目的:探讨冬凌草甲素(Ori)调节Hippo/Yes相关蛋白(YAP)信号通路对骨质疏松(OP)大鼠成骨细胞凋亡的影响.方法:随机选取10只大鼠为假手术组仅分离但不切除卵巢,其余大鼠通过切除双侧卵巢建立OP模型,将造模成功的大鼠随机分为OP组、不同剂量Ori(5mg/kg Ori、10mg/kg Ori、20mg/kg Ori)组、20mg/kg Ori+Hippo/YAP 激活剂-Verteporfin(10mg/kg)组.干预后,收集腹主动脉血液,ELISA检测血清中骨钙素(BGP)、碱性磷酸酶(ALP)水平;分离股骨组织,双能X射线骨密度仪检测股骨矿含量、骨密度;HE检测股骨组织形态学变化;TUNEL检测成骨细胞凋亡变化;Western blot检测YAP、转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)蛋白表达.结果:假手术组大鼠股骨结构变化不明显,与假手术组相比,OP组股骨组织形态发生明 显改变,BGP、ALP水平、股骨组织矿含量、骨 密度、YAP、TAZ蛋白表达显著降低(P＜0.05),成骨细胞凋亡率显著增加(P＜0.05);与OP组相比,5mg/kg Ori组、10mg/kg Ori组、20mg/kg Ori组股骨组织形态得到改善,BGP、ALP水平、股骨组织矿含量、骨密度、YAP、TAZ蛋白表达显著增加(P＜0.05),成骨细胞凋亡率显著降低(P＜0.05),不同剂量Ori间具有统计差异(P＜0.05);与20mg/kg Ori组相比,20mg/kg Ori+V erteporfin组股骨组织形态变化加重,BGP、ALP水平、股骨组织矿含量、骨密度、YAP、TAZ蛋白表达显著降低(P＜0.05),成骨细胞凋亡率显著增加(P＜0.05).结论:Ori调节Hippo/YAP信号通路减少OP大鼠成骨细胞凋亡,减轻OP大鼠症状.

本研究通过对未分化甲状腺癌细胞株HTH83和KMH-2的研究，观察冬凌草甲素是否对该类型甲状腺癌细胞具有抗癌作用，并探讨相关的分子机制。

目的:探讨冬凌草甲素(ORI)对卵巢切除(OVX)大鼠骨质疏松模型骨组织病理学改变、骨微结构影响及其作用机制。方法:选取由徐州医科大学动物实验室提供的8周龄雌性SD大鼠30只，参照随机化数字表分假手术(Sham)组、卵巢切除＋溶剂(Veh)(OVX＋Veh)组、卵巢切除＋冬凌草甲素(OVX＋ORI)组。OVX＋ORI组予0.1%冬凌草甲素2 mg/kg腹腔注射，OVX＋Veh组予相同体积的灭菌注射用水，均为每周2次，持续12周。获取各组大鼠血浆、骨组织标本。骨组织染色切片观察病理改变。微型计算机断层扫描成像行骨微结构扫描和骨密度测定。聚合酶链反应法检测骨组织中骨保护素-核因子-κB受体活化因子-核因子-κB受体活化因子配体(OPG-RANKL-RANK)信号通路和Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-Catenin)信号通路相关蛋白信使RNA相对水平。蛋白质印迹法检测获得信号通路相关蛋白表达情况。酶联免疫吸附试验方法检测血浆中骨代谢指标。两组间均数比较采用独立样本 t检验。 结果:与OVX＋Veh组比较，OVX＋ORI组骨小梁断裂明显减少，完整性改善。RANKL表达量、骨硬化蛋白表达量、Ⅰ型胶原C端交联肽水平、抗酒石酸酸性磷酸酶水平OVX＋Veh组高于OVX＋ORI组[1.62±0.04比1.02±0.06， t＝26.766， P<0.01；1.60±0.04比1.08±0.04， t＝29.898， P<0.01；(61.68±6.88) ng/ml比(28.97±4.07) ng/ml， t＝12.937， P<0.01；(759.44±32.47) pg/ml比(435.71±31.43) pg/ml， t＝22.654， P<0.01]。骨密度、OPG表达量、wnt3a表达量、β-Catenin表达量、低密度脂蛋白受体相关蛋白5表达量、碱性磷酸酶水平、Ⅰ型原胶原N端前肽水平OVX＋Veh组低于OVX＋ORI组[(96.75±8.44) mg/cm 3比(195.84±13.16) mg/cm 3， t＝－20.036， P<0.01；0.56±0.04比1.00±0.05， t＝－21.267， P<0.01；0.31±0.01比0.93±0.04， t＝－52.286， P<0.01；0.31±0.01比1.02±0.07， t＝－30.535， P<0.01；0.32±0.03比1.00±0.03)， t＝－50.398， P<0.01；(15.71±3.44) ng/ml比(53.21±6.99) ng/ml， t＝－15.229， P<0.01；(23.83±3.54) ng/ml比(63.95±4.17) ng/ml， t＝－23.217， P<0.01]。 结论:冬凌草甲素可能通过抑制OPG-RANKL-RANK信号通路，同时上调Wnt/β-Catenin信号通路，改善雌激素缺乏大鼠骨量丢失，减少骨微结构破坏。

