蛋白C是一种由肝细胞合成和分泌的维生素K依赖性丝氨酸蛋白酶原 [1]，是机体重要的生理性抗凝物质之一。蛋白C活化后能通过水解活化凝血因子Ⅴ（FⅤa）和活化凝血因子Ⅷ（FⅧa）来抑制凝血酶的产生。遗传性蛋白C缺陷症是由编码蛋白C的基因（PROC）突变引起的导致常染色体显性遗传疾病，纯合或复合杂合突变导致的严重蛋白C缺陷症极其罕见，发病率约为1/400万 [2]，临床可表现为出生后不久发生的新生儿暴发性紫癜；单杂合型遗传性蛋白C缺陷症的发病率在普通人群中为0.14%~0.50% [3]，此类患者静脉血栓形成的风险可增加5~7倍。截至2021年4月，人类基因组突变数据库（HGMD）共列出391种PROC基因突变，其中错义/无义突变290种，小部分缺失突变30种。我们近期收治2例遗传性蛋白C缺陷症患者，并对其进行家系调查和基因突变分析。

目的:分析3个复合杂合变异所致的遗传性凝血因子Ⅶ(FⅦ)缺陷症家系的基因变异类型及其临床特征。方法:选取2021年12月至2022年10月就诊于温州医科大学附属第一医院的3个家系为研究对象。检测3例先证者及其家系成员的凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)和FⅦ活性(FⅦ：C)。用PCR法扩增先证者 F7基因所有的外显子及其侧翼序列，通过直接测序进行变异分析，并用反向测序进行验证，同时分析家系成员相应的变异位点。用ClustalX-2.1-win软件分析变异位点的保守性；用Varcards和Spcards在线软件预测变异位点的致病性；用Pymol软件分析变异前后蛋白质空间结构及分子作用力的变化。 结果:3例先证者的PT均明显延长，APTT在正常范围，FⅦ：C显著下降。基因分析共发现4种 F7基因变异，3例先证者均携带复合杂合变异。先证者1携带p.Cys389Gly和p.His408Gln复合杂合变异；先证者2携带p.Cys389Gly和IVS6＋1G>T复合杂合变异；先证者3携带IVS6＋1G>T和IVS1a＋5G>A复合杂合变异。保守性分析显示p.Cys389和p.His408位点在同源物种间均呈高度保守；Varcards和Spcards软件分析显示上述变异位点均为致病性；蛋白模型分析显示p.Cys389Gly和p.His408Gln变异会分别导致蛋白质空间结构改变和氢键发生变化。 结论:3个FⅦ缺陷症先证者的FⅦ水平降低可能分别与p.Cys389Gly和p.His408Gln复合杂合变异、p.Cys389Gly和IVS6＋1G>T复合杂合变异及IVS6＋1G>T和IVS1a＋5G>A复合杂合变异有关，这3种复合杂合变异的组合既往均未见报道。

目的:探讨一个遗传性凝血因子Ⅴ（FⅤ）缺陷症家系的分子致病机制。方法:DNA直接测序法分析先证者F5的全部外显子、侧翼序列、5′和3′端非翻译区及家系成员（共3代11人）相应的突变位点区域。通过CAT法检测凝血酶生成量；用ClustalX软件分析突变位点的保守性；用MutationTaster、PolyPhen-2、PROVEAN、LRT和SIFT等在线生物信息学软件预测突变位点对蛋白质功能的影响；用Swiss-PdbViewer软件分析氨基酸突变前后蛋白模型及分子间作用力的变化。结果:先证者F5第8外显子存在c.1258G>T杂合错义突变（p.Gly392Cys）及第14外显子存在c.4797delG杂合缺失突变，导致框移并产生截断蛋白（p.Glu1572Lys fsX19）；其祖父和父亲存在p.Gly392Cys杂合突变；其外祖母、母亲、小姨母和表妹均存在p.Glu1572Lys fsX19杂合突变。先证者凝血酶生成延迟和达峰时间比值明显增高。保守性分析结果表明，p.Gly392在10种同源物种中位于保守区域。五个在线生物信息学软件对p.Gly392Cys预测均显示为致病的突变，Mutation Taster对p.Glu1572Lys fsX19预测也显示为致病突变。蛋白模型分析显示，Gly392突变为Cys392后可导致原有氢键延长，并形成新的空间位阻，影响蛋白结构的稳定性。结论:该家系F5第8外显子c.1258G>T杂合错义突变及第14外显子c.4797delG杂合缺失突变可能与该家系FⅤ水平降低有关。

