目的:研究瑞巴派特在NSAID相关小肠黏膜损伤中的保护作用及其相关机制。方法:选取21只C57BL/6小鼠，采用随机数字表法将其分为阴性对照组(0.9%氯化钠溶液连续灌胃4 d)、吲哚美辛建模组(20 mg/kg吲哚美辛连续灌胃4 d)和瑞巴派特干预组(20 mg/kg吲哚美辛灌胃4 h后，给予320 mg·kg -1·d -1瑞巴派特灌胃，连续4 d)，每组7只。建模结束后，通过大体观察和病理学分析吲哚美辛建模组和瑞巴派特干预组小鼠小肠黏膜损伤情况，采用ELISA法检测小鼠血清IL-6、IL-10、三叶因子3、前列腺素E2和EGF的含量，采用实时荧光定量PCR技术检测小鼠小肠组织中 IL-6、 IL-10、三叶因子3、环氧合酶2和 EGF的mRNA表达水平，采用蛋白质印迹法分析小鼠小肠组织中三叶因子3、环氧合酶2和EGF蛋白质相对表达量。采用Levent检验和独立样本 t检验进行统计学分析。 结果:瑞巴派特干预组小鼠的小肠黏膜损伤大体评分和组织学评分均低于吲哚美辛建模组[(2.80±0.45)分比(4.60±1.14)分、(1.67±0.52)分比(3.00±0.71)分]，差异均有统计学意义( t＝2.667、3.618， P＝0.029、0.006)。吲哚美辛建模组小鼠血清IL-6的含量和小肠组织中 IL-6的mRNA表达水平均高于阴性对照组，而血清IL-10的含量低于阴性对照组[(48.83±5.40) ng/L比(40.96±5.92) ng/L、5.23±2.36比1.12±0.56、(168.50±10.57)ng/L比(186.30±7.77) ng/L]，差异均有统计学意义( t＝2.307、3.372、3.366， P＝0.047、0.007、0.012)；瑞巴派特组小鼠小肠组织中 IL-6的mRNA表达水平低于吲哚美辛建模组(1.74±0.82比5.23±2.36)， IL-10的mRNA表达水平高于吲哚美辛建模组(6.44±3.46比1.22±0.83)，差异均有统计学意义( t＝3.409、3.025， P＝0.008、0.014)。吲哚美辛建模组小鼠血清三叶因子3、前列腺素E2和EGF的含量，小肠组织中三叶因子3的mRNA表达水平，小肠组织中环氧合酶2和EGF的蛋白质相对表达量均低于阴性对照组[(131.20±16.37) ng/L比(150.30±9.66) ng/L、(32.68±6.88) ng/L比(41.51±3.20) ng/L、(112.70±17.17) ng/L比(138.20±10.10) ng/L、0.43±0.22比1.20±0.50、0.33±0.25比1.30±0.43、0.28±0.19比1.15±0.10]，差异均有统计学意义( t＝2.290、2.645、2.867、3.097、3.405、7.106， P＝0.048、0.021、0.025、0.017、0.027、0.002)；瑞巴派特干预组小鼠血清中前列腺素E2、EGF的含量，小肠组织中三叶因子3、环氧合酶2和 EGF的mRNA表达水平，小肠组织中三叶因子3和EGF蛋白质相对表达量均高于吲哚美辛建模组[(43.55±5.28) ng/L比(32.68±6.88) ng/L、(153.30±15.66) ng/L比(112.70±17.17) ng/L、2.48±1.70比0.43±0.22、2.95±1.56比0.88±0.45、3.97±2.54比0.98±0.76，1.47±0.26比0.72±0.35、1.08±0.36比0.28±0.19]，差异均有统计学意义( t＝2.711、3.658、2.656、2.856、2.524、3.013、3.435， P＝0.024、0.008、0.026、0.019、0.033、0.039、0.026)。 结论:瑞巴派特通过抑制炎症因子表达，促进肠黏膜保护因子表达，进而缓解吲哚美辛所致的小肠黏膜损伤，提示瑞巴派特在NSAID相关小肠损伤中可能通过维持肠黏膜的化学屏障从而发挥黏膜保护作用。

