寄生虫病仍然是全球最大的健康问题，给贫困地区造成巨大的经济负担。目前用于治疗原虫病和蠕虫病的药物存在一定缺陷，亟待研发更为有效的治疗药物。小檗碱最早从黄连的根茎中提取获得，是一类重要的抗炎药物。小檗碱的衍生物通过修饰小檗碱的结构位点获得，除了具有抗菌和抗微生物活性以外，小檗碱及其衍生物还具有显著的抗寄生虫活性。本文概括了小檗碱及其衍生物抗原虫（利什曼原虫、锥虫、刚地弓形虫、恶性疟原虫和柔嫩艾美尔球虫）和蠕虫（曼氏血吸虫、日本血吸虫、细粒棘球绦虫和犬弓首蛔虫）感染的作用，以期为相关研究工作者提供参考。

建立一种基于环介导等温扩增(LAMP)检测利什曼原虫的方法,为内脏利什曼病防治提供技术支持.根据利什曼原虫动基体5.8S核糖体RNA(GenBank:OP829811)序列,设计合成LAMP扩增特异性引物,建立LAMP法.用LAMP法检测恶性疟原虫、间日疟原虫、三日疟原虫、卵形疟原虫感染者和健康人血样DNA,以及日本血吸虫、刚地弓形虫和杜氏利什曼原虫前鞭毛体DNA,评价LAMP法的特异性评价特异性;杜氏利什曼原虫前鞭毛体DNA稀释为 1 ng/μl、100pg/μl、10pg/μl、1 pg/μl、100fg/μl、10fg/μl、1 fg/μl,确定LAMP法的最低检测限及有、无钙黄绿素对检测限的影响.用建立的LAMP法和实时荧光定量PCR(qPCR)检测不明原因发热患者和健康人血样;取阳性患者骨髓涂片吉氏染色后镜检,查找利什曼原虫无鞭毛体.建立的LAMP法可检出杜氏利什曼原虫DNA,反应结果呈绿色;检测4种疟原虫感染者和健康人血样以及日本血吸虫、刚地弓形虫DNA的结果均为阴性,呈橙色.LAMP法检测健康人血样46份,均呈阴性,无交叉反应,特异性高.65 ℃反应60min,未加和加钙黄绿素的检出限分别为1pg/μl和1 ng/μl,浊度速率峰值均值分别为0.194、0.120,加钙黄绿素后出现浊度时间较未加钙黄绿素平均延迟23.6 min.LAMP法和qPCR法检测发热患者血样67份的结果一致,均检出相同的2份阳性,2份阳性血样对应的骨髓涂片镜检均查见利什曼原虫无鞭毛体.本研究建立的了检测利什曼原虫的LAMP法操作简便、灵敏度和特异性均较高,检测结果可视,具有较好的推广应用价值.

外来生物入侵已成为我国不容忽视的生物安全问题.已入侵我国重要医学螺类包括小管福寿螺、褐云玛瑙螺、藁杆双脐螺、尖膀胱螺等.这些螺类可传播曼氏血吸虫或广州管圆线虫等病原体,对我国的公共卫生和民众健康构成严重威胁.近年来,研究人员开始关注肠道菌群与其宿主的相互作用,包括在生理功能、免疫调节和抵御病原体等方面的作用.本文综述了这四种我国重要入侵螺类肠道菌群的组成结构和多样性、塑造因素及与病原传播的关联,也探讨了相关研究所面临的挑战,为后续研发新型、绿色环保的入侵螺类及其传播疾病防控策略提供科学支撑和参考.

