目的:探讨川乌提取物对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖和凋亡的影响及其机制。方法:分别用2.5 g/L(AR 2.5 g/L组)、5.0 g/L(AR 5.0 g/L组)和7.5 g/L(AR 7.5 g/L组)川乌提取物处理HUVECs(购自中国科学院上海细胞库)，对照组(Con)未行川乌提取物处理。将微小RNA(miRNA，miR)-NC(miR-NC组)、miR-589(miR-589组)、anti-miR-NC(anti-miR-NC组)和anti-miR-589(anti-miR-589组)分别转染至HUVECs中；将anti-miR-NC、anti-miR-589、pcDNA3.1、pcDNA3.1-蛋白激酶B1(Akt1)转染至HUVECs细胞后用5.0 g/L的川乌提取物处理，分别标记为AR 5.0 g/L＋anti-miR-NC组、AR 5.0 g/L＋anti-miR-589组、AR 5.0 g/L＋pcDNA3.1组和AR 5.0 g/L＋pcDNA3.1-Akt1组。噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡；实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-589的表达水平；蛋白质印迹法(Western blot)检测蛋白表达；双荧光素酶报告基因检测实验检测miR-589和Akt1的靶向关系。两组间比较采用 t检验。多组间比较采用SNK- q检验。 结果:不同浓度川乌提取物组HUVECs细胞增殖活性、细胞周期蛋白(Cyclin) D1、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和miR-589表达均显著低于Con组( F＝107.822、86.321、136.234， P<0.05)，凋亡率、p21和bcl-2相关X蛋白(bax)蛋白表达显著高于Con组( F＝95.875、124.365、107.541， P<0.05)。miR-589组HUVECs增殖活性、Cyclin D1和bcl-2蛋白表达显著高于miR-NC组( t＝15.358、31.109、8.971， P<0.05)，凋亡率、p21和bax蛋白表达显著低于miR-NC组( t＝23.124、21.175、11.364， P<0.05)，抑制miR-589表达可逆转川乌提取物对HUVECs增殖和凋亡的作用。miR-589可靶向调控Akt1的表达。 结论:川乌提取物可抑制HUVECs增殖并促进细胞凋亡，可能与调控miR-589/Akt1有关。

综述近年国内外川乌治疗类风湿关节炎作用机制研究文献，认为川乌的有效成分主要是通过下调TGF、IL-1、IL-6、IL-8、VEGF、NF-κB，以及瞬时感受器电位香草酸受体1型水平，上调核因子E2相关因子2水平来发挥治疗类风湿关节炎的作用。

乌头类生物碱（Aconitum alkaloids）是指存在于川乌、草乌、附子、雪上一枝蒿等毛茛科乌头属植物中的一类生物碱 [1]。我国含有乌头类生物碱的植物分布广泛，含有乌头类生物碱的成药也有销售，在风湿性关节炎、关节痛、肿瘤等疾病中均有应用 [2]。然而，乌头类生物碱治疗安全窗窄，加工处理不当、过量服用易致急性中毒，导致恶性心律失常和心源性休克，病死率达15.1% [3]。一项研究报告显示，在1961年至2010年期间，由乌头引起的中毒占全部植物性食物中毒事件的16.8%，病死率为4.6% [4]。乌头类生物碱中毒临床表现复杂多样，且人们对乌头类生物碱种类及其毒性作用认知尚不完全，导致各级医院医护人员对乌头类生物碱中毒诊治缺乏统一的认识和应有的规范。为此，急需制定相应的专家共识以指导临床实践。

心脏结构和功能的正常对人体机能活动至关重要.本文从离子通道机制、神经机制以及代谢紊乱机制出发,综述相关中药对心脏的毒理作用,发现吴茱萸和山豆根通过抑制钾通道活性,香加皮、蟾酥和夹竹桃通过抑制Na+-K+-ATP酶活性,洋金花和天仙子通过降低迷走神经作用,麻黄通过增强交感神经兴奋性,甘草通过抑制皮质醇降解,砒霜、附子、川乌、草乌、雪上一枝蒿和雷公藤通过增强氧化能力和降低抗氧化能力发挥心脏毒性作用.

