目的 观察新型灭螺剂10％氯代水杨胺制剂(chlorosalicylicamide,LDS)对曼氏血吸虫(Schistosoma mansoni)中间宿主光滑双脐螺(Biomphalaria glabrata)和藁杆双脐螺(Biomphalaria straminea)的作用效果,为该灭螺剂的现场应用提供实验基础.方法 将10％LDS配制成有效浓度分别为0.400 0、0.200 0、0.100 0、0.050 0、0.025 0、0.012 5 mg/L的系列标准溶液,在实验室浸泡光滑双脐螺和藁杆双脐螺,观察在不同浓度溶液中浸杀上述2种双脐螺24、48、72 h后螺的死亡情况,统计各组死亡率并计算半数致死浓度(LC50)和相对毒力指数,同时设立50％氯硝柳胺乙醇胺盐(50％wet-table power of niclosamide ethanolamine salt,WPN)为药物对照组,并设立空白对照组(去氯水).结果 LDS有效浓度在0.100 0 mg/L及以上时,WPN有效浓度在0.200 0 mg/L及以上时光滑双脐螺和藁杆双脐螺浸泡24、48、72 h后死亡率均能达到100％.光滑双脐螺浸泡在LDS系列浓度溶液中,24、48、72hLC5.分别为0.047 95、0.046 52、0.037 10 mg/L;光滑双脐螺浸泡在WPN系列浓度溶液中,24、48、72 h LC5.分别为0.063 48、0.057 05、0.057 05 mg/L.藁杆双脐螺浸泡在LDS系列浓度溶液中,24、48、72 h LC50分别为0.012 35、0.013 99、0.008 40 mg/L;藁杆双脐螺浸泡在WPN系列浓度溶液中,24、48、72 h LC50分别为0.058 95、0.025 71、0.023 75 mg/L.以LC50值较大的WPN为标准药物,其相对毒力指数为1.00,LDS对光滑双脐螺浸杀24、48、72 h后的相对毒力指数分别为1.32、1.23、1.54;LDS对藁杆双脐螺浸杀24、48、72 h后的相对毒力指数分别为4.77、1.84、2.83.使用LDS浸杀上述2种双脐螺24、48、72 h后,光滑双脐螺存活数均高于藁杆双脐螺,差异有统计学意义(x2=8.044、5.263、4.658,P＜0.05).结论 相较于传统灭螺药物WPN,10％LDS对光滑双脐螺和藁杆双脐螺杀灭效果更佳,尤其对藁杆双脐螺作用效果更为敏感,具有替代作用.

为了探究池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)信号转导及转录激活因子STAT基因的初步功能,通过RACE-PCR技术首次在池蝶蚌中获得STAT的cDNA全长序列(GenBank ID:KY123702),命名为HsSTAT,HsSTAT全长为2752 bp, 5′-非编码区(5′UTR)为121bp, 3′-非编码区3′UTR为264 bp, 开放阅读框(ORF)为2367 bp, 编码788个氨基酸; 生物信息学分析发现该蛋白结构域主要由STAT_int、STAT_alpha、STAT_bind、SH2四个经典保守性功能域组成; 缬氨酸最多占12.9%.色氨酸使用频率为100%.二级结构中α螺旋最多占46.83%、β折叠最少占8.5%.HsSTAT蛋白亲水性指数为- 0.531, 是亲水性蛋白.预测到棕榈酰化修饰位点1个, 小泛素相关修饰序列3个, 磷酸化修饰位点22个.系统进化树分析显示, HsSTAT与光滑双脐螺STAT5B和盘鲍STAT5聚在一支;亚细胞定位结果显示HsSTAT定位于血细胞的细胞质中;荧光原位杂交结果显示HsSTAT主要在细胞核.qPCR结果显示HsSTAT在所有的组织中均有表达, 其在组织中的表达量在肝胰腺中最高, 在血细胞中最低.细胞增殖实验显实验组增殖率为119%,高于对照组.实验已克隆到HsSTAT的全长序列,HsSTAT可能为STAT5亚型, 具有促进SMCC-7721细胞增殖的功能, 推测具有池蝶蚌细胞的信号转导功能参与池蝶蚌的先天免疫.

