富血小板纤维蛋白(PRF)是一种具有立体纤维蛋白结构、富含大量白细胞和血小板的第二代血小板浓缩物，可持续释放各种促进伤口愈合的细胞因子及生长因子。PRF已在创伤外科、整形外科及口腔科等临床科室广泛用于治疗患者各种急慢性创面。对创伤外科中常见的慢性难愈合创面，常规的外科处理常效果不佳。大量的研究已证实PRF对慢性创面具有良好的治疗效果。根据标本选择、离心方法、离心管材质、冻干保存技术等多种方法，研究者尝试对PRF进行改良增效，并已取得巨大进展。本文就PRF制备和保存技术研究现状进展作一综述。

目的:探讨冻干富血小板纤维蛋白(LPRF)应用于慢性难愈合创面治疗的可行性及临床效果。方法:动物实验中，抽取兔心脏血10~20 ml制备LPRF，将其应用在裸鼠糖尿病创面上，在应用后3、7、10、14 d测量创面大小。临床上，收集13例慢性难愈合创面患者，抽取各自新鲜外周血经离心、冷冻干燥等处理得到LPRF，辐照灭菌处理后，填充至清创后难愈合创面，无菌敷料覆盖，5~7 d后换药观察创面愈合情况。两组间比较创面愈合率，组间比较 t检验。 结果:LPRF应用于裸鼠糖尿病的创面14 d后创面完全上皮化，苏木精-伊红染色和马松染色均可看见LPRF治疗组创面被复层上皮覆盖，而常规辅料组仍有上皮缺失区域。临床上13例LPRF治疗的患者中除1例患者外其他均有效，其中6例患者经一次填充后创面愈合，1例患者发生复发。裸鼠糖尿病创面愈合率CON组低于LPRF组，差异有统计学意义(0.852±0.073比0.974±0.047， t＝－4.018， P<0.05)。 结论:LPRF可以有效的促进慢性创面愈合，可在临床上应用于多种慢性难愈合创面的治疗。

目的:观察冻干富血小板纤维蛋白(Lyophilized platelet-rich fibrin,LPRF)在造口周围溃疡中的治疗效果.方法:选择2018年7月-2020年4月笔者医院收治的40例造口周围溃疡患者,按照随机数字表法分为LPRF组和对照组.对照组给予常规换药治疗;LPRF组抽取新鲜外周血经离心、冷冻干燥等处理得到LPRF,辐照灭菌处理后,填充至造口周围溃疡创面,无菌防水敷料贴覆盖.两组均外附造口袋,5～7 d后换药观察创面愈合情况.结果:治疗14 d后,LPRF组创面缩小面积大于对照组(P＜0.05);LPRF组创面愈合时间短于对照组(P＜0.05).结论:LPRF可以促进造口周围溃疡创面愈合,为临床解决相关问题提供了新的治疗手段.

血小板为血液系统重要组成部分.浓缩血小板及其衍生制品种类较多,其中富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)、生长因子(growth factors,GFs)以及富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin,PRF)等已广泛应用于临床.冻干血小板(lyophilized platelets,Lyo-P or freeze-dried platelets,FDP)由浓缩血小板冷冻干燥制备而成,冻干后具有常温下保存时间长、质量轻、便于运输、灭活病原体等优点.Lyo-P含有高浓度GFs、纤维蛋白、白细胞以及多种细胞因子等,除具止血和促凝功能外,Lyo-P及其制品越来越多应用于创面愈合、组织修复、美容及生殖医学等领域.

目的:探究负载富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin,PRF)的新型水凝胶对骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)体外成软骨分化的影响.方法:配制体积比为6:1:1的2%壳聚糖/56%β-甘油磷酸钠/0.1%京尼平混合液,置于37℃恒温水浴箱后观察其成胶时间;通过一次离心法(1200 r/min,12 min)制备PRF,将PRF冻干研磨成粉后加入上述混合液,置于37℃制备负载PRF的新型水凝胶.接种BMSCs于水凝胶表面,培养1、3、7 d后通过二乙酸荧光素(fluoresceindiacetate,FDA)荧光染色观察其增殖情况;再将细胞接种于24孔板,分为负载PRF的新型水凝胶组(PRF组)、壳聚糖水凝胶组(壳聚糖组)以及单纯诱导组,分别添加适量材料后进行成软骨诱导,第2周结束时每组取12孔分别进行HE染色、番红O-固绿染色、阿利新蓝染色、兔Ⅱ型胶原免疫组化染色观察软骨分化情况;其余细胞诱导至第4周结束,阿利新蓝比色法和ELISA法检测每周收集上清液中糖胺聚糖及Ⅱ型胶原含量.结果:壳聚糖/β-甘油磷酸钠/0.1%京尼平混合液在37℃下约8 min能够成胶;FDA荧光染色显示BMSCs在水凝胶表面增殖良好;4种染色结果显示PRF组均呈阳性,壳聚糖组和单纯诱导组呈弱阳性;3组上清液均含有糖胺聚糖和Ⅱ型胶原,PRF组分泌量在4周内均显著高于其他两组(P均<0.05).结论:BMSCs能够在负载PRF的新型水凝胶表面生长、增殖,细胞相容性较好;该水凝胶能在一定程度上促进BMSCs成软骨分化.