冬凌草甲素是冬凌草主要的抗肿瘤有效成分之一，在肝癌、乳腺癌、宫颈癌、胰腺癌、肺癌、胃癌、食管癌、结肠癌等多种恶性肿瘤发生发展过程中，显现出明显的抑制作用，主要通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞的侵袭和迁移、诱导肿瘤细胞自噬、降低端粒酶活性、逆转肿瘤细胞耐药性等，发挥抗肿瘤作用。

目的:探讨冬凌草甲素对高氧性肺损伤(HALI)的保护作用。方法:建立高氧性肺损伤SD大鼠模型，将46只SD大鼠随机分为对照组( n＝7)、HALI组( n＝13)、Nec-1(程序性坏死抑制剂)组( n＝13)和冬凌草甲素组( n＝13)。将大鼠在0.25 MPa下暴露于纯氧中6 h以诱导HALI。高氧暴露前30 min，大鼠腹腔内注射1 mg/kg Nec-1或10 mg/kg冬凌草甲素。高氧暴露后24 h或48 h处死动物。通过检测不同组大鼠肺的组织学、肺干湿比(W/D)、支气管肺泡灌洗液(BALF)、肺组织氧化应激及炎症因子以评估肺损伤；同时取不同组大鼠肺组织，检测RIP1、RIP3和混合系蛋白激酶结构域样蛋白(MLKL)的表达，以及RIP1和RIP3之间的相互作用。 结果:与对照组相比，高氧暴露导致明显肺损伤，增加程序性坏死细胞数量，伴随肺内RIP1、RIP3和MLKL的表达增加。与HALI组相比，高氧暴露前腹腔注射冬凌草甲素能一定程度改善肺损伤，抑制氧化应激和炎症因子，降低程序性坏死细胞数量[HALI组的RIP1和RIP3表达量分别为64.7±6.5和46.3±5.4, Nec-1组分别为39.4±4.8和26.6±4.0，冬凌草甲素组分别为36.9±5.4和27.1±3.9]，伴随RIP1、RIP3和MLKL表达的下降以及RIP1和RIP3相互作用下调。结论:冬凌草甲素对HALI的保护作用可能与其抑制肺内细胞程序性坏死有关。

