富血小板纤维蛋白(PRF)是一种具有立体纤维蛋白结构、富含大量白细胞和血小板的第二代血小板浓缩物，可持续释放各种促进伤口愈合的细胞因子及生长因子。PRF已在创伤外科、整形外科及口腔科等临床科室广泛用于治疗患者各种急慢性创面。对创伤外科中常见的慢性难愈合创面，常规的外科处理常效果不佳。大量的研究已证实PRF对慢性创面具有良好的治疗效果。根据标本选择、离心方法、离心管材质、冻干保存技术等多种方法，研究者尝试对PRF进行改良增效，并已取得巨大进展。本文就PRF制备和保存技术研究现状进展作一综述。

目的:研制冻干牛血中汞成分分析标准物质。方法:采集牛全血加入汞标准溶液，经混匀、分装、冷冻干燥制备成两个浓度水平标准物质研制物，分别采用 t检验和 F检验方法对其均匀性和稳定性进行评估，采用9家实验室2种方法对标准物质进行联合定值，对制备、长期稳定性、短期稳定性、定值等过程中的不确定度进行评估，对标准物质进行赋值。 结果:标准物质均匀性良好，在-20 ℃条件下可稳定保存12个月；在≤35 ℃条件下运输，在7 d内量值稳定；复溶后在4 ℃条件下可保存5 d；量值分别为9.4、29.2 μg/L，不确定度分别为±1.1、±2.3 μg/L（ k=2）。 结论:冻干牛血中汞成分分析标准物质各项指标符合技术规范要求，具有一定的应用价值。

目的:探讨负载蛋白聚糖4(PRG4)的温度敏感性聚己内酯-聚乙二醇-聚己内酯共聚物(PCEC)可注射水凝胶材料表征及修复新西兰兔软骨缺损的效果。方法:2022年3月至2023年6月，利用PCEC温敏性水凝胶负载了PRG4效应因子(PRG4@PCEC)，使用扫描电子显微镜观察冷冻干燥的PRG4@PCEC水凝胶的形貌，测量PCEC和PRG4@PCEC水凝胶的最低共溶温度；使用活/死细胞染色技术评估水凝胶的生物安全性；采用雄性新西兰大白兔18只，36个膝关节缺损样本，随机分为3组，其中12个缺损组用PRG4@PCEC水凝胶修复，12个缺损组用PCEC水凝胶修复，12个缺损组为空白对照组，观察水凝胶的软骨修复能力；通过微型计算机断层扫描(Micro-CT)分析软骨下骨再生，标本组织切片苏木精-伊红(HE)、马松(Masson)染色及荧光定量聚合酶链反应(PCR)评估水凝胶对软骨缺损的修复作用。组间比较采用 t检验。 结果:水凝胶具有明显的多孔微观结构，PCEC和PRG4@PCEC水凝胶分别在35 ℃和38 ℃表现出最低共溶温度；激光共聚焦观察活/死细胞染色结果证明PRG4@PCEC水凝胶对于兔软骨细胞具有良好的生物相容性；载有PRG4的水凝胶组在8周时，缺损已经完全被高含量的新生软骨组织填充，表明软骨缺损修复最佳；Micro-CT显示在8周时PCEC组[(37.33±0.39) mm 3]和PRG4@PCEC组[(25.33±0.21) mm 3]软骨下骨缺损体积均小于对照组[(51.57±0.49) mm 3， t＝32.19、69.56， P<0.01]；切片染色显示PRG4@PCEC水凝胶组软骨下骨有效形成；荧光定量PCR结果显示在4周和8周PCEC组(2.79±0.07、2.18±0.10)与PRG4@PCEC组白细胞介素-1β(IL-1β)表达水平(1.54±0.07、0.80±0.10)均低于对照组(3.21±0.08、2.54±0.07， t＝0.68、4.97、27.63、24.43， P<0.01)，同时PCEC组(0.95±0.24、1.45±0.34)和PRG4@PCEC组Ⅱ型胶原蛋白(COL2)基因表达水平(1.19±0.45、1.53±0.26)高于对照组(0.64±0.07、1.01±0.14， t＝7.47、0.08、10.70、3.12， P<0.05)。 结论:负载PRG4的温度敏感性PCEC可注射水凝胶具有良好的温度敏感性和生物安全性，对关节软骨缺损有明显修复作用。

