目的:通过网络药理学和分子对接技术探讨参附注射液经神经-内分泌-免疫系统调控应激反应的潜在作用机制。方法:使用中药系统药理学数据库和分析平台筛选参附注射液的主要活性成分及作用靶点，使用PharmMapper、Swiss Target Prediction平台和Uniprot数据库对靶点补充预测并统一基因名；通过检索GeneCards、OMIM、TTD、CTD、Drugbank、Disgenet和Pharmgkb数据库筛选应激反应调控的相关靶点。使用Venny2.1工具获得参附注射液与应激反应调控交集的潜在作用靶点后，导入STRING数据库构建蛋白相互作用网络并筛选关键靶点。将潜在作用靶点上传至Metascape数据库中，通过GO功能富集分析和KEGG通路富集分析进行机制研究；使用Autoduck、Pymol软件进行分子对接及可视化展示。结果:筛选并获取参附注射液主要活性成分43个，相关作用靶点257个；数据库检索到应激反应调控相关靶点4 811个，与参附注射液成分相关靶点取交集获得188个潜在作用靶点，通过蛋白相互作用网络筛选得到关键靶点14个。GO功能富集分析筛选得到18条，主要涉及循环系统及体液调控、对外来刺激及创伤的反应、MAPK级联反应、突触后膜、受体复合体、离子通道复合体、神经递质受体活性等。KEGG通路富集分析高度相关通路20条，主要涵盖神经活性配体-受体的相互作用、钙信号通路、肾上腺素能信号转导、类固醇激素生物合成、IL-17、TNF、MAPK、cGMP-PKG、PI3K-Akt、NF-κB、Toll样受体信号通路和细胞凋亡等。分子对接结果提示主要活性成分与关键靶点具有较好的结合力。结论:参附注射液中山柰酚、β-谷甾醇、去甲基棱砂贝母碱、豆甾醇、人参皂苷、蛇床子苷、次乌头碱等成分可能作用于AKT1、TNF、IL1B、PTGS2、HSP90AA1、MAPK1、NFKBIA、NR3C1、ADRB2等靶点，通过调节神经-内分泌-免疫系统功能状态、抑制炎症反应、抗氧化应激和减少细胞凋亡等机制对应激反应进行调控。

黑龙江地区属严寒之地，其地居民易罹患痹证，以寒燥夹湿证及寒热错杂证为高发证型。吴惟康、王德光、邓福树、卢芳等龙江医家针对此高发疾病具有丰富的诊疗经验，多结合当地寒冷与干燥的气候特点，兼顾当地居民饮食结构和风土人情等因素，运用乌头汤加减及活血化瘀药进行治疗。以乌头汤为底方取其温经通络、除湿止痛之功，可合补气温阳之品，寒湿困于上加桂枝、困于中加干姜、困于下加附子；可合清热利湿之品，以黄芩、黄连、黄柏分清上、中、下三焦湿热，或用四妙散、黄连温胆汤等清热祛湿常用方；还可合藤类、虫类药等活血散瘀之品。如此治疗当地痹证，常获佳效。

目的:评价乌头汤联合甲氨蝶呤治疗早期中高疾病活动度类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)的疗效。方法:回顾性纳入2015年7月-2017年6月上海市光华中西医结合医院224例接受乌头汤联合甲氨蝶呤与单纯甲氨蝶呤治疗12周的早期中高疾病活动度RA患者，按治疗方法分为联合组131例和甲氨蝶呤组93例。检测治疗前及治疗后4、8、12周的CRP、ESR水平，采用28个关节活动评分(Disease Activity Score in 28 Joints, DAS28)和健康评估问卷(Health Assessment Questionnaire, HAQ)评估疾病活动度与生活质量，并根据DAS28的改善程度计算临床缓解率和低疾病活动度(low disease activity, LDA)患者比例，评价临床疗效。结果:治疗后8、12周，联合用药组CRP( t值分别为2.100、2.488)，ESR( t值分别为2.130、2.777)水平及DAS28( t值分别为2.886、3.718)、HAQ( t值分别为2.144、2.362)评分均低于甲氨蝶呤组( P<0.05或 P<0.01)。治疗后12周，联合用药组临床缓解率[12.2%(16/131)比4.3%(4/93)； χ2＝4.188， P＝0.041]与LDA患者比例[38.9% (51/131)比25.8%(24/93)； χ2＝4.207， P＝0.040]均高于甲氨蝶呤组；联合用药组临床显效率治疗后8周[37.4%(49/131)比21.5%(20/93)； χ2＝6.450， P＝0.011]、12周[72.5%(95/131)比52.7%(49/93)； χ2＝9.316， P＝0.002]均高于甲氨蝶呤组。 结论:乌头汤与甲氨蝶呤联用可明显改善早期中高疾病活动度RA患者的临床症状，降低疾病活动度，提高生活质量，疗效优于单纯甲氨蝶呤治疗。

