目的:探索异体毛乳头细胞（DPC）对小鼠全层皮肤缺损创面愈合的影响及其机制。方法:该研究为实验研究。利用显微解剖结合胶原酶消化法自5只6周龄雄性C57BL/6J小鼠触须毛囊中提取DPC并成功鉴定。将18只8周龄雄性C57BL/6J小鼠按照随机数字表法分为磷酸盐缓冲液（PBS）组及DPC组（每组9只小鼠），在所有小鼠背部创建全层皮肤缺损创面模型。分别于伤后2、4、6 d，通过创面周围皮下注射给予DPC组小鼠含1×10 6个第4代DPC的细胞悬液100 μL、PBS组小鼠等体积的PBS。伤后3、7、10、14 d，观察2组小鼠创面愈合情况及毛发生长情况并测量创面剩余面积；另测量2组小鼠伤后14 d创面毛发覆盖面积。伤后14 d，收集2组小鼠创面组织标本，行苏木精-伊红染色观察新生毛囊情况并计数，行Masson染色观察真皮层胶原沉积情况并测量胶原沉积面积，采用免疫荧光法检测Wnt/β连环蛋白信号通路相关分子β连环蛋白、淋巴增强结合因子1（Lef1）的蛋白表达，分别采用蛋白质印迹法和实时荧光定量反转录PCR法检测β连环蛋白、Lef1的蛋白和mRNA表达。各实验样本数均为3。 结果:与PBS组相比，DPC组小鼠伤后各时间点创面再上皮化速度加快，且在伤后10、14 d可见更多毛发生长。伤后7、10、14 d，DPC组小鼠创面剩余面积分别为（13.92±2.90）、（3.69±1.78）、（1.09±0.14）mm 2，分别明显小于PBS组的（26.19±2.06）、（10.84±3.59）、（6.75±2.11）mm 2（ t值分别为5.85、3.09、4.63， P值均<0.05）。伤后14 d，DPC组小鼠创面毛发覆盖面积为（62±7）mm 2，明显大于PBS组的（35±6）mm 2（ t=2.89， P<0.05）。伤后14 d，与PBS组比较，DPC组小鼠创面组织中新生毛囊数量明显增多（ t=5.43， P<0.05），真皮层胶原沉积面积明显缩小（ t=3.56， P<0.05）。伤后14 d，免疫荧光法和蛋白质印迹法检测均显示，DPC组小鼠创面组织中β连环蛋白（ t值分别为5.49、4.25， P值均<0.05）和Lef1（ t值分别为7.50、11.54， P值均<0.05）的蛋白表达均明显高于PBS组；DPC组小鼠创面组织中β连环蛋白和Lef1的mRNA表达均明显高于PBS组（ t值分别为7.68、9.67， P<0.05）。 结论:DPC通过激活Wnt/β连环蛋白信号通路加快小鼠全层皮肤缺损创面再上皮化，并促进创面愈合过程中的毛囊再生。