目的 建立光滑双脐螺神经系统五羟色胺和多巴胺的超高液相色谱-三重四级杆串联质谱(UPLC MS/MS)定量检测方法.方法 在纯甲醇溶液中破碎光滑双脐螺神经系统,经过2次高速离心获得含有目标检测物的上清液,通过ACQUITY UPLC BEH Amide色谱柱、Waters TQ-XS系列质谱检测器,采用ESI源、正离子模式上机检测.结果 光滑双脐螺神经系统五羟色胺UPLC MS/MS检测限为0.03 ng/ml,定量限为0.1 ng/ml;多巴胺UPLC MS/MS检测限为0.05 ng/ml,定量限为0.15 ng/ml.在1~40 ng/ml添加范围内,五羟色胺的回收率为90.68%~94.72%;多巴胺的回收率为91.68%~96.12%.结论 建立的UPLC MS/MS方法操作简单、检测结果稳定、重复性良好,可用于光滑双脐螺神经系统五羟色胺和多巴胺的定量检测分析和研究.

目的 比较光滑双脐螺自体受精和异体受精的繁殖力差异,观察昼夜和光照对产卵的影响,以及成螺对缺水缺食的耐受性,旨在为现场控制该螺提供依据.方法 采用实验室条件下培育的光滑双脐螺,分成自体受精组和自然受精组,比较两组受精螺的产卵能力、所产卵的发育和孵化、幼螺生长发育等状况.将成螺分成全天光照组、全天避光组、日间光照和夜间避光(自然环境状态)组、日间避光和夜间光照组等4种饲养环境,比较各组螺的产卵情况.将光滑双脐螺成螺分别暴露在相对湿度为0、65％、87％和100％的不同环境中,观察其生存情况.采用快速烘干法去除光滑双脐螺成螺软体内水分,观察螺体重分别减轻10％、20％、30％、40％、50％、52％、55％、57％、60％和70％后的存活率.结果 在25℃环境条件下,自体受精组和自然受精组螺15 d的产卵数分别为(8.77±16.92)枚/螺和(149.71±142.28)枚/螺,两组间差异有统计学意义(t=0.999999,P<0.01);所产螺卵的孵化率分别为50.1％和78.9％(χ2=18.18,P<0.01),生殖成熟率分别为19.3％和3.8％(χ2=11.83,P<0.01),两组间差异均有统计学意义.全天光照组、全天避光组、日间光照和夜间避光组、日间避光和夜间光照组等4种饲养环境下产卵量分别为(999.07±444.00)、(602.93±510.68)、(944.07±392.53)、(577.07±279.76)枚/d;其中日间光照和夜间避光组的日间和夜间产卵量分别占10.1％和89.9％,提示该螺产卵以夜间为主;但光照可改变其昼夜节律性.光滑双脐螺成螺在相对湿度分别为0、65％、87％和100％的25℃环境中的最长生存时间分别为7、70、150 d及100 d,而缺食对照组为50 d.光滑双脐螺成螺软体脱水率为10％、20％、30％、40％、50％、52％、55％、57％、60％和70％时,存活率分别为100％、100％、100％、100％、70％、30％、0、0、0、0.结论 光滑双脐螺可通过异体受精或自体受精完成生殖过程;自体受精螺的繁殖力弱于异体受精螺,但其生殖成熟率高于异体受精螺.光滑双脐螺对缺水缺食具有一定的耐受性,提示光滑双脐螺孳生区旱季后仍存活的螺对当地螺种群的维持及曼氏血吸虫病传播具有重要意义.