目的:对1个遗传性凝血因子Ⅴ（FⅤ）缺陷症家系进行基因变异分析，探讨其分子发病机制。方法:先证者，女，32岁，自幼易鼻出血，通常自愈，2021年3月10日因摔伤致膝盖血肿到空军军医大学第一附属医院就诊。其家系成员均表示无出血等相关病史。采用凝固法检测凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）和凝血因子Ⅴ活性（FⅤ：C）。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测FⅤ抗原（FⅤ：Ag）。采用Sanger测序法测定F5基因所有外显子及侧翼序列。采用ClustalX-2.1-win、PolyPhen-2及Swiss-PdbViewer软件分析错义变异位点的保守性、是否有害及其对蛋白质结构及功能的影响。采用MutationTaster及NetGene2软件分析剪切变异是否有害及其对剪切位点的影响。结果:先证者PT和APTT延长为24.0 s和69.8 s，FⅤ：C和FⅤ：Ag分别降低为6%和9%；其F5基因存在复合杂合变异，分别为6号外显子c.911G>A杂合错义变异，导致p.Gly276Glu变异；15号内含子c.5208+1G>A杂合错义变异。先证者父亲和女儿携带p.Gly276Glu杂合变异；母亲和儿子携带c.5208+1G>A杂合变异。软件分析结果表明，p.Gly276Glu杂合变异的Gly276在同源物种间保守，该变异有害，会影响蛋白局部结构及功能；c.5208+1G>A杂合变异为有害变异，且变异导致剪切位点消失，从而影响蛋白功能。结论:p.Gly276Glu和c.5208+1G>A复合杂合变异是与患者疾病相关的有害变异，可能是该家系遗传性FⅤ缺陷症的分子发病机制。

目的 分析15个遗传性凝血因子Ⅴ(FⅤ)缺陷症先证者的临床特征与基因突变类型,初步探讨其可能的分子致病机制.方法 采用一期凝固法和ELISA法分别检测FⅤ活性(FⅤ∶C)和FⅤ抗原(FⅤ∶Ag).用PCR扩增患者F5基因的25个外显子及其侧翼序列,并直接测序.利用蛋白质模型分析其可能的分子机制.结果 在5例FⅤ∶C大于10％的先证者中,仅有1例出现轻微出血症状;在10例FⅤ∶C小于10％的先证者中,7例表现出各种出血症状.15例先证者共检出12个基因突变位点(其中8个为新的突变,1个为致病的多态性).蛋白质模型分析表明,所有6种错义突变都会导致FⅤ蛋白的构象改变,其中2种(p.Ser1781Arg和p.Asp96His)会减少氢键数量,从而导致局部蛋白质结构不稳定.结论 这些遗传性FⅤ缺陷症先证者的FⅤ水平与各自的F5基因突变有关,其FⅤ水平与出血症状具有较强的相关性.

