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复合杂合变异所致遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症三个家系的遗传学分析
编辑人员丨4天前
目的:分析3个复合杂合变异所致的遗传性凝血因子Ⅶ(FⅦ)缺陷症家系的基因变异类型及其临床特征。方法:选取2021年12月至2022年10月就诊于温州医科大学附属第一医院的3个家系为研究对象。检测3例先证者及其家系成员的凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)和FⅦ活性(FⅦ:C)。用PCR法扩增先证者 F7基因所有的外显子及其侧翼序列,通过直接测序进行变异分析,并用反向测序进行验证,同时分析家系成员相应的变异位点。用ClustalX-2.1-win软件分析变异位点的保守性;用Varcards和Spcards在线软件预测变异位点的致病性;用Pymol软件分析变异前后蛋白质空间结构及分子作用力的变化。 结果:3例先证者的PT均明显延长,APTT在正常范围,FⅦ:C显著下降。基因分析共发现4种 F7基因变异,3例先证者均携带复合杂合变异。先证者1携带p.Cys389Gly和p.His408Gln复合杂合变异;先证者2携带p.Cys389Gly和IVS6+1G>T复合杂合变异;先证者3携带IVS6+1G>T和IVS1a+5G>A复合杂合变异。保守性分析显示p.Cys389和p.His408位点在同源物种间均呈高度保守;Varcards和Spcards软件分析显示上述变异位点均为致病性;蛋白模型分析显示p.Cys389Gly和p.His408Gln变异会分别导致蛋白质空间结构改变和氢键发生变化。 结论:3个FⅦ缺陷症先证者的FⅦ水平降低可能分别与p.Cys389Gly和p.His408Gln复合杂合变异、p.Cys389Gly和IVS6+1G>T复合杂合变异及IVS6+1G>T和IVS1a+5G>A复合杂合变异有关,这3种复合杂合变异的组合既往均未见报道。
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编辑人员丨4天前
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两个遗传性蛋白C缺陷症家系的临床特征与基因突变分析
编辑人员丨4天前
蛋白C是一种由肝细胞合成和分泌的维生素K依赖性丝氨酸蛋白酶原 [1],是机体重要的生理性抗凝物质之一。蛋白C活化后能通过水解活化凝血因子Ⅴ(FⅤa)和活化凝血因子Ⅷ(FⅧa)来抑制凝血酶的产生。遗传性蛋白C缺陷症是由编码蛋白C的基因(PROC)突变引起的导致常染色体显性遗传疾病,纯合或复合杂合突变导致的严重蛋白C缺陷症极其罕见,发病率约为1/400万 [2],临床可表现为出生后不久发生的新生儿暴发性紫癜;单杂合型遗传性蛋白C缺陷症的发病率在普通人群中为0.14%~0.50% [3],此类患者静脉血栓形成的风险可增加5~7倍。截至2021年4月,人类基因组突变数据库(HGMD)共列出391种PROC基因突变,其中错义/无义突变290种,小部分缺失突变30种。我们近期收治2例遗传性蛋白C缺陷症患者,并对其进行家系调查和基因突变分析。
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编辑人员丨4天前
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一个复合杂合突变导致的遗传性凝血因子V缺陷症家系
编辑人员丨4天前