2岁5个月男性患儿出生时在外院发现FGFR2杂合错义突变，诊断为Pfeiffer综合征。现因双眼眼球突出、暴露性角膜炎于首都医科大学附属北京同仁医院就诊。患儿表现为颅骨融合（三叶草样头颅），眼球突出明显，手指及脚趾畸形，肘关节强直或骨性融合，并伴有神经系统并发症及发育迟缓；患儿FGFR2（NM_001144916）基因c.679T>G（胸腺嘧啶>鸟嘌呤）、p.C227G（半胱氨酸>甘氨酸）杂合错义突变，其父母均未携带相同突变。综合临床表现及基因检测诊断为Pfeiffer综合征Ⅱ型。于全身麻醉下行双眼睑缘永久粘连术，术后病情稳定。

本期无重点号。论著《阿司匹林激发试验在诊断非甾体抗炎药加重呼吸道疾病中的价值》以50例慢性鼻窦炎伴鼻息肉（CRSwNP）伴/不伴哮喘的患者为研究对象，实施非甾体抗炎药加重呼吸道疾病（NERD）的规范化诊断流程，发现仅通过病史诊断会造成漏诊，鼻腔阿司匹林激发试验用于诊断NERD的准确性高、安全性良好，若鼻腔激发试验阴性，则需进一步进行口服阿司匹林激发试验。《小剂量奥马珠单抗在嗜酸粒细胞增多的难治性鼻窦炎患者扩大鼻窦开放术后的应用初探》探讨了小剂量（150 mg/月）奥马珠单抗在24例嗜酸粒细胞增多的难治性鼻窦炎患者鼻窦扩大开放术后的近期应用疗效，证实小剂量奥马珠单抗可有效控制术腔黏膜炎性反应，促进黏膜上皮化进程，在疾病早期转归关键阶段发挥重要作用。《三叶因子家族3对嗜酸粒细胞性慢性鼻窦炎鼻黏膜上皮中紧密连接的作用》收集11例对照患者鼻黏膜组织和37例慢性鼻窦炎伴鼻息肉患者鼻息肉组织，观察三叶因子家族（trefoil factor family，TFF）3对嗜酸粒细胞性慢性鼻窦炎（eCRS）鼻黏膜上皮中紧密连接蛋白的影响，发现TFF3可通过PI3K/Akt上调occludin、claudin-1和ZO-1的表达，对鼻黏膜上皮屏障有一定的保护作用，可为eCRS治疗提供新思路。《快速眼动睡眠相关阻塞性睡眠呼吸暂停儿童的临床特点及预后分析》回顾性分析62例行腺样体扁桃体切除术的中重度OSA患儿的临床资料，发现解剖因素和功能因素在快速眼动睡眠相关阻塞性睡眠呼吸暂停（REM-OSA）与非REM-OSA患儿病因中所占的权重不同，2组患儿术后OSA治愈率在不同基线阻塞性呼吸暂停低通气指数的情况下变化趋势相反。《侵犯颈段食管的局部晚期下咽癌非手术综合治疗的疗效分析》回顾性分析66例侵犯颈段食管的局部晚期下咽癌患者的临床资料，发现采用非手术综合治疗方式治疗侵犯颈段食管的局部晚期下咽癌，患者获得了较高的喉及食管保留率，治疗中的不良反应可耐受。《头颈部结节性筋膜炎的临床分析》回顾性分析7例原发于头颈部的结节性筋膜炎病例，发现其临床症状和影像学表现不典型，手术是主要治疗手段，效果良好。短篇论著《游离股前区域分叶皮瓣修复口颊癌的制备经验》通过总结72例洞穿性口颊癌缺损病例的修复资料，分享了游离股前区域分叶皮瓣的制备策略和应用经验。

目的:探讨血清可溶性程序性细胞死亡蛋白1（sPD-1）、可溶性B7同源体5（sB7-H5）和三叶因子2（TFF2）对急性胰腺炎（AP）患者病情程度和死亡风险的评估价值。方法:采用前瞻性研究的方法，选取襄阳市中心医院2020年2月至2021年2月AP患者328例（AP组），其中轻症AP（MAP）124例，中度重症AP（MSAP）106例，重症AP（SAP）98例。应用酶联免疫吸附实验法检测血清sPD-1、sB7-H5和TFF2水平，并与60例健康体检者（健康对照组）进行比较。AP患者随访90 d，生存284例，死亡44例；比较两者的淀粉酶、C-反应蛋白（CRP）、降钙素原（PCT）、急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ（APACHE Ⅱ）、序贯器官衰竭评分（SOFA）、改良CT严重指数（MCTSI）、sPD-1、sB7-H5和TFF2等。采用Pearson法进行相关性分析；采用多因素Logistic回归分析影响AP患者死亡的独立危险因素；采用受试者工作特征（ROC）曲线评估sPD-1、sB7-H5和TFF2预测AP患者死亡的效能。结果:AP组sPD-1、sB7-H5和TFF2明显高于健康对照组[（177.99 ± 17.81）ng/L比（50.20 ± 10.81）ng/L、（2.69 ± 0.72）μg/L比（1.40 ± 0.35）μg/L和（569.97 ± 38.91）μg/L比（94.59 ± 11.98）μg/L]，差异有统计学意义（ P<0.01）。