目的 观察新型灭螺剂10％氯代水杨胺制剂(chlorosalicylicamide,LDS)对曼氏血吸虫(Schistosoma mansoni)中间宿主光滑双脐螺(Biomphalaria glabrata)和藁杆双脐螺(Biomphalaria straminea)的作用效果,为该灭螺剂的现场应用提供实验基础.方法 将10％LDS配制成有效浓度分别为0.400 0、0.200 0、0.100 0、0.050 0、0.025 0、0.012 5 mg/L的系列标准溶液,在实验室浸泡光滑双脐螺和藁杆双脐螺,观察在不同浓度溶液中浸杀上述2种双脐螺24、48、72 h后螺的死亡情况,统计各组死亡率并计算半数致死浓度(LC50)和相对毒力指数,同时设立50％氯硝柳胺乙醇胺盐(50％wet-table power of niclosamide ethanolamine salt,WPN)为药物对照组,并设立空白对照组(去氯水).结果 LDS有效浓度在0.100 0 mg/L及以上时,WPN有效浓度在0.200 0 mg/L及以上时光滑双脐螺和藁杆双脐螺浸泡24、48、72 h后死亡率均能达到100％.光滑双脐螺浸泡在LDS系列浓度溶液中,24、48、72hLC5.分别为0.047 95、0.046 52、0.037 10 mg/L;光滑双脐螺浸泡在WPN系列浓度溶液中,24、48、72 h LC5.分别为0.063 48、0.057 05、0.057 05 mg/L.藁杆双脐螺浸泡在LDS系列浓度溶液中,24、48、72 h LC50分别为0.012 35、0.013 99、0.008 40 mg/L;藁杆双脐螺浸泡在WPN系列浓度溶液中,24、48、72 h LC50分别为0.058 95、0.025 71、0.023 75 mg/L.以LC50值较大的WPN为标准药物,其相对毒力指数为1.00,LDS对光滑双脐螺浸杀24、48、72 h后的相对毒力指数分别为1.32、1.23、1.54;LDS对藁杆双脐螺浸杀24、48、72 h后的相对毒力指数分别为4.77、1.84、2.83.使用LDS浸杀上述2种双脐螺24、48、72 h后,光滑双脐螺存活数均高于藁杆双脐螺,差异有统计学意义(x2=8.044、5.263、4.658,P＜0.05).结论 相较于传统灭螺药物WPN,10％LDS对光滑双脐螺和藁杆双脐螺杀灭效果更佳,尤其对藁杆双脐螺作用效果更为敏感,具有替代作用.

目的 建立一种灵敏、特异的基于环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)-规则成簇的间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)的日本血吸虫核酸检测方法.方法 以日本血吸虫SjR2基因片段作为靶序列,设计LAMP引物、gRNA和ssDNA探针,建立并优化LAMP-CRISPR反应体系.用LAMP-CRISPR方法检测含有SjR2靶序列的10倍梯度稀释的重组质粒,不同发育阶段日本血吸虫基因组DNA,以及肝片形吸虫、曼氏血吸虫、肥胖带绦虫、华支睾吸虫、似蚓蛔线虫、美洲钩口线虫、卫氏并殖吸虫、细粒棘球绦虫等蠕虫基因组DNA,评价其灵敏度和特异度.用LAMP-CRISPR方法分别检测15份血吸虫感染的阳性钉螺样本以及30份未感染的阴性钉螺样本,并与LAMP检测结果比较,以评价LAMP-CRISPR方法用于筛查感染性钉螺的应用效果.结果 建立的基于LAMP-CRISPR的核酸检测方法可特异性扩增并检测出日本血吸虫目的基因片段.其最适反应温度为37℃,反应体系中gRNA的最佳反应浓度为40 nmol/L,Cas12a蛋白的最佳反应浓度为40 nmol/L.该方法与肝片形吸虫等蠕虫基因组DNA均无交叉反应;以 10 倍梯度稀释的重组质粒为模板,该方法检测限为10拷贝/μL;此外,该方法能够准确检测出日本血吸虫虫卵、毛蚴、胞蚴、尾蚴、童虫及成虫基因组DNA.45份钉螺样本检测结果显示,LAMP-CRISPR与LAMP检测感染性钉螺的结果差异无统计学意义(χ2=0.05,P>0.05);与金标准比较,LAMP-CRISPR方法的灵敏度为100.00%(15/15),特异度为96.67%(29/30),LAMP方法的灵敏度为100.00%(15/15),特异度为93.33%(28/30).结论 本研究建立了一种灵敏性和特异性均较高的基于LAMP-CRISPR的日本血吸虫核酸检测方法,具有用于日本血吸虫感染快速检测及风险监测的潜力.