目的 探讨乌头汤基于核因子E2相关因子2(nuclear factor E2 related factor 2,Nrf2)/血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)通路对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)大鼠模型的治疗作用.方法 通过向膝关节腔内注射木瓜蛋白酶溶液建立KOA大鼠模型;将造模后的大鼠随机分为KOA组、乌头汤组(4.2g/kg乌头汤)、抑制剂组(30 mg/kg ML385)、乌头汤+抑制剂组(4.2 g/kg乌头汤+30 mg/kg ML385),每组10只,另取10只大鼠腔内注射生理盐水作为对照组.采用苏木精-伊红染色法观察软骨组织病理学变化并进行损伤评分;采用ELISA法检测血清中炎症因子[肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)/白细胞介素-1 β(interleukin-1 β,IL-1β)]及氧化应激[丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)]指标;采用qRT-PCR法及Western blotting法检测Nrf2、HO-1表达.结果 与对照组相比,KOA组软骨表面粗糙不平,细胞排列紊乱,层状结构消失,IL-1β、TNF-α、MDA含量增加,SOD、Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达降低,差异有统计学意义(P＜0.05);与KOA组相比,乌头汤组病理损伤得到缓解,IL-1β、TNF-α、MDA含量降低,SOD、Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达增加,差异有统计学意义(P＜0.05),但抑制剂组病理损伤进一步加剧,IL-1β、TNF-α、MDA含量增加,SOD、Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达降低,差异有统计学意义(P＜0.05);与乌头汤组相比,乌头汤+抑制剂组病理损伤较为严重,IL-1β、TNF-α、MDA含量增加,SOD、Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达降低,差异有统计学意义(P＜0.05);与抑制剂组相比,乌头汤+抑制剂组病理损伤稍有改善,IL-1β、TNF-α、MDA含量降低,SOD、Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 乌头汤可通过激活Nrf2/HO-1通路对KOA大鼠起治疗作用.

[目的]总结"张一帖内科"治疗痹病的中医辨证思路.[方法]通过跟诊学习,收集、整理、分析典型医案,查阅相关中医古籍及文献,结合新安医学"张一帖内科"主要传承人国医大师李济仁及李艳教授临证时所谈所述,从痹病病因病机、创新痹病新安理论、临证论治三个方面总结"张一帖内科"治疗痹病的辨证思路与经验,并附医案两则加以佐证.[结果]新安"张一帖内科"创新新安医学理论,创立"平衡寒热、扶元培土"学说,以"寒热三期"疗法治疗痹病,临证注重平调寒热、扶元培土、调和气血、化痰散瘀.验案一中患者反复多关节疼痛,病程长,李艳教授自创"益肾清络活血方"合乌头汤加裁"化痰散瘀",治疗痰瘀互阻型痹病;验案二中患者劳累过度,湿邪入络,多关节疼痛、肿胀、活动不利,局部有热感,神疲乏力,李艳教授辨证该患者为痹病湿热内阻兼气血亏虚证,以"清热解毒、益气活血通络"平调寒热.[结论]新安"张一帖内科"在治疗痹病实践中形成了自身独特的临床特色,辨证灵活,效果甚佳,是新安医学的重要分支,为中医药治疗痹病拓展了新思路,值得借鉴.

目的:探讨桂枝汤在治疗痹证中的应用与衍化思路.方法:通过方证对比,阅读相关古籍、文献,结合临床观察,探讨桂枝汤中的方义,进而分析桂枝汤衍化方在治疗痹证方面的演变与特点.结果:桂枝汤能滋阴和阳、调和营卫、解肌发汗,其衍化方治疗痹证的基础是其活血祛风、寒温并用、攻补兼施的特点,如桂枝加葛根汤、黄芪桂枝五物汤、桂枝附子汤、当归四逆汤、桂枝芍药知母汤、乌头桂枝汤等.结论:桂枝汤有"众方之祖""群方之冠"之称,其衍化方是众多医家经过长久实践得出,治疗痹证确有其效,为临床上痹证的治疗提供新思路,值得进一步研究.

