目的 研究桃红四物汤(Taohong Siwu Decoction,THSWD)对缺血性脑卒中的微小RNA(microRNA,miR-NA)表达谱的影响,探讨THSWD治疗缺血性脑卒中的分子机制.方法 建立大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)诱导的局灶性脑缺血大鼠模型,采用单细胞RNA测序技术检测THSWD治疗后MCAO大鼠miRNA表达谱.采用GO和KEGG富集分析方法分析miRNA作用于靶基因的功能.对表达差异显著的miRNA进行RT-qPCR实验验证.结果 THSWD干预后,MCAO大鼠脑梗死区有13个miRNA表达发生变化,其中6个miRNA表达上调,7个miRNA表达下调.利用miRanda进行预测,确定了这13个miRNA的靶基因,构建了miRNA-mRNA网络,通过RT-qPCR验证了其中6个差异表达的miRNA(rno-miR-653-5 p、rno-miR-216 b-5 p、rno-miR-3547、rno-miR-217-5p、rno-miR-758-3p和rno-miR-223-3p).结论 THSWD可以通过逆转某些miRNA的异常表达来治疗缺血性脑卒中.

目的:探讨miR-216a-5p、1-磷酸鞘氨醇(S1P)、中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)在腹膜透析(PD)合并腹膜炎(PDAP)患者中的评估价值。方法:回顾性分析2020年1月至2022年2月在本院就诊的96例PD患者的临床资料，将其中22例经腹透液细菌培养确诊为PDAP的患者设为PDAP组，74例未发生PDAP的患者设为非PDAP组；对比两组患者的基本资料、腹透液中的白细胞计数(WBC)、血常规[钙、镁、磷、钾含量、血红蛋白(Hb)、血清白蛋白(ALB)]、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)，比较两组血清中的miR-216a-5p、S1P、NLR水平，采用多因素logistic回归分析影响PDAP患者发病的危险因素，采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-216a-5p、S1P、NLR表达水平对PDAP的诊断价值。结果:两组性别、年龄、糖尿病、血清Hb、ALB、钙、钾、磷、TC、TG比较，差异均无统计学意义(均 P>0.05)，而PDAP组血清中的镁低于非PDAP组( P<0.05)，腹透液中的WBC高于非PDAP组( P<0.05)。PDAP组血清中的miR-216a-5p、NLR水平均高于非PDAP组，S1P低于非PDAP组( P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示：高miR-216a-5p、高NLR均是发生PDAP的独立危险因素(均 P<0.05)，高S1P是PDAP发生的保护因素( P<0.05)；ROC曲线分析结果显示：三者联合检测PDAP的曲线下面积(AUC)为0.991，高于miR-216a-5p、S1P、NLR单独检测(AUC分别为0.879、0.837、0.900)，且其特异度均优于单独检测。 结论:高miR-216a-5p、高NLR是发生PDAP的独立危险因素，高S1P是PDAP发生的保护因素，miR-216a-5p、S1P、NLR对PDAP的诊断有一定的价值，联合检测可提高诊断效能。

目的:探讨微小RNA（miR）-216a-5p在妊娠期糖尿病（GDM）患者胎盘中的表达及其对滋养层HTR-8/SVneo细胞侵袭、迁移的影响及可能机制。方法:收集2018年10月至2019年10月烟台市烟台山医院的28例GDM孕妇（GDM组）和28例正常孕妇（对照组）胎盘组织，将体外培养HTR-8/SVneo细胞分为空白组（正常培养）、模拟物（mimics）-NC组（转染mimics-NC）和miR-216a-5p mimics组（转染miR-216a-5p mimics），采用实时荧光定量PCR检测胎盘组织和各组HTR-8/SVneo细胞中miR-216a-5p表达水平，Transwell实验检测各组HTR-8/SVneo细胞侵袭和迁移，免疫印迹法（Western blot）检测各组HTR-8/SVneo细胞中E-钙黏附蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、锌指E盒结合蛋白-1（ZEB1）和N-钙黏附分子（N-cadherin）蛋白表达，双荧光素酶报告基因实验检测miR-216a-5p和ZEB1的靶向关系。结果:与对照组比较，miR-216a-5p在GDM组胎盘组织中表达明显升高（2.86±0.35 vs 0.96±0.07, P<0.05）；与mimics-NC组比较，miR-216a-5p mimics组细胞中miR-216a-5p和E-cadherin蛋白表达水平明显升高[（1.01±0.08）vs（22.48±3.26），（0.25±0.03）vs（0.68±0.05）]，而细胞侵袭、迁移能力和细胞中Vimentin、N-cadherin、ZEB1蛋白表达水平明显降低[（106.83±9.35）vs（59.16±5.28），（205.48±18.25）vs（87.32±6.50），（0.65±0.05）vs（0.35±0.02），（0.55±0.04）vs（0.32±0.03），（0.50±0.03）vs（0.36±0.02）]（ P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验结果证实miR-216a-5p可与ZEB1靶向结合。 结论:miR-216a-5p在GDM患者胎盘组织中表达上调，可能通过靶向调控ZEB1表达抑制滋养层HTR-8/SVneo细胞转移。

