目的 通过细胞实验探讨前癃通胶囊(qian long tong capsule,QLTC)能否通过调控miR-216a-5p/肿瘤蛋白翻译控制1/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(miR-216a-5p/tumor protein translationally controlled 1/mammalian target of rapamycin complex 1,miR-216a-5p/TPT1/mTORC1)信号通路抑制良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH).方法 将 25只大鼠随机分为对照组(等体积生理盐水),QLTC 低(56.25 mg/mL)、中(112.50 mg/mL)、高(225.00 mg/mL)剂量组,LBSC组(168.75 mg/mL),每组 5 只.每组灌胃 1 mL/次,2次/d,连续 5d.各组大鼠麻醉后制备含药血清.根据实验目的不同,将CP-H022细胞分 5步做实验处理,每部分实验进行独立分组.将miR-216a-5p过表达和沉默表达,及TPT1 过表达进行对照研究;RT-qPCR法检测正常和BPH模型CP-H022细胞内miR-216a-5p表达量,并观察不同浓度QLTC处理的BPH细胞中miR-216a-5p表达量的差异;细胞集落形成实验检测细胞增殖能力;CCK-8 法检测BPH模型细胞增殖;RT-qPCR法检测miR-216a-5p、TPT1 mRNA表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;生信分析、双荧光素酶实验验证miR-216a-5p与TPT1的靶向关系;过表达TPT1 后,Western blot法检测BPH细胞中TPT1/mTORC1 信号通路相关分子表达情况.结果 与对照组 1比较,模型组 1的CP-H022细胞内miR-216a-5p表达量下调(P<0.05);不同浓度的QLTC均能上调miR-216a-5p表达量(P<0.05);根据本实验结果 ,本研究将选用QLTC(高剂量)组CP-H022 细胞进行后续实验.与模型组2比较,QLTC组2细胞增殖减少、凋亡增加(P<0.05),B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)表达降低(P<0.05),Bcl-2 关联X蛋白单克隆抗体(monoclonal antibody to Bcl-2 associated X protein,Bax)、cleaved Caspase-3 表达升高(P<0.05).敲低miR-216a-5p后,与模型组4比较,QLTC组4细胞增殖增强、凋亡减少(P<0.05),Bcl-2表达升高(P<0.05),Bax、cleaved Caspase-3 表达降低(P<0.05).与mimic-NC组比较,miR-216a-5p mimic组TPT1 表达量降低(P<0.05);QLTC处理后,细胞TPT1、p-mTORC1表达均降低(P<0.05);过表达TPT1 后BPH细胞增殖功能增强(P<0.05),凋亡减少(P<0.05),Bcl-2 表达升高(P<0.05),Bax、cleaved Cas-pase-3 表达下降(P<0.05).结论 QLTC可通过介导miR-216a-5p下调TPT1/mTORC1 通路,进而抑制BPH.

目的 基于核因子E2 相关因子(nuclear factor erythroid2-related factor,Nrf)2 信号通路探讨克癃胶囊改善前列腺增生的分子机制.方法 取雄性SD大鼠60 只随机分为正常组、模型组、假手术组、非那雄胺组和克癃高、中、低剂量组.采用睾丸切除术和皮下注射丙酸睾酮的方法建立良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)大鼠模型,各药物治疗组大鼠在睾丸切除术后第 8 天,注射丙酸睾酮的同时以相应药物灌胃,持续给药 28d后处死.苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察前列腺组织病理学变化;ELISA检测各组大鼠血清中睾酮(testosterone,T),二氢睾酮(dihydrotestosterone,DHT),雌二醇(estradiol,E2)的含量;实时荧光定量PCR法检测各组大鼠前列腺组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、Nrf2 和NQO1 的mRNA表达.结果 与假手术组比较,BPH模型组大鼠前列腺组织中腺上皮呈立方状或高柱状,腺腔明显扩张,腺腔内分泌物明显增加;血清中T和DHT水平明显升高(P<0.05),E2 水平明显降低(P<0.01);前列腺组织中TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA水平显著升高(P<0.01),Nrf2 mRNA和NQO1 mRNA的表达水平显著降低(P<0.01).与模型组比较,克癃高剂量组大鼠高柱状腺上皮的数量明显减少,前列腺腺腔扩张也明显改善;克癃胶囊高、中剂量组大鼠血清E2 表达水平明显升高(P<0.05),T和DHT表达水平显著降低(P<0.05),前列腺组织NQO1 mRNA水平显著升高(P<0.01);克癃高、中、低剂量组大鼠前列腺组织Nrf2 mRNA 水平均显著升高(P<0.05),TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA水平均显著降低(P<0.05).结论 克癃胶囊可改善BPH大鼠前列腺组织的病理性增生,具体机制可能与其激活Nrf2 信号通路、抑制炎症有关.