目的:探讨一个遗传性凝血因子Ⅴ(FⅤ)缺陷症家系的分子致病机制。方法:DNA直接测序法分析先证者F5的全部外显子、侧翼序列、5′和3′端非翻译区及家系成员(共3代11人)相应的突变位点区域。通过CAT法检测凝血酶生成量;用ClustalX软件分析突变位点的保守性;用MutationTaster、PolyPhen-2、PROVEAN、LRT和SIFT等在线生物信息学软件预测突变位点对蛋白质功能的影响;用Swiss-PdbViewer软件分析氨基酸突变前后蛋白模型及分子间作用力的变化。结果:先证者F5第8外显子存在c.1258G>T杂合错义突变(p.Gly392Cys)及第14外显子存在c.4797delG杂合缺失突变,导致框移并产生截断蛋白(p.Glu1572Lys fsX19);其祖父和父亲存在p.Gly392Cys杂合突变;其外祖母、母亲、小姨母和表妹均存在p.Glu1572Lys fsX19杂合突变。先证者凝血酶生成延迟和达峰时间比值明显增高。保守性分析结果表明,p.Gly392在10种同源物种中位于保守区域。五个在线生物信息学软件对p.Gly392Cys预测均显示为致病的突变,Mutation Taster对p.Glu1572Lys fsX19预测也显示为致病突变。蛋白模型分析显示,Gly392突变为Cys392后可导致原有氢键延长,并形成新的空间位阻,影响蛋白结构的稳定性。结论:该家系F5第8外显子c.1258G>T杂合错义突变及第14外显子c.4797delG杂合缺失突变可能与该家系FⅤ水平降低有关。
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编辑人员丨4天前
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F5基因复合杂合变异导致遗传性凝血因子Ⅴ缺陷症的家系分析
编辑人员丨4天前
目的:对1个遗传性凝血因子Ⅴ(FⅤ)缺陷症家系进行基因变异分析,探讨其分子发病机制。方法:先证者,女,32岁,自幼易鼻出血,通常自愈,2021年3月10日因摔伤致膝盖血肿到空军军医大学第一附属医院就诊。其家系成员均表示无出血等相关病史。采用凝固法检测凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)和凝血因子Ⅴ活性(FⅤ:C)。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测FⅤ抗原(FⅤ:Ag)。采用Sanger测序法测定F5基因所有外显子及侧翼序列。采用ClustalX-2.1-win、PolyPhen-2及Swiss-PdbViewer软件分析错义变异位点的保守性、是否有害及其对蛋白质结构及功能的影响。采用MutationTaster及NetGene2软件分析剪切变异是否有害及其对剪切位点的影响。结果:先证者PT和APTT延长为24.0 s和69.8 s,FⅤ:C和FⅤ:Ag分别降低为6%和9%;其F5基因存在复合杂合变异,分别为6号外显子c.911G>A杂合错义变异,导致p.Gly276Glu变异;15号内含子c.5208+1G>A杂合错义变异。先证者父亲和女儿携带p.Gly276Glu杂合变异;母亲和儿子携带c.5208+1G>A杂合变异。软件分析结果表明,p.Gly276Glu杂合变异的Gly276在同源物种间保守,该变异有害,会影响蛋白局部结构及功能;c.5208+1G>A杂合变异为有害变异,且变异导致剪切位点消失,从而影响蛋白功能。结论:p.Gly276Glu和c.5208+1G>A复合杂合变异是与患者疾病相关的有害变异,可能是该家系遗传性FⅤ缺陷症的分子发病机制。
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编辑人员丨4天前
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15例遗传性凝血因子Ⅴ缺陷症先证者的临床特征与基因突变分析
编辑人员丨1个月前
目的 分析15个遗传性凝血因子Ⅴ(FⅤ)缺陷症先证者的临床特征与基因突变类型,初步探讨其可能的分子致病机制.方法 采用一期凝固法和ELISA法分别检测FⅤ活性(FⅤ∶C)和FⅤ抗原(FⅤ∶Ag).用PCR扩增患者F5基因的25个外显子及其侧翼序列,并直接测序.利用蛋白质模型分析其可能的分子机制.结果 在5例FⅤ∶C大于10%的先证者中,仅有1例出现轻微出血症状;在10例FⅤ∶C小于10%的先证者中,7例表现出各种出血症状.15例先证者共检出12个基因突变位点(其中8个为新的突变,1个为致病的多态性).蛋白质模型分析表明,所有6种错义突变都会导致FⅤ蛋白的构象改变,其中2种(p.Ser1781Arg和p.Asp96His)会减少氢键数量,从而导致局部蛋白质结构不稳定.结论 这些遗传性FⅤ缺陷症先证者的FⅤ水平与各自的F5基因突变有关,其FⅤ水平与出血症状具有较强的相关性.