目的:探讨微小RNA（miR）-216a及其靶基因SerpinB5在组织水平的表达差异，及miR-216a通过调控SerpinB5表达对不同肝癌细胞增殖的影响。方法:通过生物信息学预测并选定调控SerpinB5的miR-216a，实时聚合酶链反应验证两者在肝癌与正常组织中的表达情况；利用脂质体分别转染miR-216a模拟物和抑制剂、si-SerpinB5和pcDNA3.1-SerpinB5至HepG2和MHCC97H（简称97H）细胞中，实时聚合酶链反应和Wester-Blot检测转染前后的miR-216a和SerpinB5的表达情况，CCK8检测两者对肝癌细胞增殖的影响。结果:miR-216a在人肝癌组织的表达高于癌旁组织，差异有统计学意义（ P<0.01）；SerpinB5在人肝癌组织的表达低于癌旁组织，差异有统计学意义（ P<0.01）。在HepG2与97H中，miR-216a抑制剂与过表达SerpinB5组miR-216a表达下调，与相应对照组相比差异有统计学意义（ P<0.01）。miR-216a抑制剂与pcDNA3.1-SerpinB5组细胞增殖均低于相应对照组，差异均有统计学意义（ P<0.01）。 结论:SerpinB5高表达能抑制肝癌细胞的增殖提示其可能具有抑癌基因作用；miR-216a可能通过负调控SerpinB5表达影响肝癌细胞增殖。

目的:探讨微小RNA(miR)-216a、miR-324-5p、miR-29a在急性胰腺炎（AP）患者外周血中表达的意义及与胰腺炎并发肝损伤的相关性。方法:采用病例对照研究设计，选取2017年6月至2019年5月商丘市第一人民医院收治的130例AP患者，分为轻症AP组（MAP组）和中重症AP组（SAP组），肝损伤组54例（MAP 20例、SAP 34例）与非肝损伤组76例（均为MAP）；另选取40名健康志愿者为健康组。比较MAP组、SAP组、健康组以及肝损伤组与非肝损伤组外周血miR-216a、miR-324-5p、miR-29a表达水平，并分析其与临床指标相关性；采用受试者工作特征（ROC）曲线分析外周血各miRNA水平对AP并发肝损伤的预测价值。结果:MAP组、SAP组外周血miR-216a、miR-29a水平均高于健康组，miR-324-5p水平低于健康组（均 P<0.01）；SAP组外周血miR-216a、miR-29a水平均高于MAP组，miR-324-5p水平低于健康组（均 P<0.01）。Balthazar CT评分、急性生理与慢性健康状况评分（APACHEⅡ）评分、C反应蛋白水平、住院时间与外周血miR-216a、miR-29a水平均呈正相关（均 P<0.05），与miR-324-5p水平呈负相关（均 P<0.05）。肝损伤组外周血miR-216a、miR-29a水平高于非肝损伤组，且在肝损伤组中SAP患者高于MAP患者（均 P<0.05）；肝损伤组外周血miR-324-5p水平低于非肝损伤组，且肝损伤组中SAP患者低于MAP患者（均 P<0.05）。外周血miR-216a、miR-324-5p、miR-29a预测AP并发肝损伤的ROC曲线下面积（AUC）分别为0.694、0.750、0.814。 结论:miR-216a、miR-29a水平在AP患者外周血中表达增高，miR-324-5p水平降低，与Balthazar CT评分、APACHEⅡ评分、C反应蛋白水平、住院时间关系密切，且对AP并发肝损伤有一定预测价值，其中miR-29a预测价值最高。