目的 建立一种可用于日本血吸虫特异性基因片段检测的重组酶介导的核酸等温扩增方法(RAA).方法 以日本血吸虫SjG28基因片段作为靶序列,根据RAA反应原理设计合成引物,建立并优化RAA反应体系.应用此方法与聚合酶链式反应(PCR)同时扩增梯度稀释的含不同拷贝数的SjG28基因片段TA克隆质粒及不同浓度的基因组DNA,以评价其敏感性;应用此方法检测曼氏血吸虫、似蚓蛔线虫、十二指肠钩口线虫基因组DNA及健康人血基因组DNA,以评价其特异性.结果 建立的RAA法可特异性扩增日本血吸虫中国大陆株成虫及虫卵基因组DNA,反应可在30 min内完成.以重组质粒为模板,RAA法最低可检出的质粒拷贝数为20个/μL;以基因组DNA为模板,RAA法最低可检测浓度为0.01 ng/μL.建立的RAA法以健康人全血基因组DNA及曼氏血吸虫成虫、似蚓蛔线虫、十二指肠钩口线虫基因组DNA为模板的扩增结果均为阴性.结论 本研究建立了一种反应快捷、敏感性和特异性均较高的RAA方法,其具有应用于日本血吸虫病基因诊断的价值.

例 1. 男,35 岁,因咳嗽 15 d 收入院. 既往体健. 有饮食不洁烧烤、火锅,进食生鱼片史. 入院查体:生命体征平稳,双肺呼吸音清,未闻及干湿啰音,双下肺呼吸音稍弱,心率 80 次/min,律齐,未闻及病理性杂音,心界不大. 腹平、软,无压痛及反跳痛,肝脾肋下未及,双下肢无水肿. 实验室检查:血 WBC 8. 51 × 109 / L, N 0. 62, L 0. 27, E 0. 06,E 计数 0. 48 × 109 / L;血生化、大小便常规、痰涂片、T-SPOT、ANCA + ENA 全套均未见明显异常. 肝胆胰脾及心脏 B 型超声未见异常. 胸部 CT 示:双侧胸腔积液. 行胸腔穿刺引流术,送检胸腔积液,常规:Ri-valta 阳性( + ),有核细胞计数 4. 95 × 109 / L,N 0. 58,L 0. 14,E 0. 28,其他无特殊细胞学检查示:E 较多,部分淋巴细胞及间皮细胞;胸腔积液生化:总蛋白 51. 10 g/ L,腺苷脱氨酶 10. 08 U/L,葡萄糖 5. 68 mmol/ L,氯 104. 10 mmol/ L,乳酸脱氢酶 478. 00 U/ L;胸腔积液. 4 d 后再次行胸腔穿刺引流,胸腔积液中 E 计数占 0. 50. 电子支气管镜检查未见异常,胸膜活检示慢性炎性反应. 寄生虫全套血清学检查示囊虫抗体阳性,血吸虫、肺吸虫、曼氏裂头绦虫、包虫、旋毛虫、华支睾吸虫、丝虫和弓形虫抗体均阴性. 眼底检查及颅脑 MR 均未见异常,建议患者进一步行胸腔镜检查,患者拒绝,遂予以诊断性抗寄生虫治疗,同时予以小剂量激素(5 mg 地塞米松静脉滴注 3d),阿苯达唑口服(20 mg/ kg,3 次/ d),10 d 后复查胸腔积液稍有吸收,遂改用吡喹酮口服(75 mg·kg - 1 ·d - 1 )后,2 周复查胸腔积液吸收,症状好转.

曼氏血吸虫是一种严重威胁人类健康的重要寄生虫,其中间宿主为扁卷螺科双脐螺.当前关于双脐螺感染曼氏血吸虫的研究逐渐从宏观向微观发展,大量的功能基因和蛋白被报道.神经递质是机体调节神经活动的重要物质,在双脐螺和血吸虫体内广泛分布,不仅参与调控宿主和寄生虫的基本生理行为,还对感染后双脐螺产卵、应激防御以及进入宿主的寄生虫发育等起到重要调控作用.目前已发现五羟色胺、多巴胺、组胺、乙酰胆碱、谷氨酸和一氧化氮等6类常见的神经递质与双脐螺感染曼氏血吸虫相关,本文从生理、生化以及组织定位表达等方面对上述6类神经递质进行综述,以期为双脐螺与血吸虫相容性研究提供参考.