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编辑人员丨1个月前
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一个遗传性凝血因子Ⅴ缺陷症家系的表型及基因突变分析
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨一个遗传性凝血因子Ⅴ (coagulation factor Ⅴ,FⅤ)缺陷症家系的表型特征及其分子致病机制.方法 在STAGO全自动血凝仪上检测先证者及家系成员(3代6名成员)凝血酶原时间(prothrombin time,PT)、活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT)、纤维蛋白原(fibrinogen,FIB)、血浆凝血因子Ⅱ活性(coagulation factorⅡactivity,FⅡ∶C)、FⅤ活性(FⅤ activity,FV∶C)、凝血因子Ⅶ活性(coagulation factorⅦactivity,FⅦ∶C)和凝血因子Ⅹ活性(coagulation factor Ⅹactivity,FⅩ ∶C)活性;ELISA方法检测FⅤ抗原(FⅤ antigen,FⅤ∶Ag).采用DNA直接测序法分析先证者F5基因的全部外显子、侧翼序列、5'和3'端非翻译区及家系成员相应的突变位点区域,发现突变位点后用反向测序予以证实.采用ClustalX软件分析突变位点的保守性,同时用生物信息学预测软件(PROVEAN和MutationTaster)分析突变对蛋白质功能的影响,用Swiss-PdbViewer软件对突变位点进行蛋白模型和氨基酸相互作用分析.结果 先证者PT和APTT均稍延长,分别为15.2s和41.8 s,FⅤ∶C和FⅤ∶Ag降低,分别为55%和62%;其父亲和儿子FⅤ∶C和FⅤ∶Ag也均有不同程度下降(分别为60%、65%和31%、40%).先证者F5基因第6外显子上发现c.911G>A杂合突变,导致Gly276Glu;其父亲和儿子也为Gly276Glu杂合子;母亲、哥哥和丈夫为正常野生型.保守性分析结果表明,Gly276在同源物种间高度保守;两个生物信息学软件对该突变的预测结果一致:PROVEAN(评分-6.214分)结果预示为有害突变;MutationTaster(评分0.976分)结果预示可引起相应疾病;突变蛋白模型分析显示,在野生型蛋白质中,Gly276的主链与Ile298之间有两个氢键,当Gly276突变为Glu276后,原有的氢键没有改变,但由于Glu侧链延长,与周围氨基酸之间增加了空间位阻,导致蛋白质稳定性下降.结论 该先证者F5基因第6外显子存在c.911G>A杂合突变,导致Gly276Glu,此突变遗传自父亲,且与该家系FⅤ水平减低有关.
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编辑人员丨2023/8/6
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一个遗传性凝血因子Ⅴ缺陷症家系表型与基因分析
编辑人员丨2023/8/6
目的 对1个由近亲结婚引起的遗传性凝血因子Ⅴ(FⅤ)缺陷症家系进行表型与基因分析,探讨其分子发病机制.方法 检测先证者及家系成员(三代6名成员)凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)、血浆FⅤ活性(FⅤ∶C)和血浆FⅤ抗原(FⅤ∶Ag)等指标进行表型诊断;用DNA直接测序法分析先证者F5基因的全部外显子、侧翼、5'和3'非翻译区及家系成员相应的突变位点区域,发现突变位点用反向测序予以证实,并用医学生物软件对该突变进行分析.结果 先证者PT和APTT均明显延长,分别为20.5 s和51.7s,其FⅤ∶C和FⅤ∶Ag分别为11.0%和12.0%.先证者F5基因第5号外显子上发现c.653T>C纯合突变,导致Phe190Ser;其父亲、母亲、女儿为Phe190Ser杂合子,FⅤ∶C和FⅤ∶Ag也均有不同程度下降(分别为54%、47%、60%和61.4%、52.1%、56.5%),丈夫和姐姐为正常野生型,其FⅤ∶C和FⅤ∶Ag均在正常水平.生物软件分析均显示该突变对FⅤ蛋白产生危害.结论 F5基因第5号外显子上c.653T>C的纯合突变是导致先证者携带Phe190Ser原因,且该Phe190Ser突变与先证者FⅤ水平减低有关.
