采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱和制备型高效液相色谱法,从八角莲乙醇提取物中分离得到5个双黄酮类化合物.通过波谱数据分析(MS、UV、IR、NMR)与电子圆二色谱(ECD)技术,分别鉴定为(+)-八角莲双黄酮H(1a)、(-)-八角莲双黄酮H(1b)、(+)-八角莲双黄酮Ⅰ(2a)、(-)-八角莲双黄酮Ⅰ(2b)、podoverine F(3),其中,1a与1b、2a与2b为2对新的双黄酮对应异构体.DPPH自由基清除实验结果显示,化合物2、2a、2b对DPPH自由基具有较强的清除能力,IC50值分别为8.87、10.18、11.35 μmol/L,且强于阳性药trolox(14.95 μmol/L).化合物2、2a、2b对DPPH自由基的清除能力分别强于化合物1、1a、1b,进一步的构效关系研究表明,B环上邻二酚羟基是黄酮类化合物具有DPPH自由基清除活性的必需结构基团.

目的:建立同时测定八角莲中木脂素类成分4′-去甲基鬼臼毒素、鬼臼毒素和黄酮类成分槲皮素、山柰素含量的方法.方法:采用Dikma C18 plus(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相为甲醇-0.1％磷酸水溶液(50:50);流速为1 mL·min-1;检测波长分别为290、360 nm.结果:4′-去甲基鬼臼毒素、鬼臼毒素、槲皮素、山柰素分别在进样量0.2944～3.680、0.9616～12.020、0.0863～1.0793、0.1023～1.279μg与峰面积呈现良好的线性关系;4个成分各个水平的方法回收率(n=9)均在97.1～102.1％.结论:该方法简便、准确,重复性良好,适用于八角莲中4′-去甲基鬼臼毒素、鬼臼毒素、槲皮素、山柰素4种成分的同时测定,能为八角莲药材和饮片的质量控制和临床应用提供依据.

建立八角莲HPLC指纹图谱,并同时测定5种化学成分的含量,为其质量评价提供依据.采用Thermo HyPU-RITY C18色谱柱(250 mm x4.6 mm,5 μm),以甲醇(A)-0.4％磷酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱,柱温30℃,体积流量1.0 mL/min,检测波长290 nm,进样量10 μL,建立了八角莲的HPLC指纹图谱.16批样品指纹图谱中有28个共有峰,相似度较好,经与对照品比照确认了8个成分,对(+ )-tanegool-7'-methylether、4'-去甲基鬼臼毒素、槲皮素、鬼臼毒素、山柰酚5种化学成分进行了定量分析,5个化学成分在各自范围内线性关系良好(r2≥0.999 0),精密度、重复性、稳定性均符合定量要求;加样回收率在98.7％ ～99.6％,RSD小于3％.所建立的方法简便、稳定、可靠,HPLC指纹图谱结合多指标成分含量测定可用于八角莲药材质量的评价.

该研究首次提出"量-权-证"网络毒理学的研究方法,通过将毒性成分含量及成分作用靶点的频次赋予靶点权重,将传统定性网络转为定量网络,不断提高获取数据的信度,为系统性评价中药安全性及毒理学研究提供研究思路.首先,给予大鼠灌胃八角莲50％醇提物,基于血清药物化学辨识其中成分.随后从SwissTargetPrediction、PharmMapper等数据库获取成分靶点,以成分相对含量和钓靶频次赋予靶点权重,Comparative Toxicogenomics Database (CTD)、GeneCards等数据库预测肝毒性靶点,通过STRING数据库进行蛋白质互作分析及通路富集分析.最后,构建"毒性成分-加权靶点-效应通路"定量网络.八角莲体内外成分分析共筛选得到鬼臼毒素、鬼臼毒酮、去氧鬼臼毒素、6-甲氧基鬼臼毒素等11个潜在毒性物质,涉及肝毒性作用靶点106个,加权靶点涉及Cdk2、Egfr、Cyp2c9等65个.京都基因与基因组百科全书数据库(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)分析表明其可能通过作用于PI3K-AKT、MAPK、Ras等信号通路呈现炎症反应、氧化应激、细胞凋亡、介导细胞色素P450 (CYP450)酶系发挥肝毒性作用,然传统方法显示AKT1、Alb、Stat3等51个靶点可能通过介导炎症作用、细胞增殖等导致肝损伤,可知从不同层面获取的毒性机制有较大差异.综上,该研究提出并系统性应用"量-权-证网络毒理学"于八角莲致大鼠肝毒性机制研究,证实其广泛应用于中药毒理学评价的可行性,进一步完善中药安全性系统评价的思路.