目的:探讨冬凌草甲素对小鼠下肢缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法:采用随机分组方式将48只8周龄C57BL/6小鼠分成空白组、模型组、低剂量组和高剂量组，每组12只。模型组、低剂量组和高剂量组进行缺血再灌注处理，低剂量组和高剂量组术前连续7 d腹腔注射冬凌草甲素(10 mg/kg和20 mg/kg)。观察小鼠下肢肌肉形态学和组织学变化；检测小鼠血液指标血清肌酸激酶、血清乳酸脱氢酶、血清白细胞介素-6(IL-6)和全血白细胞的变化；用蛋白印迹法对炎症相关蛋白、凋亡相关蛋白和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体(NLRP3)相关蛋白进行检测；原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡水平。两组间比较采用 t检验，多组间比较采取单因素方差分析。 结果:在下肢缺血再灌注小鼠中，低剂量组和高剂量组与模型组比较，(1)血清肌酸激酶等组织损伤指标明显低于模型组(1 995.67±129.25、1 753.00±152.86比2 268.67±116.20， F＝22.360， P<0.01)；(2)血清IL-6等组织炎症指标明显低于模型组(10.89±2.06、8.71±0.86比16.56±2.62， F＝25.409， P<0.01)；(3)凋亡指数等细胞凋亡指标明显低于模型组[(38.06±4.48)%、(22.31±3.55)%比(52.97±1.91)%， F＝58.262， P<0.01]；(4)检测肌肉组织NLRP3等炎症小体相关蛋白的表达水平，低剂量组和高剂量组中NLRP3蛋白表达均低于模型组(2.60±0.20、1.51±0.26比4.95±0.14， F＝215.416， P<0.01)。 结论:冬凌草甲素能够抑制NLRP3炎症小体的激活，减少炎性反应和细胞凋亡，是发挥对小鼠下肢缺血再灌注损伤保护作用的重要机制之一。

目的:探讨冬凌草甲素对人鼻咽癌HONE-1细胞增殖、迁移、上皮-间质转化(EMT)和凋亡的影响,阐明其相关抗肿瘤机制.方法:鼻咽癌HONE-1细胞经不同浓度(0、5、10、20、40、80和160 mg·L-1)冬凌草甲素处理48h后,采用CCK-8法检测各组细胞增殖抑制率,确定后续实验的用药浓度.HONE-1细胞分为对照组、3 mg·L-1冬凌草甲素组和6 mg·L-1冬凌草甲素组,培养24和48h后,采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性,5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)法检测各组细胞中EdU阳性细胞率,克隆形成实验检测各组细胞中克隆形成数,Transwell小室实验和细胞划痕实验检测各组细胞中迁移细胞数和划痕愈合率,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)和细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)和多腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP1)蛋白表达水平.结果:CCK-8法确定冬凌草甲素48 h半数抑制浓度(IC50)为12.18 mg·L-1,以1/4 IC5.和1/2 IC5.值为后续实验用药浓度.与对照组比较,24和48 h时3和6 mg·L-1冬凌草甲素组细胞增殖活性降低(P＜0.05或P＜0.01),EdU阳性细胞率降低(P＜0.05或P＜0.01),细胞中克隆形成数和迁移细胞数减少(P＜0.05或P＜0.01),划痕愈合率降低(P＜0.05或P＜0.01),细胞中 CDK1和CDK4 mRNA表达水平降低(P＜0.05 或 P＜0.01),E-cadherin、Caspase-3 和 PARP1 蛋白表达水平升高(P＜0.05 或 P＜0.01),Vimentin蛋白表达水平降低(P＜0.05).结论:冬凌草甲素可通过抑制细胞周期相关蛋白的表达及EMT,进而抑制人鼻咽癌HONE-1细胞增殖、克隆形成和迁移能力,促进细胞凋亡,发挥抗肿瘤作用.