目的 探讨一个遗传性凝血因子Ⅴ (coagulation factor Ⅴ,FⅤ)缺陷症家系的表型特征及其分子致病机制.方法 在STAGO全自动血凝仪上检测先证者及家系成员(3代6名成员)凝血酶原时间(prothrombin time,PT)、活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT)、纤维蛋白原(fibrinogen,FIB)、血浆凝血因子Ⅱ活性(coagulation factorⅡactivity,FⅡ∶C)、FⅤ活性(FⅤ activity,FV∶C)、凝血因子Ⅶ活性(coagulation factorⅦactivity,FⅦ∶C)和凝血因子Ⅹ活性(coagulation factor Ⅹactivity,FⅩ ∶C)活性;ELISA方法检测FⅤ抗原(FⅤ antigen,FⅤ∶Ag).采用DNA直接测序法分析先证者F5基因的全部外显子、侧翼序列、5'和3'端非翻译区及家系成员相应的突变位点区域,发现突变位点后用反向测序予以证实.采用ClustalX软件分析突变位点的保守性,同时用生物信息学预测软件(PROVEAN和MutationTaster)分析突变对蛋白质功能的影响,用Swiss-PdbViewer软件对突变位点进行蛋白模型和氨基酸相互作用分析.结果 先证者PT和APTT均稍延长,分别为15.2s和41.8 s,FⅤ∶C和FⅤ∶Ag降低,分别为55％和62％;其父亲和儿子FⅤ∶C和FⅤ∶Ag也均有不同程度下降(分别为60％、65％和31％、40％).先证者F5基因第6外显子上发现c.911G＞A杂合突变,导致Gly276Glu;其父亲和儿子也为Gly276Glu杂合子;母亲、哥哥和丈夫为正常野生型.保守性分析结果表明,Gly276在同源物种间高度保守;两个生物信息学软件对该突变的预测结果一致:PROVEAN(评分-6.214分)结果预示为有害突变;MutationTaster(评分0.976分)结果预示可引起相应疾病;突变蛋白模型分析显示,在野生型蛋白质中,Gly276的主链与Ile298之间有两个氢键,当Gly276突变为Glu276后,原有的氢键没有改变,但由于Glu侧链延长,与周围氨基酸之间增加了空间位阻,导致蛋白质稳定性下降.结论 该先证者F5基因第6外显子存在c.911G＞A杂合突变,导致Gly276Glu,此突变遗传自父亲,且与该家系FⅤ水平减低有关.

目的 对1个由近亲结婚引起的遗传性凝血因子Ⅴ(FⅤ)缺陷症家系进行表型与基因分析,探讨其分子发病机制.方法 检测先证者及家系成员(三代6名成员)凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)、血浆FⅤ活性(FⅤ∶C)和血浆FⅤ抗原(FⅤ∶Ag)等指标进行表型诊断;用DNA直接测序法分析先证者F5基因的全部外显子、侧翼、5'和3'非翻译区及家系成员相应的突变位点区域,发现突变位点用反向测序予以证实,并用医学生物软件对该突变进行分析.结果 先证者PT和APTT均明显延长,分别为20.5 s和51.7s,其FⅤ∶C和FⅤ∶Ag分别为11.0％和12.0％.先证者F5基因第5号外显子上发现c.653T＞C纯合突变,导致Phe190Ser;其父亲、母亲、女儿为Phe190Ser杂合子,FⅤ∶C和FⅤ∶Ag也均有不同程度下降(分别为54％、47％、60％和61.4％、52.1％、56.5％),丈夫和姐姐为正常野生型,其FⅤ∶C和FⅤ∶Ag均在正常水平.生物软件分析均显示该突变对FⅤ蛋白产生危害.结论 F5基因第5号外显子上c.653T＞C的纯合突变是导致先证者携带Phe190Ser原因,且该Phe190Ser突变与先证者FⅤ水平减低有关.

目的 对1个遗传性凝血因子Ⅴ (coagulation factor Ⅴ,FⅤ)缺陷症家系进行表型和基因变异分析,探讨其分子致病机制.方法 DNA直接测序法分析先证者F5基因的全部外显子、侧翼序列、5'和3'端非翻译区及家系成员相应的变异位点区域,发现变异位点后用克隆测序证实.ClustalX软件分析变异位点的保守性,用Mutation Taster生物信息学软件预测变异位点对蛋白质功能的影响.结果 先证者血浆凝血酶原时间(prothrombin time,PT)、活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT)均延长,分别为20.3s和59.2s,其FⅤ活性(FⅤ activity,FⅤ∶C)和FⅤ抗原(FⅤ antigen,FⅤ∶Ag)降低,分别为13％和17％;其父亲、妹妹和女儿FⅤ∶C和FⅤ∶Ag也均有不同程度下降(分别为35％、37％、29％和42％、46％、35％).先证者F5基因第13外显子存在c.2851delT杂合缺失变异,导致框移并产生截短蛋白(p.Ser923LeufsX8),检出第10外显子c.1538G＞A杂合变异,导致pArg485Lys;其父亲、妹妹和女儿均存在p.Ser923LeufsX8杂合变异;母亲和儿子存在p.Arg485Lys杂合多态性变异;弟弟和妻子为野生型.保守性分析结果表明,p.Ser923在同源物种间高度保守;用MutationTaster对p.Ser923LeufsX8变异的评分为1.00分,结果提示可引起相应疾病.结论 F5基因第13外显子c.2851delT杂合缺失变异及第10外显子c.1538G＞A杂合变异与该家系FⅤ水平减低有关.