MSAP和SAP患者淀粉酶、sPD-1、sB7-H5和TFF2明显高于MAP患者[（639.36 ± 91.67）和（835.24 ± 109.30）U/L比（575.24 ± 89.78）U/L、（180.13 ± 20.61）和（221.17 ± 15.70）ng/L比（142.03 ± 16.76）ng/L、（2.85 ± 0.74）和（3.34 ± 0.82）μg/L比（2.05 ± 0.52）μg/L、（539.66 ± 36.58）和（763.55 ± 40.08）μg/L比（442.90 ± 35.79）μg/L]，SAP患者明显高于MSAP患者，差异均有统计学意义（ P<0.01）。Pearson相关分析结果显示，AP患者sPD-1与sB7-H5、TFF2呈正相关（ r = 0.552和0.641， P<0.01），sB7-H5与TFF2呈正相关（ r = 0.610， P<0.01）。死亡患者淀粉酶、CRP、PCT、APACHE Ⅱ、SOFA、MCTSI、sPD-1、sB7-H5和TFF2明显高于生存患者[（1 098 ± 105）U/L比（641 ± 93）U/L、（235.60 ± 40.17）mg/L比（118.04 ± 32.90）mg/L、（4.32 ± 0.52）μg/L比（3.14 ± 0.44）μg/L、（19.39 ± 3.14）分比（11.18 ± 2.53）分、（12.13 ± 2.78）分比（7.40 ± 2.15）分、（7.12 ± 1.73）分比（4.31 ± 1.52）分、（222.23 ± 22.30）ng/L比（171.14 ± 18.50）ng/L、（3.37 ± 0.89）μg/L比（2.59 ± 0.59）μg/L和（629.27 ± 39.63）μg/L比（560.78 ± 30.45）μg/L]，差异有统计学意义（ P<0.01）。多因素Logistic回归分析结果显示，CRP、PCT、APACHE Ⅱ、SOFA、sPD-1、sB7-H5和TFF2是影响AP患者死亡的独立危险因素（ OR = 1.339、1.416、1.285、1.327、1.092、1.171和1.080，95% CI 1.145~1.566、1.146~1.751、1.132~1.460、1.150~1.531、1.024~1.164、1.072~1.280和1.031~1.131， P<0.01）。ROC曲线分析结果显示，sPD-1、sB7-H5、TFF2联合检测预测AP患者死亡的曲线下面积明显大于sPD-1、sB7-H5和TFF2单独检测（0.870比0.771、0.734和0.685）。 结论:AP患者血清sPD-1、sB7-H5和TFF2水平明显升高，且与患者病情程度有关，三者联合检测能够辅助评估AP患者的死亡风险。

目的:探讨血清三叶因子3（TFF3）、分泌型卷曲相关蛋白5（SFRP5）、半乳糖凝集素3（Gal-3）和新饱食分子蛋白1（NES-1）在单纯2型糖尿病（T2DM）、糖尿病肾病（DN）、非DN的慢性肾脏病（CKD）患者及健康对照者中的表达情况和相关性，探讨上述指标与DN的关系，建立联合使用上述4项指标的DN诊断预测公式。方法:选择2017年4月至2019年6月于天津市第三中心医院住院的T2DM、DN和CKD患者各36例，同时选取36名健康志愿者作为健康对照组。各组研究对象空腹8~10 h取静脉血离心，收集血清进行检测，比较血清TFF3、SFRP5、Gal-3、NES-1的水平，并进行Pearson相关性分析。将研究对象按是否诊断DN进行再次分组，分为DN组和非DN组（包括健康对照组、T2DM组和CKD组）。对上述4项指标进行二元logistic回归分析，建立DN诊断预测模型，并进一步通过受试者工作特征曲线（ROC）进行验证。结果:DN组的血清TFF3、Gal-3和NES-1水平均明显高于健康对照组、T2DM组和CKD组（均 P<0.05），而DN组的血清SFRP5水平明显低于健康对照组、T2DM组和CKD组（均 P<0.05），且4组间上述4项指标比较，差异均具有统计学意义（均 P<0.001）。