目的:评估蚕丝-胶原支架用于兔前交叉韧带(ACL)重建后，关节腔内韧带再生和骨隧道内腱-骨愈合。方法:Na 2CO 3脱胶法对生蚕丝进行脱胶处理，乙酸抽提法获取Ⅰ型胶原，然后使用热交联和冷冻干燥法制备蚕丝-胶原材料。20只12周龄新西兰大白兔(由河南省实验动物中心提供)，对左膝关节使用蚕丝-胶原支架重建ACL。术后4、16周两个时间点随机处死实验动物的一半，每组标本中的5个进行组织学检测，包括关节腔内韧带的组织学检测和骨隧道腱-骨愈合的组织学检测；每组中余下5个标本进行Micro-CT和生物力学检测。组间比较采用两独立样本 t检验。 结果:术后4周，关节腔内的蚕丝-胶原支架表面可见大量的细胞浸润，细胞排列方向杂乱，细胞周围基质较少，且材料内部细胞浸润较少；骨道内蚕丝-胶原材料内可见细胞浸润，细胞排列较为松散，腱-骨界面可见新生骨组织，骨小梁结构明显；Micro-CT显示骨隧道内新生骨较少，新生骨小梁稀疏，骨体积分数(BV/TV)＝(19.36±2.29)%，骨密度(BMD)＝(245.04±17.68) mg/cm 3。术后16周，关节腔内支架表面和内部均可见大量细胞浸润，细胞呈纤维细胞形态，排列方向较为一致，与支架长轴方向一致，细胞周围基质较多，免疫组织化学染色显示肌腱蛋白-C(Tenascin-C)表达较4周明显增多；骨道内蚕丝-胶原材料内细胞浸润进一步增多，细胞排列较4周时更为有序，腱-骨界面骨组织趋于成熟，骨组织与支架材料结合更加紧密；Micro-CT显示骨隧道内新生骨较4周明显增多，BV/TV＝(39.25±1.51)%( t＝16.010， P<0.05)，BMD＝(400.88±58.32) mg/cm 3，组间比较差异有计学意义( t＝5.718， P<0.05)；16周5例标本测得最大拉力[(43.67±6.52) N]，刚度[(9.18±0.76) N/mm]，较4周差异有统计学意义[最大拉力(25.87±4.57) N， t＝4.994， P<0.05；刚度(4.85±0.84) N/mm， t＝8.556， P<0.05]。 结论:蚕丝-胶原支架用于兔ACL重建，不仅能获得较好的关节腔内韧带再生，同时能够达到良好的腱-骨愈合。

目的:探讨冻干富血小板纤维蛋白(LPRF)应用于慢性难愈合创面治疗的可行性及临床效果。方法:动物实验中，抽取兔心脏血10~20 ml制备LPRF，将其应用在裸鼠糖尿病创面上，在应用后3、7、10、14 d测量创面大小。临床上，收集13例慢性难愈合创面患者，抽取各自新鲜外周血经离心、冷冻干燥等处理得到LPRF，辐照灭菌处理后，填充至清创后难愈合创面，无菌敷料覆盖，5~7 d后换药观察创面愈合情况。两组间比较创面愈合率，组间比较 t检验。 结果:LPRF应用于裸鼠糖尿病的创面14 d后创面完全上皮化，苏木精-伊红染色和马松染色均可看见LPRF治疗组创面被复层上皮覆盖，而常规辅料组仍有上皮缺失区域。临床上13例LPRF治疗的患者中除1例患者外其他均有效，其中6例患者经一次填充后创面愈合，1例患者发生复发。裸鼠糖尿病创面愈合率CON组低于LPRF组，差异有统计学意义(0.852±0.073比0.974±0.047， t＝－4.018， P<0.05)。 结论:LPRF可以有效的促进慢性创面愈合，可在临床上应用于多种慢性难愈合创面的治疗。