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编辑人员丨2023/8/6
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严重烧伤合并获得性凝血因子Ⅴ缺陷症一例
编辑人员丨2023/8/6
2017年3月,笔者单位收治1例严重烧伤伴低血容量性休克患者(男,36岁),入院后,应用大量抗生素和血制品,同时多次进行植皮手术,之后患者出现创面渗血和咽喉部充血.患者既往体健,无出血或血栓性疾病家族史.实验室检查提示凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间显著延长,凝血因子Ⅴ活性极低,凝血因子抑制物定性试验结果阳性.诊断考虑获得性凝血因子Ⅴ缺陷症.应用地塞米松(5 mg,2次/d),同时输注新鲜冰冻血浆,患者凝血功能指标在4d内恢复正常,且凝血因子抑制物定性试验结果阴性,出血症状改善.
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编辑人员丨2023/8/6
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一个遗传性FⅤ缺陷症家系的表型与基因变异分析
编辑人员丨2023/8/6
目的 对1个遗传性凝血因子Ⅴ (coagulation factor Ⅴ,FⅤ)缺陷症家系进行表型和基因变异分析,探讨其分子致病机制.方法 DNA直接测序法分析先证者F5基因的全部外显子、侧翼序列、5'和3'端非翻译区及家系成员相应的变异位点区域,发现变异位点后用克隆测序证实.ClustalX软件分析变异位点的保守性,用Mutation Taster生物信息学软件预测变异位点对蛋白质功能的影响.结果 先证者血浆凝血酶原时间(prothrombin time,PT)、活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT)均延长,分别为20.3s和59.2s,其FⅤ活性(FⅤ activity,FⅤ∶C)和FⅤ抗原(FⅤ antigen,FⅤ∶Ag)降低,分别为13%和17%;其父亲、妹妹和女儿FⅤ∶C和FⅤ∶Ag也均有不同程度下降(分别为35%、37%、29%和42%、46%、35%).先证者F5基因第13外显子存在c.2851delT杂合缺失变异,导致框移并产生截短蛋白(p.Ser923LeufsX8),检出第10外显子c.1538G>A杂合变异,导致pArg485Lys;其父亲、妹妹和女儿均存在p.Ser923LeufsX8杂合变异;母亲和儿子存在p.Arg485Lys杂合多态性变异;弟弟和妻子为野生型.保守性分析结果表明,p.Ser923在同源物种间高度保守;用MutationTaster对p.Ser923LeufsX8变异的评分为1.00分,结果提示可引起相应疾病.结论 F5基因第13外显子c.2851delT杂合缺失变异及第10外显子c.1538G>A杂合变异与该家系FⅤ水平减低有关.
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编辑人员丨2023/8/6
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假性血友病合并抗血友病球蛋白缺乏症及易变因子缺乏症各一例报告
编辑人员丨2023/8/6
假性血友病(Pseudohemophilia)系因血管畸形所引起的出血性疾病,后来发现该病可合并抗血友病球蛋白缺乏症(Anti-hemophilia globulindeficiency,AHG缺乏症),乃称前者为甲型假性血友病(Type A Pseudohemophilia,指仅有血管畸形者);后者为乙型假性血友病(Type B Pseudohemophilia,指血管畸形合并抗血友病球蛋白缺乏),乙型假性血友病又称血管性血友病(Vascular hemophilia)。假性血友病不并存其他凝血因子缺陷者,其实验室检验特点主要为出血时间延长,其他均正常;如合并抗血友病球蛋白缺乏,则凝血酶元消耗时间缩短,凝血时间可延长;如合并易变因子(第Ⅴ因子)缺乏,则凝血酶元时间延长,严重时凝血时间亦可延长。先天性易变因子缺乏症又称副血友病(Parahemophilia),抗血友病球蛋白缺乏症亦即甲型血友病。假性血友病合并上述任一因子缺乏者均甚少见,兹报告笔者在上海第一医学院儿科医院工作时遇到的各一例,并就其鉴别诊断略加讨论。
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编辑人员丨2023/8/6