Pearson相关性分析结果显示，上述4项指标之间具有明显的相关性（均 P<0.01）。TFF3、SFRP5、Gal-3和NES-1的ROC曲线下面积分别为0.849、0.807、0.882和0.841，4项指标联合诊断的曲线下面积（0.986）明显高于单一指标，差异均具有统计学意义（ Z=3.75、4.08、3.63、4.06，均 P<0.05）。 结论:基于血清TFF3、SFRP5、Gal-3和NES-1建立的联合预测模型能有效提高DN的诊断准确性，为DN的临床诊断提供重要依据。

目的:评价Rho亚家族蛋白A(RhoA)/Rho相关的卷曲连接蛋白激酶2(ROCK2)信号通路在三叶苷减轻大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用。方法:清洁级健康雄性SD大鼠80只，6~8周龄，体重230~280 g，采用随机数字表法分为4组( n＝20)：假手术组(S组)、脑缺血再灌注组(IR组)、脑缺血再灌注+三叶苷组(T组)和脑缺血再灌注+三叶苷+RhoA/ROCK2信号通路激动剂AA组(A组)。采用大脑中动脉栓塞法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型。T组和A组大鼠于缺血前3 d给予三叶苷15 mg/kg灌胃，2次/d，连续3 d，A组大鼠于每次灌胃前腹腔注射RhoA/ROCK2信号通路激动剂AA 10 mg/kg。于再灌注24 h时行神经行为学评分，随后处死大鼠取海马组织，采用流式细胞术检测海马神经元凋亡率，TTC染色确定脑梗死体积，采用Western blot法检测磷酸化RhoA(p-RhoA)、ROCK2和裂解的caspase-3(cleaved caspase-3)的表达，透射电镜下观察海马神经元超微结构。 结果:与S组比较，IR组大鼠神经行为学评分和海马神经元凋亡率升高，脑梗死体积增加，p-RhoA、ROCK2和cleaved caspase-3表达上调( P<0.05)，海马神经元病理学损伤加重；与IR组比较，T组大鼠神经行为学评分和海马神经元凋亡率降低，脑梗死体积减少，p-RhoA、ROCK2和cleaved caspase-3表达下调( P<0.05)，海马神经元病理学损伤减轻；与T组比较，A组大鼠神经行为学评分和海马神经元凋亡率升高，脑梗死体积增加，p-RhoA、ROCK2和cleaved caspase-3表达上调( P<0.05)，海马神经元病理学损伤加重。 结论:RhoA/ROCK2信号通路参与了三叶苷减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的过程，可能与抑制海马神经元凋亡有关。

目的:评价沉默信息调节因子1(SIRT1)/叉头框蛋白O1(FoxO1)信号通路在三叶苷减轻大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用。方法:清洁级健康雄性SD大鼠80只，6～8周龄，体质量230～280 g，采用随机数字表法分为4组( n＝20)：假手术组(S组)、脑缺血再灌注组(CIR组)、三叶苷＋脑缺血再灌注组(T组)和三叶苷＋脑缺血再灌注＋SIRT1/FoxO1信号通路抑制剂EX527组(E组)。采用大脑中动脉栓塞法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型。T组和E组大鼠于缺血前3 d时开始灌胃给予三叶苷15 mg/kg，2次/d，连续3 d；E组大鼠每次灌胃前腹腔注射EX527 5 mg/kg。于再灌注24 h时采用改良Longa评分评估神经功能，随后处死大鼠取全脑组织，采用TTC染色确定脑梗死体积，流式细胞术检测海马神经元凋亡率和ROS水平，Western blot法检测SIRT1及乙酰化FOXO1(Ac-FOXO1)表达，ELISA法检测SOD和MDA含量，HE染色后光镜下观察海马CA1区病理学结果。 