目的 探究乌头生物碱及其代谢物在中毒家兔体内的死后弥散规律,为乌头生物碱中毒相关死亡案件生前服毒或死后染毒的判别提供参考依据.方法 将24只家兔经气管夹闭处死1 h后,以生川乌水煎液灌胃(以生川乌水煎液中乌头碱的LD50计算).灌胃后将家兔以仰卧位保存于25℃气候箱中,分别于0 h、4 h、8 h、12 h、24 h、48 h、72 h、96 h随机各取3只进行解剖,取心血、外周血、尿液、心脏、肝、脾、肺和肾组织,采用高效液相色谱-串联质谱法对乌头生物碱及其代谢物在各生物检材中的含量进行检测.结果 灌胃后4 h,乌头生物碱及其代谢物在心血、外周血和主要器官组织中均可检出,且含量随保存时间的延长发生动态变化.其中,脾、肝和肺中乌头生物碱及其代谢物含量均较高,尤其距离胃较近的脾中乌头生物碱及其代谢物含量最高.灌胃后48 h,家兔脾中代谢物苯甲酰新乌头原碱的平均质量分数最高;肾中乌头生物碱及其代谢物含量均偏低;尿液中未检出乌头生物碱及其代谢物.结论 乌头生物碱及其代谢物在中毒家兔体内存在死后弥散现象,且从含量高的器官(胃)扩散到其他主要器官组织及心血中,其主要机制是顺浓度梯度的弥散,而尿液不受死后弥散的影响,可考虑将其作为乌头生物碱生前服毒和死后染毒的鉴别依据.

目的 建立中药跌打膏质量控制方法,验证中药跌打膏安全性,为临床提供参考.方法 根据配方组成,采用薄层色谱法(TLC)对方中川乌、草乌、大黄、续断、泽兰进行定性鉴别,采用高效液相色谱法(HPLC)定量测定中药跌打膏中大黄素,以用于对中药跌打膏的质量控制;此外,通过皮肤急性毒性实验、皮肤刺激性实验、皮肤过敏性实验以及豚鼠皮肤组织病理学检查对中药跌打膏的安全性进行评价.结果 该实验中川乌、草乌、大黄、续断、泽兰定性鉴别方法操作简便,分离度好,专属性强.大黄素平均加样回收率为84.917 3％,RSD为1.466 1％.大黄素含量范围为1.099 9％～1.123 8％;精密度、稳定性、重复性试验的RSD分别为0.229 4％、1.835 9％、1.025 0％,均小于3.00％(n=6);安全性实验中,中药跌打膏对小鼠皮肤无刺激性,对小鼠体质量、肝肾功能无影响.一次给药后,14d观察期间各组小鼠行为活动、精神状态、饮食情况及排便均未出现异常;给药14 d后,取小鼠血液进行血常规检查,后对小鼠进行解剖取血,血常规各项指标及肝肾功能无异常,各脏器未出现肉眼可见病理变化;中药跌打膏干预后的豚鼠皮肤病理检查均未见组织病理学改变.中药跌打膏对豚鼠皮肤无刺激性,中药跌打膏对豚鼠皮肤无明显致敏.结论 该实验建立的中药跌打膏中川乌、草乌、大黄、续断、泽兰的TLC鉴别方法和大黄素含量测定方法有良好的精密度、稳定性和重复性,可用于中药跌打膏的质量控制.中药跌打膏对小鼠局部皮肤无毒性,对豚鼠皮肤无刺激性,对豚鼠皮肤无致敏性,说明中药跌打膏外用治疗疾病安全可靠.

目的:研究制川乌-白芍配伍前后的成分差异.方法:采用超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q-Orbitrap HRMS)技术,对制川乌-白芍药对及其单味药定性分析.使用Thermo Scientific Accu-core?C18色谱柱(100 mm×3 mm,2.6 μm)分离样品,以0.1％甲酸乙腈-0.1％甲酸水溶液为流动相梯度洗脱,通过Mass Range的正、负离子监测模式、全扫描及自动触发二级质谱扫描功能,对制川乌-白芍药对及其各饮片的水煎液快速分析;利用目标化合物的二级碎片离子信息对比mzVault、mzCloud数据库和对照品及相关文献报道的化合物质谱信息.结果:制川乌-白芍药对供试品共检测到184个化合物,其中56个可能为配伍后新生成的化合物,包含生物碱类化合物8个、黄酮类化合物9个、酚酸类化合物15个、苯丙素类化合物8个、其他类化合物16个.结论:该研究发现川乌配伍白芍后可产生新的化合物,为进一步研究制川乌-白芍药对的药效物质提供参考.