目的:制备负载中药三七的壳聚糖/明胶水凝胶复合止血材料（PN/CMC/GMs），并对其性能进行评价。方法:利用冷冻干燥法制备PN/CMC/GMs，利用扫描电镜观察其形态，流变仪观察其流变学性能，溶胀测试其吸水膨胀率，细胞毒性实验检测其生物相容性，并利用SD大鼠肝脏出血模型检测其快速止血效果。结果:制备了PN/CMC/GMs，呈网格状结构，具有一定的孔隙率。随着三七粉含量的增加，PN/CMC/GMs的模量也相应的增加，机械强度增加。PN/CMC/GMs具有较好的吸水膨胀功能，可形成压迫止血和浓缩血液实现快速止血，且具有良好的生物相容性。止血实验表明，PN/CMC/GMs对大鼠肝脏损伤的止血时间和止血效果均优于空白对照组。结论:PN/CMC/GMs具有良好的止血效果和生物相容性，具有进一步研究的价值和临床应用前景。

目的:观察生物三维打印类细胞外基质(ECM)硬度对骨髓间充质干细胞(BMSC)向皮肤附属器细胞分化的影响。方法:(1)分别将1 g海藻酸钠和4 g明胶、3 g海藻酸钠和8 g明胶混匀，混合物分别溶于100 mL超纯水中，配制2种海藻酸钠-明胶复合水凝胶，分别命名为1A4G水凝胶、3A8G水凝胶，用于后续实验。观察2种水凝胶室温下、4 ℃冷凝15～30 min(冷凝条件下同)后、冷凝且用25 g/L氯化钙溶液交联(交联条件下同)后、冷凝后且用生物三维打印机(三维打印仪器下同)进行三维打印且交联后形态。取2种水凝胶冷凝并交联后，采用杨氏模量测定仪检测杨氏模量(硬度)，样本数为3。取2种水凝胶交联并冷冻干燥，用扫描电子显微镜观察其孔隙结构。取2种水凝胶交联并冷冻干燥，用无水乙醇置换法检测孔隙率，样本数为3。(2)从20只1周龄雌雄不限C57BL/6小鼠股骨和胫骨中分离培养BMSC，取第2代细胞进行实验。分别将1.0×10 7个/mL的BMSC单细胞悬液与1A4G水凝胶、3A8G水凝胶以1∶9的体积比充分混匀，制备载BMSC的1A4G水凝胶、载BMSC的3A8G水凝胶，进行三维打印，1 mL载细胞水凝胶(打印用量下同)打印1块，交联后加入间充质干细胞(MSC)专用培养基培养。根据水凝胶不同，将打印块分为1A4G组和3A8G组。取2组打印块各1块，培养7 d，采用细胞活/死试剂盒计数50倍视野下活、死细胞。取2组打印块各9块，另将9孔用2 mL MSC专用培养基培养的每孔1.0×10 6个BMSC设为二维培养组。分别于培养1、3、5 d，1A4G组与3A8G组各取3块打印块、二维培养组取3孔细胞，用细胞计数试剂盒8法检测培养液中吸光度值，以此表示细胞增殖活性。(3)同实验(2)制备载BMSC的1A4G水凝胶、载BMSC的3A8G水凝胶各10 mL，分别加入从10只新生1 d雌雄不明C57BL/6小鼠提取的足趾垫匀浆液各0.5 mL混匀进行三维打印及交联，加入MSC专用培养基培养3 d，更换为汗腺专用培养基培养。根据水凝胶不同，将打印块分为1A4G组和3A8G组。汗腺专用培养基培养7 d，采用免疫荧光法检测2组打印块中细胞的上皮细胞表面标志物细胞角蛋白5(CK5)和CK14、汗腺细胞表面标志物CK18和钠钾ATP酶(NKA)、毛囊细胞表面标志物CK17和碱性磷酸酶(ALP)蛋白表达，实时荧光定量反转录PCR法检测2组打印块中细胞的CK5、CK14、CK18、NKA(检测ATP1a1转录本)、CK17、ALP mRNA表达(样本数为3)。对数据行独立样本 t检验、Fisher确切概率法检验、析因设计方差分析及Bonferroni法。 结果:(1)与3A8G水凝胶比较，1A4G水凝胶室温下黏度稍低、流动性稍好。2种水凝胶冷凝后均呈凝胶状，在此基础上，交联后形状均匀规则，经三维打印且交联后为固态的纵横交错的圆柱块。1A4G水凝胶杨氏模量为(52±6)kPa，明显低于3A8G水凝胶的(218±5)kPa( t＝40.470， P<0.01)。