目的:探讨乌头汤(WTD)联合甲氨蝶呤治疗大鼠类风湿关节炎(RA)的效果及其与p38MAPK通路的相关性.方法:将75只雄性Wistar大鼠随机分为空白组、RA模型组、甲氨蝶呤组、WTD组、WTD+甲氨蝶呤组,每组15只.除空白组外,其余各组通过足跖面皮下注射弗氏佐剂及牛Ⅱ型胶原建立大鼠胶原性关节炎(CIA)模型.甲氨蝶呤组大鼠予甲氨蝶呤灌胃,WTD组予WTD灌胃,WTD+甲氨蝶呤组大鼠予WTD、甲氨蝶呤灌胃,空白组及RA模型组灌胃等量生理盐水.28 d后对大鼠踝关节结构和病理改变进行评分,采用聚合酶链反应(PCR)检测Ⅱ型胶原mRNA及p38MAPK mRNA表达水平,Western blotting法检测滑膜组织p38MAPK蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验(ELIAS)检测血清TNF-α、IL-6水平.结果:RA模型组、甲氨蝶呤组、WTD组、WTD+甲氨蝶呤组大鼠Pelletier和Mankin评分均高于空白组(P<0.05);甲氨蝶呤组、WTD组、WTD+甲氨蝶呤组大鼠Pelletier和Mankin评分均低于RA模型组(P<0.05);WTD+甲氨蝶呤组大鼠Pelletier和Mankin评分低于WTD组、甲氨蝶呤组(P<0.05).RA模型组大鼠软骨细胞Ⅱ型胶原mRNA相对表达量低于空白组(P<0.05),软骨细胞p38MAPK mRNA相对表达量、滑膜组织p38MAPK蛋白相对表达量及血清TNF-α、IL-6水平均高于空白组(P<0.05);甲氨蝶呤组、WTD组、WTD+甲氨蝶呤组大鼠软骨细胞Ⅱ型胶原mRNA相对表达量高于RA模型组(P<0.05),软骨细胞p38MAPK mRNA相对表达量、滑膜组织p38MAPK蛋白相对表达量及血清TNF-α、IL-6水平均低于RA模型组(P<0.05);WTD+甲氨蝶呤组大鼠软骨细胞Ⅱ型胶原mRNA相对表达量高于WTD组、甲氨蝶呤组(P<0.05),软骨细胞p38MAPK mRNA相对表达量、滑膜组织p38MAPK蛋白相对表达量及血清TNF-α、IL-6水平均低于WTD组、甲氨蝶呤组(P<0.05).Pearson相关分析显示,各组大鼠血清TNF-α、IL-6水平与关节软骨中p38MAPK mRNA相对表达量呈正相关(P<0.05).结论:WTD联合甲氨蝶呤治疗大鼠RA的效果佳,其作用机制可能与抑制p38MAPK信号通路有关.

目的:基于虚拟筛选-分子对接-活性评价技术探讨四逆汤治疗抑郁症的药效物质基础.方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)检索四逆汤(甘草、干姜、附子)的活性成分,并根据类药五原则及相关条件进行二次筛选.通过RCSB PDB数据库检索抑郁症的作用靶点.借助Discovery StudioTM 2016 软件对四逆汤活性成分与抑郁症靶点进行分子对接,探索两者的亲和力和结合方式,进而筛选关键活性成分.HT22 细胞分为空白组、模型组、(R)-去甲乌头碱组、甘草素组及山柰酚组.除空白组外,其余各组细胞加入皮质酮(1 mol·L-1,200 μL)培养24h建立体外抑郁模型.然后,加入相应药物(1 mol·L-1,100 μL)干预24 h,光镜下观察细胞形态,TUNEL染色观察细胞凋亡情况.C57BL/6J小鼠随机分为空白组、模型组、(R)-去甲乌头碱组(10 mg·kg-1)、甘草素组(15 mg·kg-1)、山柰酚组(20 mg·kg-1).除空白组外,其余小鼠采用慢性不可预见性温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)结合孤养的方式建立抑郁模型.造模首日开始给药,每日1 次,连续28 d.末次灌胃后,通过糖水偏爱实验(sucrose preference test,SPT)、强迫游泳实验(forced swimming test,FST)与悬尾实验(tail suspension test,TST)检测各组小鼠的抑郁情绪和绝望情绪.结果:四逆汤活性成分 493 个,二次筛选得到 91 个化合物.抑郁症作用靶点 4 个,即单胺氧化酶A(monoamine oxidase A,MAO-A)、多巴胺转运体(dopamine transporter,DAT)、5-羟色胺转运体(serotonin transporter,SERT)、组胺H1 受体(histamine receptor H1,H1R).通过分子对接得到15 个四逆汤抗抑郁的关键活性成分,进一步筛选得到 3 个核心成分,即(R)-去甲乌头碱、甘草素、山柰酚.细胞实验显示,空白组细胞光泽度好,突起交错分布且相互连接;模型组细胞光泽度较差,突起连接部分断裂消失,可见细胞变圆皱缩;与模型组比较,(R)-去甲乌头碱组、甘草素组、山柰酚组细胞形态有所改善,突起连接更紧密.空白组基本无细胞凋亡;与空白组比较,模型组细胞凋亡增加;与模型组比较,(R)-去甲乌头碱组、甘草素组、山柰酚组细胞凋亡减少.动物实验显示,与空白组比较,模型组小鼠糖水偏爱度降低(P＜0.05);与模型组比较,(R)-去甲乌头碱组小鼠糖水偏爱度升高(P＜0.05).与空白组比较,模型组小鼠不动时间(TST 和 FST)增加(P＜0.05);与模型组比较,甘草素组小鼠TST不动时间减少(P＜0.05),(R)-去甲乌头碱组、甘草素组小鼠FST不动时间减少(P＜0.05).结论:本研究采用中药新药发现与评价的新模式"虚拟筛选-分子对接-活性评价",深入挖掘四逆汤抗抑郁的物质基础主要为(R)-去甲乌头碱、甘草素及山柰酚.