目的 基于中医传承辅助平台分析《中医方剂大辞典》中含地龙方剂组方规律,为地龙现代临床应用和产品研发提供理论依据.方法 整理《中医方剂大辞典》中含地龙的方剂,录入中医传承辅助平台(V2.5)软件,建立数据库,统计配伍药物频次、性味归经频次、主治病证频次;使用平台软件内置的关联规则、改进的互信息法等数据挖掘方法分析含地龙方剂的核心药物组合.选择频次较高的病证"痹证"和"跌打损伤"进行用药关联规则、核心药物组合和新方组合分析.结果 共筛选出含地龙方剂 281 首,包含药物 287 味,常用组合药物 29 种(频次≥20);配伍药物药性四气以温、寒频次为多,二者共占总频次的 73.5%;五味以辛味频次最高,苦、甘、咸频次各次之,此四者共占总频次的 95.9%;归经频次以肝、脾、心、胃、膀胱、肾、肺经居前 7 位(频次均≥400),共占总频次的 91.8%.含地龙方剂主治病证共 103 种,其中频次≥6 的病证有 18 种,核心药物组合(支持度 20%)为制川乌、乳香、没药、当归、麝香.分析"痹证"和"跌打损伤"用药规律,得到治疗"痹证"病证关联药物15组(置信度为1),核心药物组合(支持度31.8%)为制川乌、制草乌、乳香、没药、威灵仙、五灵脂;得到治疗"跌打损伤"病证关联药物20组(置信度为0.9),核心药物组合(支持度31.5%)为制川乌、乳香、没药、自然铜、苏木、当归、血竭.结论《中医方剂大辞典》中地龙多与活血化瘀类、祛风湿类药物配伍,组方用药法度清晰.利用中医传承辅助平台分析含地龙方剂能科学、直观体现地龙的组方规律;分析主治病证所得的核心用药能反映疾病的基本治法,符合临床应用实际.研究所获得的核心药物组合可为临床应用和新药研发提供参考和借鉴.

目的 基于系统药理学和基因功能相似性评价对乌头汤治疗类风湿关节炎(RA)的药材配伍关系及作用机制进行探究,并利用分子对接对核心成分与靶点进行验证.方法 采用系统药理学方法收集组方药材活性成分和潜在治疗靶点,构建蛋白质相互作用网络并通过模块分析筛选核心靶点;利用R语言对各药材治疗RA的靶点集进行基因功能相似性评价,预测药材配伍的减毒增效关系,并对核心靶点和核心成分进行分子对接.结果 筛选得到107种活性成分和29个核心靶点,推测乌头汤中各药材主要通过Medicarpin、Kanzonol W、Lico-agroisoflavone等活性成分作用于STAT3、AKT1、TNF等靶点,综合调节PI3K-Akt、Ras、AGE-RAGE等信号通路,通过抑制成纤维细胞对生长因子的有丝分裂反应、调控免疫因子和控制炎症细胞因子等发挥治疗作用;麻黄,白芍和黄芪三味药材具有较强的基因功能协同性,川乌在生物过程和分子功能上发挥着独特的作用;分子对接证实了核心成分和靶点均具有很好的对接活性.结论 预测得到了乌头汤治疗RA的核心成分和靶点,从基因功能层面探究了方剂减毒增效的配伍关系和作用机制,为进一步探究其分子机制提供了理论基础.

通过查阅相关资料,并进行分析、归纳和总结,阐释“以药制药”历史沿革、理论依据及现代研究策略.“以药制药”炮制技术最早可追溯至东汉张仲景《金匮要略方论》对蜜制川乌减毒和蒲黄炒阿胶增效的记载,后世在此启发下,“以药制药”炮制技术不断发展并有所创新.通过对历史沿革的分析,明确了七情配伍、药性理论为“以药制药”炮制技术的重要理论依据.针对“以药制药”炮制技术的现代研究概况,提出相应策略.以期为“以药制药”炮制应用提供一定的理论指导,推动“以药制药”炮制理念的应用进程并促进中药“以药制药”炮制的现代研究.