结果:与S组比较，CIR组Longa评分、脑梗死体积、海马神经元凋亡率、ROS和MDA水平升高，SOD含量降低，SIRT1表达下调，Ac-FOXO1表达上调( P<0.05)；与CIR组比较，T组Longa评分、脑梗死体积、海马神经元凋亡率、ROS和MDA水平降低，SOD含量升高，SIRT1表达上调，Ac-FOXO1表达下调( P<0.05)；与T组比较，E组Longa评分、脑梗死体积、海马神经元凋亡率、ROS和MDA水平升高，SOD含量降低，SIRT1表达下调，Ac-FOXO1表达上调( P<0.05)。 结论:三叶苷可能通过激活SIRT1/FoxO1信号通路，抑制海马氧化应激反应和神经元凋亡，减轻大鼠脑缺血再灌注损伤。

目的:应用血浆蛋白质组学方法建立诊断模型，探索诊断和识别肾移植临床几乎耐受的新方法。方法:收集2011年11月至2012年11月来自华中科技大学同济医学院附属同济医院等多家医疗机构的43例受试者血浆样本。分为临床几乎耐受组(18例)、排斥反应组(12例)以及健康对照组(13例)。应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术对血浆样本进行蛋白质组学分析。使用Biomarker Wizard及Biomarker Patterns软件筛选差异质谱峰，建立诊断模型。通过检索SWISS-PROT及TrEMBL数据库，对模型节点质谱峰进行鉴定。结果:获得差异蛋白质谱峰21个( P<0.05)。建立由M2 565.15、M1 966.28、M6 674.78、M1 103.27，M1 716.69、M1 966.28五个质谱峰构成的诊断模型。模型诊断临床几乎耐受的敏感性为83.3%、特异性为92.0%、ROC曲线下面积为0.951。模型节点质谱峰的生物信息学鉴定结果为：B型利钠肽(ANFB)、黑色素浓集激素(MCH)、三叶因子1(TFF1)、强啡肽原(PDYN)、蛋白酶体激活亚3(PSME3)。 结论:通过血浆蛋白质组学方法建立诊断模型能够有效识别肾移植临床几乎耐受者。

目的:研究三叶因子家族（trefoil factor family，TFF）3对嗜酸粒细胞性慢性鼻窦炎（eCRS）鼻黏膜上皮中紧密连接（tight junctions，TJs）蛋白的影响及作用机制。方法:2020年9—12月南昌大学第一附属医院耳鼻咽喉科符合入组条件的患者为样本来源，包括11例对照患者鼻黏膜组织和37例慢性鼻窦炎伴鼻息肉（CRSwNP）患者鼻息肉组织。在鼻黏膜中，采用免疫组织化学法（IHC）检测TFFs（TFF1、TFF2和TFF3）和TJs（occludin、claudin-1和ZO-1）的定位和表达强度，实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）及免疫印迹（WB）检测TFFs和TJs的mRNA和蛋白的表达。取人鼻黏膜进行鼻黏膜上皮细胞（human nasal epithelial cells，HNECs）原代培养，用白细胞介素（IL）-13刺激，建立HNECs的TJs损伤细胞模型，确定最佳造模浓度及时间。单独或联合使用TFF3和磷脂酰肌醇3-激酶（phosphoinositide 3-kinase，PI3K）特异性抑制剂（LY294002）作用于HNECs或TJs损伤模型，RT-qPCR和WB检测TFF3对TJs及PI3K/丝氨酸/苏氨酸激酶（serine/threonine kinase，Akt）的影响。采用GraghPad Prism 7软件进行数据统计分析与作图。结果:IHC结果显示，eCRS组鼻黏膜中TFF1和TFF3表达均较对照组显著升高（ t=4.62， P=0.002； t=5.89， P<0.001），主要表达于杯状细胞；eCRS组鼻黏膜occludin、claudin-1、ZO-1表达均低于对照组（occludin t=3.98， P=0.019；claudin-1 t=5.15， P=0.002；ZO-1 t=5.42， P=0.001）。