2种水凝胶孔隙结构相似，横断面均呈多孔网状结构；2种水凝胶的孔隙率相近( t＝0.930， P>0.05)。(2)培养7 d，1A4G组和3A8G组打印块中活、死细胞分布相近( P>0.05)，绝大部分为活细胞。培养1、3、5 d，1A4G组和3A8G组打印块及二维培养组培养液中吸光度值两两比较，差异均无统计学意义( P>0.05)。与组内培养1 d比较，1A4G组、3A8G组打印块培养3、5 d培养液中吸光度值均明显升高( P<0.05或 P<0.01)，二维培养组细胞培养5 d培养液中吸光度值明显升高( P<0.01)；与组内培养3 d比较，1A4G组、3A8G组打印块及二维培养组细胞培养5 d培养液中吸光度值均明显升高( P<0.01)。(3)汗腺专用培养基培养7 d，2组打印块中细胞均可见CK5、CK14、CK18、NKA、CK17、ALP蛋白表达。汗腺专用培养基培养7 d，2组打印块中细胞的CK5、CK14、CK18、NKA mRNA表达量相近( t＝0.362、0.807、0.223、1.356， P>0.05)；3A8G组打印块中细胞的CK17、ALP mRNA表达量分别为1.96±0.21、55.57±11.49，均明显高于1A4G组的1.05±0.42、2.01±0.27( t＝3.333、8.074， P<0.05或 P<0.01)。 结论:1A4G水凝胶和3A8G水凝胶三维培养的BMSC均有向汗腺细胞分化的趋势，但3A8G水凝胶三维培养的BMSC向毛囊细胞分化的趋势比1A4G水凝胶明显。提示相对高的生物三维打印类ECM硬度，不仅有利于BMSC向汗腺细胞分化，还有利于其向毛囊细胞分化。

目的:探讨不同浓度的甲基丙烯酸酯（GelMA）水凝胶支架的性能，以及对大鼠髓核干细胞（NPSCs）体外增殖、分化及细胞外基质相关蛋白表达的影响。方法:（1）配置浓度为5%、10%、15% GelMA水凝胶溶液，经紫外光照射固化、冷冻干燥、喷金处理，制备相应浓度的GelMA水凝胶支架。用扫描电镜观察支架并测量孔径，使用科学表面分析仪测量支架静态水接触角，使用机械测试仪测量支架压缩模量，使用精密天平测量在37 ℃恒温箱中放置0、2、4、6、8、10、12 h时支架的含水量。（2）取6周龄雄性清洁级SD大鼠8只，体质量为80~100 g，切开椎间盘取髓核组织，分离培养NPSCs。取第3代NPSCs分别进行成骨、成软骨及成脂分化培养，分别用茜素红、阿利新蓝及油红O对三系细胞进行染色，观察NPSCs的三系分化潜能。（3）取第3代NPSCs分为无支架的对照组和5%、10%、15% GelMA水凝胶支架组，对照组加入培养基培养3 d，不同浓度GelMA水凝胶支架组紫外光照射固化后接种NPSCs，加入培养基培养7 d。各组细胞采用免疫荧光染色，观察细胞形态的变化。（4）取第3代NPSCs分别接种于紫外光照射固化后的5%、10%、15% GelMA凝胶支架中，采用细胞计数（CCK）-8试剂盒检测细胞增殖能力，采用活细胞/死细胞双染试剂盒检测细胞活力，采用免疫荧光染色检测Agg和Col Ⅱ蛋白的表达情况。结果:（1）5%、10%、15%GelMA水凝胶支架的孔径分别为（94.00±1.00）、（77.33±5.69）、（52.33±2.31）μm，水接触角分别为28.00°±2.65°、39.00°±2.65°、46.00°±1.00°，压缩模量分别为（45.77±8.66）、（64.63±3.06）、（86.07±10.73）kPa。不同浓度GelMA水凝胶支架随浓度的增高，支架的孔径减小，水接触角、压缩模量增大，差异均有统计学意义（ F=102.40、49.40、21.51， P值均<0.05）。