目的:探讨克癃胶囊对H2O2刺激前列腺癌细胞(PC-3)引起的氧化应激反应的保护作用和分子机制.方法:通过H2O2作用于PC-3细胞建立氧化应激的损伤模型;利用流式细胞仪技术、化学显色法分别检测细胞内活性氧(ROS)、还原型谷胱甘肽(GSH)含量;Western Blot和RT-PCR检测细胞Nrf2通路相关因子蛋白和mRNA的表达变化.结果:克癃胶囊能降低细胞内由H2O2引起的ROS升高(P＜0.01),升高由H2O2引起的GSH降低(P＜0.01);Western Blot结果显示,加入克癃胶囊干预后Nrf2、COX-2、HO-1、NQO1蛋白表达均增强(P＜0.01);RT-PCR结果显示,克癃胶囊干预后Nrf2、COX-2、HO-1、NQO1 mRNA水平表达明显增强(P＜0.05).结论:克癃胶囊对H2O2引起PC-3细胞的氧化应激具有保护作用,其作用机制是通过调控Nrf2通路,激活体内抗炎抗氧化机制而实现的.

目的:探讨克癃胶囊对丙酸睾酮诱导的大鼠前列腺增生模型的影响及抗氧化作用机制.方法:将40只雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,克癃胶囊低、高剂量组(3.6,7.2 g·kg-1),核因子E2相关因子2(Nrf2)干预剂组,每组8只.除正常组外,其余各组均皮下注射丙酸睾酮建立前列腺增生的大鼠模型,同时给予药物灌服,连续4周.观察不同药物对前列腺湿重、前列腺指数的影响,苏木素-伊红(HE)观察病理组织形态变化,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清样品中丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)的含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测前列腺组织中Nrf2/ARE信号通路抗氧化因子Nrf2,血细素单加氧酶-1(HO-1),醌氧化还原酶1(NQO1) mRNA的表达水平.结果:与正常组比较,模型组大鼠的前列腺湿重及前列腺指数升高,前列腺上皮皱褶增生,大鼠血清GSH含量明显降低,Nrf2,HO-1和NQO1 mRNA表达明显降低(P ＜0.05,P＜0.01).与模型组比较,克癃胶囊明显降低前列腺指数,改善前列腺上皮组织的增生,促进大鼠血清GSII的含量增加(P＜0.01);克癃胶囊能上调Nrf2,HO-1和NQO1的mRNA表达水平(P ＜0.05,P＜0.01).结论:克癃胶囊能明显抑制大鼠的前列腺增生,低剂量的克癃胶囊可激活Nrf2/ARE信号通路,提高机体抗氧化能力.

目的 探讨前癃通胶囊对良性前列腺增生(BPH)大鼠前列腺组织病理形态学的影响.方法 采用双侧睾丸与附睾切除术联合经背皮下注射丙酸睾酮复制BPH大鼠模型,将造模成功60只BPH大鼠随机分为前癃通胶囊高、中、低剂量组和对照组及模型组,每组12只,另外选取12只大鼠作为空白组.从术后第8天开始至第21天,前癃通胶囊低、中、高剂量组分别给予前癃通胶囊溶液0.51、1.02、2.04 g/(kg·d)灌胃,对照组给予前列癃闭通胶囊溶液2.04g/(kg·d)灌胃,空白组和模型组给予生理盐水10 ml/(kg·d)灌胃.检测大鼠体重和前列腺湿重、体积,并计算前列腺指数;观察前列腺组织的病理变化,计算前列腺腺上皮面积、间质面积.结果 与空白组比较,模型组大鼠前列腺湿重、体积及指数均升高,前列腺病理显示腺体上皮细胞增生,腺上皮明显增厚,乳头样增生腺体向腺腔内凸出,腺腔间隙增宽,可见较多分泌物,前列腺腺上皮面积、间质面积均增大(P ＜0.05或P＜0.01);前癃通胶囊高、中剂量组与对照组能有效改善BPH大鼠前列腺病理变化,降低前列腺湿重、体积及指数,减小前列腺腺上皮面积、间质面积(P＜0.05或P＜0.01);且前癃通胶囊高剂量组效果最佳,优于对照组(P＜0.05). 结论 前癃通胶囊能改善BPH大鼠前列腺腺上皮与间质病理变化,从而缩小前列腺体积、降低前列腺指数.