目的 研究氯硝柳胺对光滑双脐螺氧化磷酸化的影响,探讨氯硝柳胺的杀螺机制.方法 用线粒体提取试剂盒提取光滑双脐螺成螺线粒体,考马斯蓝染色法检测提取线粒体蛋白含量,用线粒体复合体Ⅳ活性检测试剂盒检测提取过程中组织破碎液、丢弃上清和线粒体悬液中复合体Ⅳ活性以评价提取线粒体的纯度.用线粒体复合物活性检测试剂盒提取光滑双脐螺的线粒体复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ,每种复合物各分成0.2μg/ml、1.0μg/ml组和二甲基亚砜(DMSO)组,分别加入终浓度为0.2和1.0μg/ml的氯硝柳胺、0.5％DMSO,分别测定不同波长处的吸光度(A值),计算复合体的活力值.在96孔板中每孔加入蛋白浓度为33μg/ml的线粒体悬液,分别加入终浓度为0.2和1.0μg/ml的氯硝柳胺(0.2μg/ml组和1.0μg/ml组)或0.5％DMSO(DMSO组),测定25℃条件下10、20、30 min的A520值,计算线粒体膜通透性转运孔(mPTP)开放度.在96孔板中每孔加入含终浓度为5μg/ml的JC-1染料、蛋白浓度为0.1 mg/ml的线粒体悬液,0.2、0.4、0.6、0.8、1.0μg/ml组分别加入终浓度为0.2、0.4、0.6、0.8和1.0μg/ml的氯硝柳胺,氰化羰基-3-氯苯腙(CCCP)组加入20μg/ml的CCCP作阳性对照组,DMSO组加入0.5％的DMSO作阴性对照组,在激发光485 nm、发射光590 nm、25℃条件下连续检测荧光强度30 min.组间比较采用单因素方差分析.结果 提取获得的线粒体总蛋白浓度为(4.24±0.11)mg/ml,组织破碎液、丢弃上清和线粒体悬液中电子传递链复合物Ⅳ活性分别为(14.88±1.80)、(5.60±0.96)、(24.19±3.53)U/mg,3组间差异有统计学意义(F=46.922,P<0.01).0.2μg/ml组、1.0μg/ml组与DMSO组的复合物Ⅰ活性分别为(523.98±120.37)、(559.74±238.48)、(796.64±218.79)U/mg;复合物Ⅱ各组活性分别为(3.70±0.36)、(3.54±1.90)、(5.47±2.18)U/mg;复合物Ⅲ各组活性分别为(6.03±0.79)、(5.01±0.80)、(5.82±0.69)U/mg;复合物Ⅳ各组活性分别为(31.20±3.99)、(32.08±3.20)、(30.82±4.21)U/mg;复合体Ⅴ各组活性分别为(22.38±3.83)、(23.08±6.50)、(25.84±6.86)U/mg.0.2μg/ml组、1.0μg/ml组线粒体复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ活性与DMSO组差异均无统计学意义(F=1.658、1.215、1.181、0.138、0.298,P>0.05).加入氯硝柳胺10 min时,0.2μg/ml组、1.0μg/ml组和DMSO组mPTP开放度分别为(0.040±0.005)、(0.041±0.002)、(0.039±0.036);加入20 min时分别为(0.069±0.008)、(0.067±0.002)、(0.065±0.015);加入30 min时分别为(0.090±0.009)、(0.088±0.002)、(0.087±0.012).加入氯硝柳胺10、20、30 min,0.2μg/ml组、1.0μg/ml组与DMSO组mPTP开放度差异均无统计学意义(F=0.025、0.094、0.060,P>0.05).相对于DMSO组(1.000),在加入氯硝柳胺15 min时0.6、0.8和1.0μg/ml组的线粒体膜电位分别为(0.874±0.008)、(0.843±0.018)、(0.773±0.027),均低于DMSO组(F=44.285,P<0.05);加入30 min时,0.2、0.4、0.6、0.8和1.0μg/ml组的线粒体膜电位分别为(0.951±0.051)、(0.886±0.022)、(0.766±0.019)、(0.746±0.016)、(0.675±0.021),除0.2μg/ml组,其余各组均低于DMSO组(F=125.738,P<0.01).结论 浓度低于1.0μg/ml的氯硝柳胺对光滑双脐螺线粒体电子传递链复合物活性无影响,也未造成线粒体膜通透性转运孔的开放,但可引起光滑双脐螺线粒体膜电位的剧烈下降,影响光滑双脐螺的氧化磷酸化过程.