不同浓度GelMA水凝胶支架的含水量均随时间的增加而下降；而同一时间不同浓度GelMA水凝胶支架的含水量随浓度的增高而减少，3者间含水量比较差异均有统计学意义（ P值均<0.05）。（2）NPSCs三系分化结果显示，培养的NPSCs成功分化为成骨细胞、成软骨细胞、成脂细胞，有多向分化的潜能，具备干细胞的特性。（3）水凝胶支架上NPSCs随着GelMA浓度的增加，细胞形态由正常的梭形逐渐变椭圆，细胞突伸展逐渐减弱，细胞质和细胞核比例逐渐减小，细胞聚集的集落逐渐变小。（4）NPSCs增殖实验显示：培养第1天时，不同浓度的GelMA水凝胶支架上NPSCs的光密度（OD）值差异无统计学意义（ F=1.63， P=0.272）；培养第4、7天时，随GelMA水凝胶支架浓度的增高，NPSCs的OD值均呈下降趋势，差异均有统计学意义（ F=61.48、203.20， P值均<0.001）。NPSCs活力实验显示：培养第4天时，不同浓度的GelMA水凝胶支架上NPSCs活细胞占比差异无统计学意义（ F=0.15， P=0.860）；培养第7天时，随GelMA水凝胶支架浓度的增高，NPSCs活细胞占比呈下降趋势，差异有统计学意义（ F=68.83， P<0.001）。（5）5%、10%、15%GelMA水凝胶支架中Agg蛋白的免疫荧光值分别为16.79±1.29、13.35±0.70、10.475±0.54，Col Ⅱ蛋白的免疫荧光值分别为17.17±1.49、13.32±1.65、9.53±1.01。随着GelMA水凝胶浓度的增高，Agg、ColⅡ蛋白的表达均呈下降趋势，差异均有统计学意义（ F=22.10、36.64， P值均<0.001）。 结论:5%GelMA水凝胶支架具有较好的物理特性，适合NPSCs的生长、存活，能较好地促进细胞外基质相关蛋白的表达。

目的:建立尿砷质控样品的制备方法，并对其均匀性和稳定性进行验证。方法:采集健康成人尿样，浓缩后用冷冻干燥机进行冻干，对冻干后的样品采用原子荧光分光光度法进行砷含量测定。并从均匀性、稳定性、不同检测方法测定、尿砷含量定值等对冻干方法进行验证。结果:方法的标准曲线线性关系相关系数为0.999 7，尿样冻干后砷含量的变异系数均< 5%。均匀性检验结果显示，低、高浓度样品瓶内和瓶间砷含量比较，差异无统计学意义（ t = 1.09、1.53， P均> 0.05），样品均匀性良好。稳定性检验结果显示，室温条件下高、低浓度的冻干样品保存时间≤360 d的│下降率│均≤10%。以原子荧光分光光度法和电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）法测定高、低浓度冻干尿样中的砷含量，两种方法测定结果比较差异无统计学意义（ P均> 0.05）。14个省级及86个地市县级单位的尿砷含量定值结果，低浓度为（0.028 ± 0.002）mg/L，高浓度为（0.113 ± 0.008）mg/L。 结论:该制备方法冻干尿砷质控样品，冻干样品的均匀性和稳定性均能够满足于地方病防治监测中实验室的外部质量控制要求，具有可操作性。

目的:探索定向排列的三维多孔网状（A型）结构和蜂窝煤状垂直贯穿的三维多孔网状（B型）结构对人工真皮血管化速率的影响。方法:采用实验研究方法。本研究中的人工真皮为硅胶层和支架层双层结构，根据支架层结构不同，分为含A型结构和B型结构的人工真皮（以下分别简称A型真皮、B型真皮），其中的A型结构和B型结构分别采用梯度冷冻干燥技术和物理制孔技术制得。采用扫描电镜观测2种真皮支架的微观形貌。采用比重瓶法测定2种真皮支架的孔隙率。参照国家医药行业标准中的方法，于降解4、8、13、24 h测定2种真皮降解液及残留物中羟脯氨酸的含量，反映2种真皮降解率。