WB结果显示，TFF3在非嗜酸粒细胞性慢性鼻窦炎（Non-eCRS）组、eCRS组表达较对照组升高（ t=3.62， P=0.036； t=5.93， P<0.001），eCRS组中occludin、claudin-1和ZO-1的表达低于对照组（occludin t=5.14， P=0.002；claudin-1 t=6.35， P<0.001；ZO-1 t=6.64， P<0.001）。RT-qPCR结果显示，与对照组相比，TFF1和TFF3 mRNA水平在Non-eCRS和eCRS组鼻黏膜上皮中升高（TFF1 t=3.98， P=0.046， t=4.89， P=0.002；TFF3 t=3.50， P=0.044， t=6.78， P<0.001），TFF2 mRNA水平在Non-eCRS和eCRS组的差异无统计学意义（ t=1.34， P=0.061； t=3.37， P=0.055）。与对照组相比，Non-eCRS及eCRS组occludin、claudin-1和ZO-1 mRNA降低（occludin t=4.27， P=0.011， t=5.61， P=0.007；claudin-1 t=3.62， P=0.036， t=6.80， P<0.001；ZO-1 t=3.47， P=0.047， t=7.86， P<0.001）。eCRS鼻黏膜组织中TFF3和TJs mRNA水平呈中度正相关（occludin r=0.661，claudin-1 r=0.614，ZO-1 r=0.548， P值均<0.001）；TFF1与occludin、claudin-1和ZO-1表达呈低度正相关（occludin r=0.467， P=0.040；claudin-1 r=0.362， P=0.012；ZO-1 r=0.425， P=0.025）。细胞模型建立情况显示，与正常HNECs相比，IL-13刺激浓度在50 ng/ml时，TFF3的mRNA表达升高最明显（ t=3.72， P=0.013）；occludin、claudin-1和ZO-1的mRNA表达下降（occludin t=3.18， P=0.031；claudin-1 t=3.86， P=0.010；ZO-1 t=5.16， P=0.002）。IL-13刺激15 h的TFF3 mRNA表达升高最明显（ t=3.14， P=0.034）；occludin、claudin-1和ZO-1的mRNA表达下降（occludin t=3.97， P=0.010；claudin-1 t=4.78， P=0.004；ZO-1 t=5.16， P=0.004）。50 ng/ml IL-13处理HNECs 15 h可建立TJs损伤模型。干预实验显示，与IL-13组相比，IL-13+TFF3组TJs mRNA表达升高（occludin t=6.10， P=0.009；claudin-1 t=5.90， P=0.013；ZO-1 t=9.44， P=0.007）。与IL-13组相比，IL-13+TFF3组TJs蛋白表达升高（occludin t=3.23， P=0.013；claudin-1 t=9.40， P=0.017；ZO-1 t=2.23， P=0.032）；IL-13+TFF3+LY294002组TJs蛋白表达降低（occludin t=4.73，claudin-1 t=8.77，ZO-1 t=3.51， P值均<0.001）。IL-3+TFF3+LY294002组与IL-13+TFF3组相比，PI3K和p-Akt/Akt蛋白表达均降低（PI3K t=13.29，p-Akt/Akt t=10.30， P值均<0.001）。TFF3引起的occludin、claudin-1、ZO-1 mRNA和蛋白表达升高作用也被LY294002抑制。 结论:TFF3可通过PI3K/Akt上调occludin、claudin-1和ZO-1的表达，对鼻黏膜上皮屏障有一定的保护作用，可为eCRS治疗提供新思路。