目的:探究miR-216a-5p靶向Krüppel样转录因子12（KLF12）对肝癌细胞放射敏感性的影响。方法:实时反转录PCR（RT-qPCR）检测人正常肝细胞L-02，人肝癌细胞Huh7、HepG2、Hep3B、MHCC-97H中miR-216a-5p、KLF12 mRNA水平并比较。采用0、2、4、6、8 Gy X射线照射HepG2细胞2 h，比较不同剂量照射组间的miR-216a-5p、KLF12 mRNA水平。采用质粒转染构建miR-216a-5p和/或KLF12过表达的HepG2细胞，并给予4 Gy X射线照射2 h。相应的分组为miR-NC（对照）组、miR-216a-5p组、miR-216a-5p+NC组、miR-216a-5p+KLF12组、IR+miR-NC组、IR+miR-216a-5p组、IR+miR-216a-5p+NC组、IR+miR-216a-5p+KLF12组，比较分组间的miR-216a-5p、KLF12 mRNA水平。克隆形成实验检测细胞放射敏感性；CCK-8法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡。多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD- t检验。 结果:与L-02细胞相比，肝癌细胞系中KLF12 mRNA水平升高，miR-216a-5p水平降低（ P<0.05）。与0 Gy组相比，2、4、6、8 Gy组KLF12 mRNA水平降低，miR-216a-5p水平升高（ P<0.05）。过表达miR-216a-5p或放射处理能够增强细胞放射敏感性和凋亡水平，并降低细胞增殖水平（ P<0.05）；且过表达miR-216a-5p同时放射处理对细胞上述效果更加明显（ P<0.05）。过表达KLF12能部分逆转过表达miR-216a-5p对细胞的上述效果（ P<0.05）。 结论:miR-216a-5p通过调控KLF12降低细胞增殖能力，增强细胞放射敏感性和细胞凋亡。

目的 探讨2型糖尿病(T2DM)患者血清环状Ⅰ型胶原α2(circCOL1A2)和微小RNA-25-3p(miR-25-3p)水平与糖尿病视网膜病变(DR)的关系.方法 纳入2020年5月—2022年6月在沧州市中心医院进行治疗的T2DM患者108例(216只眼),根据是否发生DR分为DR组56例(112只眼),非DR(NDR)组52例(104只眼),同时选取同期到本院进行体检的健康者45例(90只眼)作为对照组.分别采集对照组体检时、DR组和NDR组入院后的静脉血 4～6 mL.采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)方法检测 3 组circCOL1A2、miR-25-3p相对表达量,并检测血清生化指标.分析血清circCOL1A2、miR-25-3p水平的相关性,及二者与DR发生的相关性,并评估对DR发生的影响价值.结果 (1)circCOL1A2、miR-25-3p水平:3组间血清circCOL1A2水平比较,差异有统计学意义(F=685.891,P=0.000).NDR、DR组血清circCOL1A2水平均高于对照组,差异均有统计学意义(qNDR=15.969、qDR=50.526,均P=0.000),DR组血清circCOL1A2水平高于NDR组,差异有统计学意义(q=35.641,P=0.000).3 组间血清miR-25-3p水平比较,差异有统计学意义(F=583.834,P=0.000).NDR、DR组血清miR-25-3p水平均高于对照组,差异均有统计学意义(qNDR=10.101、qDR=45.157,均P=0.000).DR组血清miR-25-3p水平高于NDR组,差异有统计学意义(q=36.169,P=0.000).(2)生化指标:DR组和NDR组生化指标比较,DR组患者血清C反应蛋白(CRP)、尿酸(UA)水平均高于NDR组,差异均有统计学意义(tUA=3.320,P=0.001;tCRP=8.705,P=0.000).2组患者其余血清生化指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05).(3)不同分期DR患者血清circCOL1A2、miR-25-3p水平比较:Ⅰ期到Ⅴ期患者血清circCOL1A2 水平比较,差异有统计学意义(F=32.900,P=0.000).且Ⅰ期到Ⅴ期患者circCOL1A2水平依次升高,差异均有统计学意义(qⅠ-Ⅱ=4.102,P=0.042;qⅡ-Ⅲ=4.674,P=0.014;qⅢ-Ⅳ=4.359,P=0.026;qⅣ-Ⅴ=4.347,P=0.027).Ⅰ期到Ⅴ期患者血清miR-25-3p水平比较,差异有统计学意义(F=32.407,P=0.000).且Ⅰ期到Ⅴ期患者miR-25-3p水平依次升高,差异均有统计学意义(qⅠ-Ⅱ=5.206,P=0.005;qⅡ-Ⅲ=4.187,P=0.036;qⅢ-Ⅳ=4.165,P=0.037;qⅣ-Ⅴ=4.064,P=0.045).(4)circCOL1A2、miR-25-3p水平与DR的相关性分析:T2DM患者血清circCOL1A2、miR-25-3p水平均与DR发生呈正相关(rcircCOL1A2=0.382、rmiR-25-3p=0.479,均P=0.000).(5)血清circCOL1A2与miR-25-3p的相关性分析:T2DM患者血清circCOL1A2与miR-25-3p呈正相关(r=0.564,P=0.000).(6)T2DM患者DR发生的相关因素分析:CRP、UA、circCOL1A2、miR-25-3p水平为T2DM患者发生DR的危险因素.结论 T2DM患者发生DR时血清circCOL1A2、miR-25-3p表达上调,二者与DR发生呈正相关,联合检测对T2DM患者发生DR具有一定的预测价值.

