原微生物检测，CX23型电子显微镜(日本奥林巴斯株式会社生产)下细菌涂片可见细菌阳性，细菌培养结果显示绿脓杆菌阳性。眼部Mylab Seven型彩色多普勒超声检查(意大利百胜集团生产)结果提示前房及后节无明显炎性混浊，暂排除眼内炎可能。再次追问患者回家用药史，患者自诉除医嘱用药，其双眼仍在自行点盐酸丙美卡因滴眼液，但用药次数较治疗前明显减少，且其部分术后滴眼液瓶盖丢失，瓶口外漏表面污浊，有明显的点眼操作不洁情况。由于右眼出现严重细菌感染，再次调整治疗方案，频点加替沙星眼用凝胶(沈阳兴齐眼药股份有限公司生产)及妥布霉素滴眼液(比利时s.a.ALCON－COUVREURn.v公司生产)治疗1 d无效，遂急诊行右眼穿透性角膜移植联合白内障吸除后房型人工晶状体植入术。左眼因持续角膜上皮不愈合和角膜溃疡于右眼术后15 d亦行左眼穿透性角膜移植手术，术后常规加替沙星眼用凝胶和妥布霉素滴眼液治疗。右眼角膜移植术后1个月右眼裸眼视力0.1，左眼裸眼视力0.2；右眼眼压15 mmHg，左眼眼压14 mmHg；双眼角膜植片透明，缝线在位，前房清晰，瞳孔散大欠圆，右人工晶状体正位，左眼晶状体混浊。见图4。

子宫内膜是一种具有高度自我修复能力的组织,它会随着体内雌孕激素水平的变化发生周期性生长、脱落与再生,但受到损伤的子宫内膜会丧失自我修复能力,进而导致宫腔粘连(intrauterine adhesions,IUA)的发生. IUA也称为Asherman综合征[1] ,是由于子宫内膜基底层损伤导致子宫内膜纤维化的病理过程,最终使得子宫腔部分或完全粘连.

背景:骨缺损的修复和治疗难度较高,其临床治疗方案多样,Masquelet技术是一种成功率高、疗效可靠且已经应用于临床的治疗方法,但是该技术目前机制并未完全明确,且该技术在临床应用上还存在一些问题,技术仍然不是特别成熟.目的:对现阶段在Masquelet技术改进的研究中所应用的生物材料进行整理与归纳,为该技术的进一步发展提供思路与参考.方法:通过计算机在中国知网和PubMed数据库中检索2013年1月至2022年11月的相关文献,中文检索词为"Masquelet技术,膜诱导技术,诱导膜,生物材料,骨缺损";英文检索词为"Masquelet technique,Induced membrane technique,Induced membrane,biomaterial,Bone defect",对最终纳入符合标准的58篇文献进行综述.结果与结论:①Masquelet技术的出现与不断发展为治疗骨缺损提供了一种治疗策略,有些研究者将研究方向放在研究出更好的间隔材料、自体骨的替代材料和与诱导膜具有相同性能的膜材料上,以便于将两阶段术式简化,缩短治疗时间和减轻患者的痛苦.②硫酸钙、硅胶、聚乳酸-羟基乙酸共聚物和聚丙烯在动物实验或者临床应用中可以替代聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥形成诱导膜,且各有优势,但是与预想不同,常见的钛和聚乙烯醇海绵反而不能在这一步中作为聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥的替代材料.③自体骨的替代材料多种多样,同种异体骨、β-磷酸三钙、可吸收性明胶海绵、α-硫酸钙半水合物、生物活性玻璃、钛和钽等材料都在临床或基础实验中证明了其可以在术式第二阶段中减少自体松质骨植骨量的能力,其中同种异体骨、β-磷酸三钙、生物活性玻璃、钛和钽等材料可替代自体骨作为移植物,其余材料需与自体骨混合使用.④仿生诱导膜、人羊膜、人脱细胞真皮、聚四氟乙烯甚至自体皮质骨通过实验证实了其与诱导膜具有相似性能.⑤现阶段,众多生物材料在该技术中的应用与研究大多数仍存在于基础研究阶段,尚未应用于临床实践或大范围推广,但是上述材料可为Masquelet技术机制的探究、术式的改进与临床应用提供更充分的理论依据和新思路.

背景:前交叉韧带损伤越来越多见,传统治疗方式主要是前交叉韧带重建,随着组织工程研究在临床广泛运用,韧带组织工程治疗前交叉韧带损伤已成为目前研究的热点.目的:探讨人羊膜间充质干细胞和人脱细胞羊膜支架的体外生物相容性.方法:采用酶消化法获得人羊膜间充质干细胞并对其进行鉴定.采用酶消化法和化学去污法对新鲜人羊膜进行脱细胞处理,以苏木精-伊红染色以及免疫荧光染色检测细胞成分移除情况以及细胞外基质破坏情况.取第3代人羊膜间充质干细胞,分别使用人脱细胞羊膜浸提液(实验组)与普通L-DMEM/F12培养基(对照组)培养, CCK-8法检测两组细胞增殖能力.人羊膜间充质干细胞与人脱细胞羊膜共培养14 d后,扫描电镜与倒置显微镜观察人脱细胞羊膜上的细胞黏附及生长情况.结果与结论:①倒置相差显微镜观察显示人羊膜间充质干细胞呈漩涡状、贴壁生长,高表达波形蛋白,低表达CK-19,具有成骨、成脂、成软骨诱导分化能力;②苏木精-伊红染色显示人脱细胞羊膜上皮细胞及间充质干细胞已完全移除,细胞外基质成分无明显破坏;免疫荧光染色显示Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原均呈阳性表达;③人脱细胞羊膜浸提液对人羊膜间充质干细胞无细胞毒性,不影响其增殖活性;④倒置相差显微镜及扫描电镜均显示人脱细胞羊膜可以促进人羊膜间充质干细胞增殖及黏附,二者具有良好的生物相容性.