目的:建立高效的人肠三叶因子（ITF）重组表达及纯化策略，观察重组人ITF（rhITF）对烧伤小鼠肠黏膜损伤与修复的作用并探讨其机制。方法:采用实验研究方法。采用新型酵母表达载体pGAPZαA和酵母菌X33重组表达ITF，并通过金属螯合亲和层析与阴、阳离子交换层析法纯化蛋白，行非还原十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）及蛋白质印迹法鉴定rhITF。rhITF与胃蛋白酶溶液、胰蛋白酶溶液按体积比1∶1混合，分别作用0.5、1.0、1.5、2.0 h和1.0、2.0、4.0 h后行非还原SDS-PAGE，分析rhITF的稳定性。按随机数字表法将105只6~8周龄BALB/c雄性小鼠分为假伤组（30只）、单纯烧伤组（45只）、烧伤+rhITF组（30只）。将单纯烧伤组和烧伤+rhITF组小鼠背部造成30%体表总面积Ⅲ度烧伤，假伤组小鼠模拟致假伤，烧伤+rhITF组小鼠伤后灌胃1 mg/kg rhITF，其余2组小鼠伤后给予等量生理盐水。伤后24 h，取15只单纯烧伤组小鼠，制备烧伤血清，用于细胞实验。伤后3、5、7 d，每组各取10只小鼠处死后取小肠组织，苏木精-伊红染色观察肠黏膜病理变化，分光光度法和酶联免疫吸附测定法测定肠组织二胺氧化酶（DAO）及乳酸脱氢酶（LDH）活性。取3批人结直肠腺癌HT-29细胞，分为阴性对照组、25 μg/mL rhITF组、50 μg/mL rhITF组（样本数为3），正常对照组、烧伤血清组、烧伤血清+rhITF组（样本数为3），CK869抑制剂组、CK666抑制剂组和溶剂对照组（样本数为2），分别进行相应处理，Transwell实验观察培养12 h后细胞移行。另取2批HT-29细胞，每批细胞均分为正常对照组、烧伤血清组和烧伤血清+rhITF组（样本数均为6），培养24 h后，蛋白质印迹法检测细胞腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、磷酸化AMPK（p-AMPK）、Ras相关C3肉毒杆菌毒素底物1（Rac1）及肌动蛋白相关蛋白2/3（Arp2/3）复合亚基1B（ARPC1B）蛋白表达，活化磁珠下拉实验检测细胞Rac1活性。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、SNK检验。结果:每升发酵液获得rhITF 82.35 mg，蛋白纯度高达98%，且具有良好的抗原特异性。rhITF在胃蛋白酶和胰蛋白酶溶液中较稳定，与胰蛋白酶溶液作用2.0 h后仍有45%残余，与胃蛋白酶溶液作用4.0 h后仍有90%残余。假伤组小鼠伤后各时间点肠黏膜未见充血、水肿，单纯烧伤组小鼠伤后各时间点肠黏膜主要病理表现为充血、水肿、糜烂及出血。烧伤+rhITF组小鼠伤后3、5 d肠黏膜主要以充血、水肿为主，伤后7 d肠黏膜水肿和充血减轻。与单纯烧伤组比较，假伤组、烧伤+rhITF组小鼠伤后3、5、7 d肠组织DAO和LDH活性显著升高（ P<0.05或 P<0.01）。培养12 h后，25 μg/mL rhITF组细胞移行数为（58±12）个，显著多于阴性对照组的（16±5）个（ P<0.01），显著少于50 μg/mL rhITF组的（123±9）个（ P<0.05）。培养12 h后，烧伤血清组细胞移行数为（60±13）个，显著少于正常对照组的（143±11）个和烧伤血清+rhITF组的（138±8）个（ P<0.05）。培养12 h后，溶剂对照组细胞移行数为（155±9）个，明显多于CK666抑制剂组的（33±5）个、CK869抑制剂组的（28±5）个（ P<0.01）。培养24 h后，烧伤血清组细胞AMPK、Rac1蛋白表达量与正常对照组、烧伤血清+rhITF组相近（ P>0.05），p-AMPK蛋白表达量明显高于正常对照组、烧伤血清+rhITF组（ P<0.05或 P<0.01），ARPC1B蛋白表达量明显低于正常对照组、烧伤血清+rhITF组（ P<0.05）。培养24 h后，烧伤血清组细胞Rac1活性明显低于正常对照组、烧伤血清+rhITF组（ P<0.05或 P<0.01）。 结论:本研究获得的rhITF具有较高的纯度和超强的稳定性，能耐受极端pH和蛋白酶水解，减轻烧伤小鼠肠黏膜损伤。rhITF能通过抑制AMPK磷酸化维持Rac1-Arp2/3活性，促进肠上皮细胞移行，加速肠黏膜修复。