目的 观察癃闭舒胶囊辅助治疗对良性前列腺增生肾虚血瘀证患者的临床疗效.方法 132例患者随机分为观察组和对照组,每组66例,对照组给予盐酸坦洛新缓释胶囊和非那雄胺片,观察组在对照组基础上加用癃闭舒胶囊,疗程12周.测定2组总有效率、国际前列腺症状评分(IPSS)、生活质量评分(QoL)、最大尿流率(Qmax)、剩余尿量(PVR)、前列腺体积及前列腺液中白细胞介素8(IL-8)、单核细胞趋化因子1(MCP-1)水平.结果 观察组总有效率显著高于对照组(P＜0.05).治疗后,2组IPSS、QoL、PVR显著降低(P＜0.05),Qmax显著升高(P＜0.05),以观察组更显著(P＜0.05);2组前列腺体积也显著减小(P＜0.05),但组间无显著差异(P＞0.05);观察组IL-8、MCP-1水平显著降低(P＜0.05),但对照组无显著变化(P＞0.05).结论 癃闭舒胶囊可通过减轻前列腺微环境中炎症来改善良性前列腺增生肾虚血瘀证患者临床症状.

目的 探讨益肾通癃胶囊对前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)模型大鼠雌雄激素比及缺氧诱导因子1α(chypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)的影响.方法 对SD雄性大鼠皮下注射丙酸睾酮5 mg/(kg·d),连续4周.造模成功后将大鼠随机分为4组:正常组、模型组、中药对照组和实验组,每组7只.实验组大鼠灌服0.365 g/kg益肾通癃胶囊混悬液;中药对照组灌服0.183 g/kg癃闭舒胶囊混悬液;正常组及模型组给予同等容量的生理盐水灌胃,连续灌胃8周后,光镜下观察前列腺组织病理学变化;称取前列腺湿重并计算前列腺指数;检测大鼠血清E2、T、DHT水平及E2/T;测定前列腺组织中HIF-1α蛋白表达.结果 与模型组比较,实验组大鼠前列腺腺体轻微增生,少数呈乳头状增生,腺腔基本恢复正常.与模型组比较,实验组大鼠前列腺体积、前列腺湿重、前列腺指数及前列腺组织中的HIF-1α蛋白表达水平均降低(P<0.01);大鼠血清中的DHT、E2、T水平降低,E2/T比值升高(P<0.01).结论 益肾通癃胶囊可能通过降低BPH模型大鼠血清中的DHT、E2、T水平,升高E2/T比值,抑制HIF-1α的表达起治疗BPH的作用.

祖国医学指出,前列腺增生归属于"精癃"范畴之中,其主要病机为男性年老肾气亏虚、血瘀、湿热、痰浊阻滞下焦、膀胱气化不利.该疾病主要以肾虚为本,而痰浊、血瘀、湿热则为标.病位在肾,经肾和膀胱.另外,疾病的发生也和下焦、脾、肺等等脏腑存在极大关联性[1].隔姜灸为一类经典中医针灸治疗疾病方式.其能够发挥出温经通络、散寒温阳、化瘀活血等功效.与针刺疗法相比,隔姜灸疗法操作起来更为简单,且患者无痛苦.当前临床中已然全面应用了隔姜灸疗法治疗相关疾病,但对于其治疗前列腺增生的报道比较少.本研究全面探讨隔姜灸联合坦索罗辛缓释胶囊治疗疾病的有效性,报告如下.