目的:利用葡聚糖硫酸钠盐(DSS)构建小鼠溃疡性结肠炎(UC)模型,探讨冬凌草甲素(Ori)通过介导Sirt1信号通路缓解UC的作用及分子机制,寻找治疗UC的新药.方法:60只BALB/c小鼠随机分为正常组(NC)、模型组(DSS)、DSS+美沙拉嗪缓释颗粒组(AC)、DSS+低剂量Ori组(Ori-L)、DSS+中剂量Ori组(Ori-M)和DSS+高剂量Ori组(Ori-H),每组10只.除NC组外,其余各组小鼠自由饮用3%DSS水溶液7 d,造模成功后,Ori-L组、Ori-M组和Ori-H组分别灌胃50、100、150 mg/kg Ori混悬液,NC组及DSS组自由饮用蒸馏水,AC组灌胃美沙拉嗪缓释颗粒100 mg/kg,连续治疗10 d.记录小鼠体质量变化并进行疾病活动指数(DAI)评分;治疗结束后,ELISA检测血清IL-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;摘取完整结肠组织,测量长度,进行HE染色,实时荧光定量PCR和Western blot检测各组结肠组织Sirt1、NF-κB和p53表达.结果:造模成功后,与NC组相比,其余5组小鼠出现体质量下降、DAI评分升高以及结肠长度缩短现象,Sirt1表达受到明显抑制,NF-κB和p53表达显著升高,且伴有明显炎症病理学特征.相较于DSS组,Ori-L、Ori-M和Ori-H以及AC组小鼠实验期间体质量减轻幅度较小,DAI评分显示其疾病活动较低,且结肠长度缩短程度相对较小,Sirt1表达受抑制程度较低,NF-κB和p53表达上升幅度相对较小,AC组结果证明Ori对UC有治疗效果.结论:Ori能改善小鼠UC,其作用可能与调控Sirt1信号有关.

目的 探究冬凌草甲素介导Notch信号通路对多发性骨髓瘤细胞生长水平、凋亡率及异常转化情况.方法 选取U266 细胞、RPMI8226 细胞和KAS-6/1 细胞,采用CCK8 法检测细胞生长水平,采用酶标仪 492 nm处检测光密度检测物厚度D值测定细胞的生长抑制率,随后采用流式细胞仪检测RPMI8226 细胞和 U266 细胞的凋亡情况,最后对所检测细胞进行异常转化的观察.结果 研究组U266 细胞、RPMI8226 细胞和KAS-6/1 细胞的生长水平均明显低于对照组(P<0.05).研究组干预后Notch 1-siRNA与核因子κB(NF-κB)-siRNA表达水平变化明显优于对照组(P<0.05).研究组RPMI8226 细胞、U266 细胞凋亡率明显优于对照组(P<0.05).研究组异常转染、异常克隆、异常增生的发生率明显低于对照组(P<0.05).结论 冬凌草甲素能够明显抑制多发性骨髓瘤 U266 细胞、RPMI8226 细胞、KAS-6/1 细胞体外生长,有效激活Notch信号通路调节诱导肿瘤细胞凋亡过程,值得临床推广应用.

目的 探究冬凌草甲素对人软骨肉瘤细胞增殖、凋亡及p38 MAPK信号通路的调控作用.方法 体外培养人软骨肉瘤SW-1353 细胞,分为对照组(等量体积DMSO溶剂),5、10、15 μmol/L冬凌草甲素组(5、10、15 μmol/L冬凌草甲素)、10 μmol/L冬凌草甲素+抑制剂组(10 μmol/L冬凌草甲素+20 μmol/L p38 MAPK通路抑制剂SB203580)和阳性药物组(6 μmol/L阿霉素).用倒置显微镜、活细胞计数(CCK-8)、5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)、Hoechst 33258 染色、RT-qPCR及蛋白免疫印迹(WB)法对细胞形态、增殖活性、增殖率、凋亡情况、相关因子表达水平进行分析.结果 与对照组比较,实验组、10 μmol/L冬凌草甲素+抑制剂组和阳性药物组SW-1353 细胞增殖活性、增殖率、cyclin D1 及p-p38 MAPK表达水平显著降低,而细胞凋亡数量和caspase-3 表达水平增加,且浓度越高变化越显著(P<0.05),与 10 μmol/L冬凌草甲素组相比,抑制剂的加入使各指标变化更显著.结论 冬凌草甲素可通过抑制p38 MAPK通路抑制人软骨肉瘤SW-1353 细胞的增殖诱其凋亡.