目的 研究四逆汤中8种成分在大鼠体内的药动学特征.方法 SD大鼠灌服四逆汤水煎液(4 g·kg-1),不同时间点采血,LC-MS/MS法测定血药浓度,并计算药动学参数.结果 乌头碱、新乌头碱、次乌头碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、甘草苷、甘草酸和甘草次酸在相应浓度范围内线性关系良好(r＞0.995),日内、日间RSD均＜12％,达峰时间(Tmax)分别为(1.08±0.38)h、(1.08±0.38)h、(0.61±0.35)h、(1.32±0.76)h、(1.67±0.29)h、(0.25± 0.12)h、(2.50±1.32)h 和(10.67±2.31)h;消除半衰期(t1/2)分别为(2.68±0.78)h、(2.61±1.68)h、(5.56±3.15)h、(2.47±1.25)h、(9.12±4.89)h、(0.89±0.22)h、(10.50±6.84)h 和(7.20±2.97)h;达峰浓度(Cmax)分别为(0.03± 0.01)ng·mL-1、(0.02±0.003)ng·mL-1、(1.11±0.15)ng·mL-1、(0.21±0.07)ng·mL-1、(0.06±0.03)ng·mL-1、(14.87±3.84)ng·mL-1、(72.60±35.06)ng·mL-1 和(249.83±130.32)ng·mL-1;浓度-时间曲线下面积(AUC 0-t)分别为(0.09±0.02)ng·h·mL-1、(0.05±0.009)ng·h·mL-1、(4.09±0.67)ng·h·mL-1、(0.99±0.06)ng·h·mL-1、(0.42±0.03)ng·h·mL-1、(19.04±2.77)ng·h·mL-1、(376.23±48.35)ng·h·mL-1 和(2726.65±1172.56)ng·h·mL-1.结论 本方法方便、快速,可用于四逆汤各成分的药动学研究.

《金匮要略》中的"大气一转"思想强调了气机通畅对人体的重要性.水气病风水表虚证,张仲景用防己黄芪汤调和在表之营卫,使阴阳相得;风水夹热证,用越婢汤宣通肺气,使肺气转;皮水夹热证,用越婢加术汤运转肺气;气虚阳郁证,用防己茯苓汤通阳化气利水.血痹轻证,以针引阳气到达病所,引阳入阴;血痹重证,用黄芪桂枝五物汤温通血脉,通阳行痹.虚劳失精,以桂枝加龙骨牡蛎汤调和在里之阴阳,使阴阳相交;虚劳腰痛,用八味肾气丸使阴阳互生;虚劳风气百疾,用薯蓣丸阴阳俱补.肺气痿弱,用麦门冬汤养阴润肺,兼清虚热,使阴得以制阳;肺痿虚寒,用甘草干姜汤辛甘化阳、培土生金."阳微阴弦"之胸痹,以栝楼薤白白酒汤温通阳气,使阴阳之气复得;心痛轻证,用桂枝生姜枳实汤散逆消痞祛寒;心痛重证,用乌头赤石脂丸收敛浮越之阳气.冲任虚寒之崩漏,用温经汤温补冲任,养血祛瘀调经,使阴阳复得.或治以行脏腑之气,以上或治以温周身之阳,治法虽众,要旨惟一:使阴阳之气相交,气血调和,邪气自祛.