目的:探究负载Wharton's Jelly衍生的间充质干细胞(WJMSC)来源的外泌体(WEX)的水凝胶对创面修复的作用.方法:从WJMSC中提取WEX,通过透射电子显微镜和纳米粒度分析仪分析WEX的形态和大小,通过蛋白质印迹法检测外泌体表面标志物(CD9、CD81和Calnexin)鉴定WEX.通过结合WEX与海藻酸钠水凝胶来制备WEX水凝胶,扫描电子显微镜观察WEX水凝胶的形态,流式细胞仪检测WEX水凝胶的流变行为,BCA法评估WEX水凝胶的体外释药性能.海藻酸纳水凝胶、WEX和WEX水凝胶作用巨噬细胞系RAW264.7后,流式细胞术检测CD86和CD206的表达.建立小鼠全层皮肤创伤模型,将小鼠随机分为空白对照组、WEX对照组和WEX水凝胶组,按照分组分别将磷酸盐缓冲液、WEX和WEX水凝胶覆盖到创面.造模第3天,取小鼠皮肤组织,采用平板计数法评价WEX水凝胶的抗菌功效.造模后第15天处死小鼠,计算残余创面百分比,苏木精-伊红染色及Masson染色后观察皮肤创面组织学变化,免疫组织化学法检测皮肤创面组织中CD86、CD206、CD31和血管内皮生长因子(VEGF)的表达.结果:成功从WJMSC中提取出WEX.制备的WEX水凝胶呈现规整的三维网络结构,具有良好的流变学和药物控释性能.WEX水凝胶可以促进体外RAW264.7细胞从M1表型极化为M2表型.空白对照组、WEX对照组和WEX水凝胶组残余创面百分比分别为(27.5±3.4)%、(15.3±1.2)%和(7.6±1.1)%,WEX水凝胶明显增强WEX对小鼠皮肤创面的修复作用(P<0.05),且抗菌性能优于WEX(P<0.05).WEX水凝胶组的真皮厚度、新生毛囊数和胶原蛋白沉积率均明显高于其余两组(均P<0.05).WEX水凝胶可抑制皮肤创面组织中CD86的阳性表达,并促进CD206、CD31和VEGF的阳性表达(均P<0.05).结论:WEX水凝胶能够通过调节巨噬细胞极化明显促进小鼠皮肤创面修复.

目的:观察丹参对大鼠皮肤创伤修复效果及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达水平的影响.方法:36只SD(Sprague-dawley)大鼠随机分为对照组和丹参组,每组18只,采用全层皮肤切除制备创伤修复动物模型,丹参组采用丹参注射液修复创面,对照组用相同剂量的生理盐水.造模后1d、3d、7d测量伤口未愈面积,并通过HE染色和免疫组织化学染色方法观察损伤区域不同时间的组织病理学改变和VEGF的表达变化.结果:大鼠皮肤创伤未愈合面积测定结果显示损伤后1d、3d、7d对照组和丹参组大鼠创伤皮肤未愈合面积均逐渐缩小,3d、7d后丹参组未愈合面积均小于对照组(P<0.05);HE染色可观察到损伤后3d丹参组小血管内红细胞淤积情况较对照组轻,新生毛细血管数量较对照组多;免疫组化染色结果显示VEGF在大鼠皮肤表皮细胞、皮脂腺上皮细胞、毛囊、中性粒细胞、巨噬细胞、成纤维细胞中有表达,但以成纤维细胞的表达为主.损伤后1d、3d,丹参组VEGF表达强度高于对照组(P<0.05).结论:丹参可通过增加血管内皮生长因子的表达水平促进大鼠创伤皮肤的修复.

目的 检测皮肤切创愈合过程中FoxO1的表达及其时间规律性变化. 方法 建立小鼠皮肤切创模型,应用免疫组织化学技术及Western印迹法检测切创后不同时间段皮肤中FoxO1的表达. 结果 HE染色显示皮肤创口正常愈合.免疫组织化学结果显示,对照组FoxO1弱表达于表皮、毛囊、皮脂腺、血管内皮及真皮中少数的成纤维细胞;伤后6~12 h创口周边区表皮及皮肤附件FoxO1表达增强,可见浸润的中性粒细胞和少量单核细胞表达FoxO1;伤后1~3 d FoxO1以单核细胞阳性表达为主;伤后5~10 d FoxO1以新生血管内皮及成纤维细胞表达为主;伤后14 d仍有少量成纤维细胞表达FoxO1.Western印迹法检测显示,创伤各组创口皮肤的FoxO1表达量均高于对照组,其中伤后12 h和伤后7 d为FoxO1的两个表达峰值.结论 FoxO1在皮肤切创愈合过程中呈现一定的时序性变化,有望成为推断创口形成时间的生物学指标.