目的:探讨新鲜和冻干富血小板纤维蛋白(PRF)混合物对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖和成骨能力的影响.方法:取新西兰大耳兔耳缘动脉血制备新鲜和冻干PRF,染色并进行组织学观察;分别收集新鲜、冻干和PRF混合物孵育1、4、7、14、21、28 d的释放液,再将其配置并分为冻干PRF组、新鲜PRF组、PRF混合组(F:L=1:1)和空白组4组,分别与兔BMSCs混合并于体外培养,于7、14 d检测各组的四甲基偶氮唑盐(MTT)值、碱性磷酸酶(ALP)活性及钙结节形成情况.结果:组织学观察显示,新鲜PRF呈疏松网状,表面光滑,纤维束排列紧密;冻干PRF呈海绵团块状,表面呈多孔状.PRF各实验组对BMSCs的增殖、ALP的活性及钙结节的形成均有促进作用(P<0.05);其中,PRF混合组的促进作用明显优于新鲜PRF组和冻干PRF组(P<0.05).结论:PRF混合组更利于促进BMSCs的增殖和成骨分化.

背景:富血小板纤维蛋白在临床上已被用于骨及软组织修复,但是由于其具有生物活性,仅限于短期临床应用.如何稳定保存富血小板纤维蛋白及延长临床应用时间,显得尤为重要.目的:探讨低温冷冻干燥技术对富血小板纤维蛋白形态学以及对富血小板纤维蛋白中血小板释放生长因子活力及释放规律的影响.方法:制备新鲜及冻干富血小板纤维蛋白,将其浸泡于无血清的DMEM基础培养基,收集1,7,14,21 d各个时间点冻干及新鲜富血小板纤维蛋白析出液,进行成纤维细胞培养及血小板衍生生长因子BB含量测定,比较冻干前后富血小板纤维蛋白形态结构、生长因子活力及释放规律;通过苏木精-伊红染色进行形态学观察;通过CCK8法测定细胞增殖;通过细胞划痕实验评价对细胞迁移能力的影响;通过ELISA试剂盒检测不同时点两组析出液中血小板衍生生长因子BB含量.结果与结论:①苏木精-伊红染色显示,冻干富血小板纤维蛋白结构呈疏松呈海绵状,孔隙直径较大,蓝染有核细胞数目明显减少;②与无血清基础培养基相比,第1天和第7天收集的新鲜及冻干富血小板纤维蛋白析出液明显促进成纤维细胞增殖(P<0.05),其中冻干富血小板纤维蛋白析出液对成纤维细胞增殖能力效果更显著(P<0.05);③与无血清培养基相比,新鲜、冻干富血小板纤维蛋白析出液及含10％胎牛血清的完全培养基,在12 h及24 h两个时间点均能有效促进成纤维细胞迁移,差异有显著性意义(P<0.05);④与新鲜富血小板纤维蛋白析出液相比,冻干富血小板纤维蛋白析出液在12 h及24 h两个时间点促进成纤维细胞的迁移作用更明显(P<0.05),差异有显著性意义(P<0.05);⑤新鲜富血小板纤维蛋白组血小板衍生生长因子BB在第7天释放量最大,随着时间推移,生长因子释放量逐渐减少;冻干富血小板纤维蛋白组血小板衍生生长因子BB在第1天释放量最大,随着时间推移生长因子释放量逐渐减少,差异有显著性意义(P<0.05);两组生长因子释放总量进行比较,差异无显著性意义(P>0.05);⑥结果表明,冻干技术保存富血小板纤维蛋白具有可行性,可以为组织修复重建提供理论依据.

目的:探讨"三明治"法制备富血小板纤维蛋白(PRF)/羟基磷灰石(HA)复合物的工艺流程,并对其性能进行评价.方法:采用700 r·min-1×3 min和1300 r·min-1×14 min的离心参数,分别制备可注射型PRF(I-PRF)和改良型PRF(A-PRF),并采用"三明治"法将其与HA复合.冷冻干燥PRF/HA复合物后,扫描电子显微镜(SEM)观察其微观结构;模拟体液(SBF)浸泡材料,在第2、4、8和16天分别观察HA表面类骨层的生长情况,评价其矿化能力;采用PRF/HA复合物浸提液和完全培养基与小鼠前成骨MC3T3-E1细胞共培养作为实验组和对照组,在共培养第1、3和5天,CCK-8法检测各组前成骨MC3T3-E1细胞增殖活性.在日本大耳白兔的颅骨矢状缝两侧对称建立2个直径为6 mm的全层骨缺损区域,一侧不植入任何材料作为对照组,另一侧植入PRF/HA复合物作为实验组;术后4和8周时X射线平片及锥形束CT(CBCT)扫描术区,根据成像结果评价2组白兔体内的成骨效果.结果:成功制备出具有"三明治"结构的PRF/HA复合物,外侧为A-PRF,中间为包裹了HA颗粒的I-PRF.SEM观察,复合物横断面为明显的三层结构,外侧为致密纤维蛋白网,内部为有纤维蛋白丝附着的多孔HA颗粒.PRF/HA复合物在SBF中浸泡后,第2天时HA表面即形成矿化结节,随着浸泡时间的延长,类骨层逐渐建立,第16天时已形成片层状结构.细胞增殖实验,与对照组比较,第1、3和5天时实验组MC3T3-E1细胞的增殖活性明显升高(P<0.05).影像学观察,实验组颅骨缺损4周时已有明显的边缘成骨,8周时新生骨已几乎完全充填骨缺损区域,而对照组颅骨缺损新骨形成范围较实验组明显减少.结论:"三明治"法制备的PRF/HA复合物,具有良好的矿化能力和生物相容性,且能够促进骨组织再生.