取L929细胞，按照随机数字表法分为A型真皮组、B型真皮组、阴性对照组、阳性对照组，阳性对照组加入含体积分数5%二甲基亚砜的MEM培养基，阴性对照组加入高密度聚乙烯浸提液，其余2组加入相应的浸提液培养24 h，采用噻唑蓝试剂测定细胞增殖率，并对细胞毒性进行定级。取L929细胞和人脐静脉内皮细胞（HUVEC），接种于预先置有2种真皮的孔板。接种后1、4、7、14 d，采用免疫荧光法检测L929细胞在2种真皮支架表面的黏附生长状况。接种后7 d，采用免疫荧光法和苏木精-伊红（HE）染色法检测前述2种细胞长入2种真皮支架的情况。在3只6个月龄雄性巴马小型猪背部两侧各制作3个5.0 cm×5.0 cm的全层皮肤缺损创面，6列创面按照随机数字表法分为A型真皮两步法组、B型真皮两步法组和B型支架一步法组。A型真皮两步法组和B型真皮两步法组的创面分别先行A型真皮或B型真皮移植后，再行自体刃厚皮片的移植，B型支架一步法组的创面行B型真皮（揭除硅胶层）+自体刃厚皮片一步法移植。大体观察Ⅱ期术后7 d A型真皮两步法组和B型真皮两步法组及Ⅰ期术后14 d B型支架一步法组的猪背创面出血、渗液和感染情况。同时，采用透明胶片网格法测定自体皮移植面积并计算其存活率。Ⅰ期术后4、7、14 d，HE染色法检测3组猪背创面中支架的炎症细胞、成纤维细胞（Fb）和毛细血管浸润情况。Ⅰ期术后7 d，免疫组织化学法进一步检测3组猪背创面中支架的血管化情况。Ⅰ期术后28 d、3个月，HE染色法检测A型真皮两步法组和B型支架一步法组猪背创面中支架的降解情况。对数据行单因素方差分析、独立样本 t检验、Bonferroni校正。 结果:A型真皮支架表面均匀分布着大量圆形和椭圆形的微孔，纵切面可观察到柱状孔壁大体呈平行定向排列；B型真皮支架表面的蜂窝煤状贯穿大孔呈矩阵有序排列，纵切面蜂窝煤状贯穿孔的孔壁由微孔相互连通成网络结构。A型真皮支架的孔隙率为（93.2±0.7）%，与B型的（95.9±1.0）%相近（ t=4.653， P>0.05）。A型真皮在4、8、13、24 h的降解率与B型真皮对应时间点的降解率相近（ t=0.232、0.856、0.258、7.716， P>0.05）。培养24 h，A型真皮组、B型真皮组、阴性对照组L929细胞的增殖率显著高于阳性对照组（ t=2 393.460、2 538.270、1 077.770， P<0.01）；阳性对照组细胞毒性评级为4级，其余3组为0级。接种后1、4、7、14 d，L929细胞和HUVEC在2种真皮支架中均呈时间依赖性增殖；且2种细胞在B型真皮上的黏附生长、增殖速率高于A型真皮。接种后7 d，L929细胞和HUVEC均已长满B型真皮支架层且至硅胶层一侧；而前述2种细胞向A型真皮内部迁移速度较慢，硅胶层一侧仅见少量细胞。Ⅱ期术后7 d A型真皮两步法组和B型真皮两步法组及Ⅰ期术后14 d B型支架一步法组创面均未出现出血、渗液、感染等情况；3组各6个创面的自体皮植皮存活率均为100%。Ⅰ期术后4、7、14 d，炎症细胞、Fb、毛细血管等逐渐向创面的支架层浸润，且细胞浸润速率从高到低依次为B型支架一步法组、B型真皮两步法组、A型真皮两步法组。Ⅰ期术后7 d 3组创面中支架的血管化速率从高到低依次为B型支架一步法组、B型真皮两步法组、A型真皮两步法组。B型支架一步法组猪背创面中的支架在术后28 d逐渐溃散，术后3个月完全降解；A型真皮两步法组猪背创面中的支架降解情况与前述相似。 结论:与A型结构相比，B型结构可加速人工真皮支架血管化进程，利于联合自体刃厚皮一步法移植修复猪全层皮肤缺损创面。一步法移植的效果与分次移植人工真皮与自体刃厚皮的两步法一致，可为创面治疗提供更优选择。