目的 通过检测皮肤切创愈合过程中膜联蛋白A1(annexin A1,ANXA1)的表达变化,探讨其在皮肤损伤修复过程中的表达变化规律及作用.方法 制作小鼠皮肤损伤模型,分别取对照组和损伤后6 h、12 h、1 d、3 d、5 d、7 d、10 d、14 d的损伤处皮肤组织,应用苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察创口形态学变化,应用免疫组织化学技术及蛋白质印迹法检测ANXA1的表达.结果 HE染色显示皮肤创口正常愈合.免疫组织化学结果显示:对照组ANXA1表达于表皮、毛囊、皮脂腺、血管内皮;实验组伤后6～12 h在创口周边区表皮及皮肤附件中ANXA1表达增强,在中性粒细胞和少量单核细胞中呈高表达;伤后1～3 d ANXA1阳性表达以单核细胞为主;伤后5～10 d,ANXA1阳性表达以新生血管内皮及成纤维细胞为主;伤后14 d仍有少量成纤维细胞表达ANXA1.蛋白质印迹法检测结果显示,伤后6 h与对照组相比,ANXA1表达明显升高,在1 d时达到峰值,之后逐渐下降.结论 ANXA1可能参与了皮肤损伤修复的调控,在愈合过程中呈一定的时序性变化,有望成为推断创口形成时间的生物学指标.

目的 综述近年来创伤性毛囊新生(wound-induced hair follicle neogenesis,WIHN)细胞来源及相关信号通路的研究进展.方法 广泛查阅近年与WIHN相关的文献,从细胞来源、分子机制等方面进行总结讨论.结果 WIHN是一种罕见的成年哺乳动物毛囊再生现象,新生毛囊细胞来源丰富,既有创面周围来源的毛囊干细胞,也有上皮来源的干细胞.WIHN分子机制复杂,是一种多种信号通路调控的再生过程,与免疫系统密切相关,免疫细胞及其产生的各种免疫因子为这一过程提供了适宜的条件.结论 WIHN的细胞来源及分子机制等方面仍有许多未解决的间题,加强机制研究将加深对成年哺乳动物毛囊再生的了解,为皮肤功能性愈合提供新思路.