目的 建立高效的疟原虫种属特异性检测方法. 方法 设计疟原虫种(核糖体18S rRNA,4对)和属(线粒体基因,1对)特异性引物,与通用引物(5'-CGAGTCCTGCGGTCTCAAATT-3')连接后,形成5对嵌合特异性引物.常规PCR确定各对引物的最佳退火温度和引物浓度,多重PCR优化5对引物混合后的最佳反应条件,建立反应体系(命名为P5-mPCR方法).用P5-mPCR检测不同原虫密度的间日疟原虫(Rv)、三日疟原虫(Pm)、卵形疟原虫(Po)、恶性疟原虫(Pf)感染者血样和模拟混合感染样品,确定P5-mPCR方法的检测灵敏度.用日本血吸虫、刚地弓形虫、杜氏利什曼原虫、猪囊尾蚴、卫氏并殖吸虫、隐孢子虫等其他寄生虫感染者血样或虫体DNA评价P5-mPCR方法的特异性.用212份疟疾送检血样,与巢式PCR方法比较评价其应用价值. 结果 优化后的P5-mPCR反应体系各组分含量(体积比)为:DNA模板10％、引物Mix 5％、ddH2035％,Taq酶预混液50％.反应体系的最佳循环条件为:95℃ 5 min;94℃15 s,58℃20 s,72℃20 s,循环5次;94℃15s,62℃20 s,72℃20 s,循环10次;94℃15s,68℃20 s,72 ℃C 20 s,循环25次;72℃3 min;10℃5 min.扩增产物的长度分别为:Rv 778 bp,Pm 582 bp,Po 400 bp,Pf256 bp,疟原虫属334 bp.其检测灵敏度分别为4.49、5.45、6.39、4.07个虫/μl血(种特异性检测平均值为4.85个虫/μl血)和0.10～ 1.07个虫/μl血(属特异性检测的平均值为0.41个虫/μl血). P5-mPCR检测含有50～ 200个虫/μl血的模拟混合样品,各特异性扩增条带均清晰可见;检测日本血吸虫、刚地弓形虫、杜氏利什曼原虫、猪囊尾蚴、卫氏并殖吸虫、隐孢子虫等其他寄生虫样品,结果均为阴性.巢式PCR和P5-mPCR检测212份疟疾送检血样,两种方法检测结果的一致性较高(Kappa=0.866,P＜0.01),检出的阳性率分别为75.0％ (159/212)和79.7％ (169/212),差异具有统计学意义(x2=8.100,P＜0.01).从分型诊断来看,两者的差异主要来源于Pf(P＜0.01)和Po(P＜0.05)样品,对Pv、Pm和混合感染血样的检测结果,两种方法差异无统计学意义. 结论 建立的P5-mPCR方法具有敏感性高,特异性好,操作简便快速,检测结果易于判断,一次反应即可确定4种人体疟原虫.

目的 分析2014-2017年上海市临床医院送检样品寄生虫检测结果,为寄生虫病预防和控制提供基线资料. 方法 收集与中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所签约的上海市相关医疗机构(二甲医院7所、三甲医院28所、涉外医院6所)送检的样品包括全血、血清、粪便、痰液、尿液、体液(胸水、腹水)和组织病理切片、虫体等,以及病例相关信息.采用直接涂片法、改良抗酸染色法、ELISA和分子生物学等方法检测送检样品寄生虫感染情况. 结果 2014-2017年共检测送检样品25 549份.其中,病原学检测8 877份,检出寄生虫感染阳性633份,阳性检出率为7.1％,包括了33种寄生虫,其中检出率最高的为人芽囊原虫(331/8 877,3.7％),其次为溶组织内阿米巴(120/8 877,1.4％).血清学检测16 672份,血清标本阳性1 881份(占10.9％),其中猪囊尾蚴抗体阳性424份(占23.4％),曼氏裂头蚴抗体阳性388份(占21.4％),日本血吸虫抗体阳性289份(占16.0％)、卫氏并殖吸虫抗体阳性267份(占14.7％),刚地弓形虫抗体阳性260份(占14.4％).原虫感染共371例,主要来源地区为上海(125例);蠕虫感染共87例,主要来源地区为上海(29例). 结论 2014-2017年上海临床医院送检样品中,病原学检测阳性虫种主要是人芽囊原虫和溶组织内阿米巴,血清抗体阳性虫种主要为猪囊尾蚴和曼氏裂头蚴.