目的 探讨益气活血消癥方干预TFF/Wnt信号通路治疗良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)的作用机制.方法 取12只健康成年雄性SD大鼠作为空白对照组,将60只去势大鼠随机分为模型对照组、癃闭舒组及益气活血消癥方低、中、高剂量组,其中益气活血消癥方低、中、高剂量组药液剂量分别为10.625、21.25、42.50 g/kg,癃闭舒组药液剂量1.6875 g/kg.通过皮下注射丙酸睾酮造模,空白对照组和模型对照组使用蒸馏水灌胃,各治疗组分别使用对应的药液灌胃,30 d后处死大鼠摘除前列腺,观察各组大鼠的前列腺湿重、前列腺体积与前列腺指数变化,HE染色观察前列腺组织,qRT-PCR检测TFF2、Wnt4、Wnt6 mRNA表达.结果 益气活血消癥方与癃闭舒胶囊均能够不同程度地降低BPH模型大鼠的前列腺湿重、减少前列腺体积与前列腺指数,其中益气活血消癥方高剂量组的疗效优于癃闭舒组,且益气活血消癥方各剂量组在降低前列腺湿重、减少前列腺体积与指数方面呈现出一定的正相关性量效关系.在BPH模型大鼠前列腺组织病理形态学改变方面,以益气活血消癥方高剂量组与癃闭舒组的效果最为明显.益气活血消癥方和癃闭舒胶囊均能减少前列腺的腺泡面积和间质面积,其中癃闭舒组与益气活血消癥方中剂量组疗效相当,而益气活血消癥方各组随着剂量的增大腺泡和间质面积下降也越明显.qRT-PCR法检测结果,模型对照组的TFF2、Wnt4、Wnt6表达水平均显著升高,而各治疗组的这3项指标都有不同程度的降低,其中益气活血消癥方中、高剂量组的疗效强于癃闭舒组,且各剂量组降低TFF2、Wnt4表达水平的作用随着剂量的增加而增强.结论 益气活血消癥方可以减少前列腺的腺泡面积和间质面积,改善前列腺组织的病理形态学改变,从而发挥治疗BPH的作用.其疗效机理可能与干预TFF/Wnt信号通路,下调TFF2、Wnt4、Wnt6的表达密切相关.

目的 观察前癃通胶囊对前列腺增生大鼠前列腺组织三叶因子2(trefoil factor 2,TFF2)、Wnt4、Wnt6的影响及其作用机制.方法 取12只大鼠作为空白对照组.另取60只大鼠行去势手术,术后随机均分为前癃通高、中、低剂量组和癃闭舒组、模型对照组,于术后第8天开始皮下注射丙酸睾酮,每次1 mg/300 g,1次/d,连续30 d,建立前列腺增生大鼠模型.造模的同时,进行灌胃干预,每次1 mL/100 g,1次/d,持续30 d.前癃通低、中、高剂量组前癃通药液56.25、112.5、225.0 mg/mL;癃闭舒组给予癃闭舒药液168.75 mg/mL;空白对照组、模型对照组给予蒸馏水.末次给药结束后24 h,比较各组体质量及前列腺湿质量、体积、指数;采用HE染色法观察前列腺组织;采用Western blot检测各组大鼠前列腺组织中TFF2、Wnt4、Wnt6蛋白表达情况.结果 空白对照组前列腺腔平滑圆润,上皮低柱状,管腔内见淡粉染均质状物,间质内几乎没有血管充血、炎性细胞浸润;模型对照组前列腺腔明显扩张,腺上皮呈高柱状,腔内充满粉色浓染均质状物,有明显的炎性细胞浸润;前癃通各剂量组和癃闭舒组前列腺组织病理改变较模型对照组有不同程度的改善,腔内均质状物颜色变浅,上皮低柱状,未见明显炎性细胞浸润.其中,前癃通高剂量组与癃闭舒组改善效果更为明显.模型对照组TFF2、Wnt4、Wnt6蛋白表达水平、前列腺湿质量、体积、指数均明显大于空白对照组(P<0.05,P<0.01).前癃通中、高剂量组及癃闭舒组TFF2、Wnt4、Wnt6蛋白表达水平、前列腺湿质量、体积、指数均明显小于模型对照组(P<0.05,P<0.01).前癃通低剂量组前列腺湿质量、体积、指数均明显大于癃闭舒组(P<0.05,P<0.01).前癃通中、高剂量组Wnt4、Wnt6蛋白表达水平、前列腺湿质量、体积、指数及前癃通高剂量组TFF2蛋白表达水平均明显小于前癃通低剂量组(P<0.05,P<0.01).前癃通高剂量组前列腺体积明显小于前癃通中剂量组、癃闭舒组(P<0.01).前癃通中、高剂量组Wnt4、Wnt6蛋白及前癃通高剂量组TFF2蛋白表达水平均明显小于癃闭舒组(P<0.01).前癃通高剂量组TFF2、Wnt4蛋白表达水平明显小于前癃通中剂量组(P<0.01).结论 前癃通各剂量组在降低前列腺湿质量、减少前列腺体积与指数方面呈现出一定的正相关性量效关系.前癃通胶囊治疗前列腺增生疗效确切,其作用机制可能与干预TFF/Wnt信号通路,下调TFF2、Wnt4、Wnt6蛋白表达有关.