目的:研究小分子药物Tideglusib对大鼠创面愈合的影响及其机制。方法:选择40只健康雄性2月龄SD大鼠，采用随机数字表法随机分为对照组和Tideglusib组，每组20只，在其背部制作直径8 mm的圆形全层皮肤缺损创面，伤后即刻起，对照组创面滴加50 μL磷酸盐缓冲溶液(PBS)，Tideglusib组创面滴加50 μL 40 μmol/L的Tideglusib，1次/d。(1)每组按照随机数字表法选定8只大鼠，分别于伤后3、7、10 d观察创面愈合情况，并计算、比较创面愈合率。(2)每组从未进行创面观察的12只大鼠中选定6只，分别于伤后3、7、10 d取创缘组织，通过苏木精-伊红染色观察创面愈合过程中再上皮化情况、新生毛细血管情况、新生表皮厚度，Masson染色观察真皮胶原纤维排列情况，免疫组织化学染色检测驱动蛋白家族成员14(KIF14)表达水平和分布。(3)将每组剩余的6只大鼠在伤后3 d取创缘组织，经蛋白质印迹法检测蛋白激酶(PKB)、磷酸化蛋白激酶B(p-PKB)、KIF14表达水平变化。对数据行独立样本t检验。结果:(1)相较于对照组，Tideglusib组在各时相点创面明显缩小，创面渗出物更少，炎症反应更轻，肉芽组织质量更好，新生表皮延伸更多；伤后3 d，Tideglusib组创面愈合率为(12.42±3.48)%，对照组创面愈合率为(8.35±1.73)%，2组比较差异无统计学意义(t＝1.48, P＝0.56)；伤后7、10 d，Tideglusib组创面愈合率分别为(33.69±2.18)%、(73.69±3.23)%，与对照组[(21.44±2.11)%、(56.12±3.65)%]，比较，差异均有统计学意义(t＝5.71、5.08, P＝0.01、0.02)。(2)相较于对照组，Tideglusib组在各时相点创面新生表皮层次更多，同真皮连接更加完善，钉突数量更多，且厚度均厚于对照组；伤后3、7、10 d，Tideglusib组新生表皮厚度分别为(15.86±1.78)、(40.42±4.07)、(60.39±7.68) μm，厚于对照组[(6.07±1.12)、(22.25±3.24)、(36.36±6.46) μm]，2组比较差异均有统计学意义(t＝6.58、4.94、5.36，P＝0.003、0.008、<0.05)。相较于对照组，Tideglusib组在各时相点真皮形态更接近于正常大鼠皮肤，胶原更加粗大，排列更加有序，胶原纤维含量更高；伤后3、7、10 d，Tideglusib组真皮胶原纤维含量分别为(16.33±2.35)%、(37.61±3.88)%、(49.72±1.98)%，高于对照组[(7.53±2.99)%、(16.97±3.55)%、(27.06±3.81)%]，2组比较差异均有统计学意义(t＝3.27、5.55、7.47, P＝0.03、0.01、<0.05)。伤后3 d，对照组和Tideglusib组KIF14均主要表达在创缘的表皮和毛囊处；伤后7、10 d，Tideglusib组可在表皮层观察到大量棕黄色KIF14阳性表达，真皮层内也可见棕黄色颗粒分布，而对照组棕黄色颗粒分布稀疏且仅局限于表皮层；伤后3 d，Tideglusib组KIF14免疫组织化学染色平均吸光度值同对照组比较，差异无统计学意义(t＝0.994, P＝0.344)；伤后7、10 d，Tideglusib组KIF14平均吸光度值高于对照组，差异均有统计学意义(t＝3.440、2.826, P＝0.006、0.018)。(3)伤后3 d，Tideglusib组PKB蛋白相对表达量相较于对照组，差异无统计学意义(P>0.05)，p-PKB、KIF14蛋白相对表达量相较于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:小分子药物Tideglusib可加速SD大鼠创面愈合，其机制可能与上调PI3K/PKB/KIF14信号通路有关。

目的 探讨非培养皮肤细胞结合喷雾移植技术用于小型猪全层皮肤损伤的修复治疗效果.方法 巴马小型猪背部两侧创建6个直径3 cm的全层皮肤切除创面,分生理盐水组、脱细胞猪真皮基质粉组(ADM组)、多点注射细胞治疗组(细胞注射组)和喷洒细胞治疗组(细胞喷洒组)进行治疗.术后连续监测实验动物的生理状况及创面愈合情况,切取创面组织进行HE染色和细胞角蛋白-10(CK10)、CK14及血管性血友病因子(VWF)免疫组织化学染色,评估创面皮肤损伤修复效果.结果 术后14 d开始,细胞喷洒组的愈合速度更快;21 d时,细胞喷洒组创面的新生皮肤和毛发等皮肤附属器产生.HE染色结果证明,细胞治疗促进皮肤再生,且细胞喷洒组修复效率更高、新生皮肤更薄、更均一.免疫组化结果证明,术后7 d开始,细胞喷洒组中CK10阳性新生皮肤组织更长,修复速度更快;修复后期,细胞喷洒组CK10/CK14阳性新生皮肤更平整光滑,实现了美学修复.另外,细胞喷洒组VWF阳性细胞出现的时间更早,数量更多,排列更规律整齐,证明其新生皮肤富含更多的血管和毛囊,实现了功能修复.结论 非培养皮肤细胞结合喷雾移植技术的应用显著提高了小型猪全层皮肤损伤的愈合效率,更重要的是实现了创面的功能及美学修复,为后续临床转化奠定了理论和技术基础.该技术为平、战时创面的早期救治开辟了一条新的有效途径,有望成为未来烧伤治疗的新模式.