第Ⅴ因子（FⅤ）是分子量为330KD的单链糖蛋白，与第Ⅷ因子（FⅧ）及铜蓝蛋白之间在结构上有许多相似之处。FⅤ参与凝血过程中凝血酶的生成，促进凝血，同时，活化的蛋白C（APC）通过灭活FⅤ来抑制凝血。FⅤ缺陷根据产生机制不同可导致对APC的抵抗（APCR）引起血栓病或遗传性FⅤ缺乏症，导致出血。目前已证实部分APCR和遗传性FⅤ缺乏症均存在分子缺陷。本文主要对FⅤ的结构、功能、活化蛋白C抵抗及遗传性FⅤ缺乏症研究的最新进展作一综述。

目的 分析1例遗传性凝血因子Ⅶ(FⅦ)缺陷症的家系表型及基因突变情况.方法 选取先证者及其父母、妹妹为研究对象,分析该家系表型及基因突变情况.①家系表型分析:在IL-ALC TOP700血凝分析仪上采用凝固法检测先证者及其父母亲、妹妹的凝血酶原时间(PT)、PT纠正试验、国际标准化比值(INR)、凝血酶原活动度(PTA)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(FIB)、因子Ⅱ活性(FⅡ:C)、因子Ⅴ活性(FⅤ:C)、因子Ⅶ活性(FⅦ:C)和因子Ⅹ活性(FⅩ:C),采用ELISA法检测先证者及其父母亲、妹妹的FⅦ抗原(FⅦ:Ag);在HITACHI 7600-020型生化分析仪上采用酶法检测先证者及其父母亲、妹妹的肝功能与肾功能.②基因突变分析:采用高通量测序检测FⅦ(FⅦ)基因外显子及侧翼序列突变并以Sanger测序验证上述突变位点;ClustalX2.1软件分析突变氨基酸的保守性;生物信息学软件预测突变氨基酸是否有害;SWISS-MODEL建立蛋白模型,并用Py?MOL软件分析突变氨基酸对蛋白结构的影响.结果 ①家系实验室表型分析结果:先证者PT延长(49.00 s,能被健康人混合血浆完全纠正),INR增高(3.86),PTA下降(10％),FⅦ:C降低(0.60％),其他指标均正常;先证者父亲FⅦ:C降低(42.70％),其余指标均正常;先证者母亲FⅦ:C降低(29.70％),其余指标均正常;先证者妹妹所有指标均正常.②基因突变分析结果:测序结果显示先证者FⅦ基因第8外显子发生c.722C>A(p.Thr241Asn)杂合错义突变和FⅦ基因第7内含子发生c.681+1G>T杂合剪接位点突变,先证者父亲携带p.Thr241Asn杂合错义突变,先证者母亲携带c.681+1G>T杂合剪接位点突变,先证者妹妹为野生型;保守性分析表明,Thr241残基保守性较低;生物信息学软件分析显示,p.Thr241Asn突变可能为有害突变或影响FⅦ蛋白功能;蛋白建模显示,突变型FⅦ蛋白发生了较大的折叠及空间构象变化.结论 先证者及其父母FⅦ:C均降低,尤以先证者FⅦ:C降低最为显著,先证者妹妹FⅦ:C正常;先证者发生FⅦ基因第8外显子p.Thr241Asn杂合错义突变与FⅦ基因第7内含子c.681+1G>T杂合剪接位点突变,先证者父亲携带p.Thr241Asn杂合错义突变,先证者母亲携带c.681+1G>T杂合剪接位点突变,先证者妹妹为野生型.