目的 通过细胞实验探讨前癃通胶囊(qian long tong capsule,QLTC)能否通过调控miR-216a-5p/肿瘤蛋白翻译控制1/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(miR-216a-5p/tumor protein translationally controlled 1/mammalian target of rapamycin complex 1,miR-216a-5p/TPT1/mTORC1)信号通路抑制良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH).方法 将 25只大鼠随机分为对照组(等体积生理盐水),QLTC 低(56.25 mg/mL)、中(112.50 mg/mL)、高(225.00 mg/mL)剂量组,LBSC组(168.75 mg/mL),每组 5 只.每组灌胃 1 mL/次,2次/d,连续 5d.各组大鼠麻醉后制备含药血清.根据实验目的不同,将CP-H022细胞分 5步做实验处理,每部分实验进行独立分组.将miR-216a-5p过表达和沉默表达,及TPT1 过表达进行对照研究;RT-qPCR法检测正常和BPH模型CP-H022细胞内miR-216a-5p表达量,并观察不同浓度QLTC处理的BPH细胞中miR-216a-5p表达量的差异;细胞集落形成实验检测细胞增殖能力;CCK-8 法检测BPH模型细胞增殖;RT-qPCR法检测miR-216a-5p、TPT1 mRNA表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;生信分析、双荧光素酶实验验证miR-216a-5p与TPT1的靶向关系;过表达TPT1 后,Western blot法检测BPH细胞中TPT1/mTORC1 信号通路相关分子表达情况.结果 与对照组 1比较,模型组 1的CP-H022细胞内miR-216a-5p表达量下调(P<0.05);不同浓度的QLTC均能上调miR-216a-5p表达量(P<0.05);根据本实验结果 ,本研究将选用QLTC(高剂量)组CP-H022 细胞进行后续实验.与模型组2比较,QLTC组2细胞增殖减少、凋亡增加(P<0.05),B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)表达降低(P<0.05),Bcl-2 关联X蛋白单克隆抗体(monoclonal antibody to Bcl-2 associated X protein,Bax)、cleaved Caspase-3 表达升高(P<0.05).敲低miR-216a-5p后,与模型组4比较,QLTC组4细胞增殖增强、凋亡减少(P<0.05),Bcl-2表达升高(P<0.05),Bax、cleaved Caspase-3 表达降低(P<0.05).与mimic-NC组比较,miR-216a-5p mimic组TPT1 表达量降低(P<0.05);QLTC处理后,细胞TPT1、p-mTORC1表达均降低(P<0.05);过表达TPT1 后BPH细胞增殖功能增强(P<0.05),凋亡减少(P<0.05),Bcl-2 表达升高(P<0.05),Bax、cleaved Cas-pase-3 表达下降(P<0.05).结论 QLTC可通过介导miR-216a-5p下调TPT1/mTORC1 通路,进而抑制BPH.

目的 探讨circCLK3/miR-216a-5p分子轴对乳腺癌MDA-MB-453细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及其可能作用机制.方法 收集2020-02-01-2022-05-31天津医科大学肿瘤医院63例经病理确诊为乳腺癌的患者癌及癌旁组织(距癌周≥5 cm).采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测乳腺癌患者癌及癌旁组织标本与MDA-MB-453细胞中circCLK3 和 miR-216a-5p 的表达量;体外培养人乳腺癌细胞 MDA-MB-453,将 si-NC、si-circCLK3、miR-NC 和 miR-216a-5p分别转染至 MDA-MB-453 细胞,将 si-circCLK3+anti-miR-NC 和 si-circCLK3+anti-miR-216a-5p 分别共转染至MDA-MB-453细胞;双荧光素酶报告实验检测circCLK3与miR-216a-5p的靶向关系;MTT法、平板克隆形成实验、流式细胞术与Transwell实验分别检测细胞增殖、克隆形成、凋亡、迁移及侵袭能力;蛋白质印迹法检测MDA-MB-453细胞中Bax和Bcl-2蛋白表达量.结果 与癌旁组织(0.96±0.13)相比,乳腺癌组织(2.37±0.38)中circCLK3的表达量升高,t=27.866,P＜0.001;miR-216a-5p 的表达量(1.03±0.14 vs 0.43±0.08)降低,t=29.535,P＜0.001.与 si-NC 组比较,转染si-circCLK3上调miR-216a-5p的表达(t=29.684,P＜0.001),抑制了细胞生长以及侵袭和迁移能力,t值分别为 20.743、22.395 和 27.915,均 P＜0.001,增加了细胞凋亡,t=37.221,P＜0.001.与 miR-NC 组比较,转染 miR-216a-5p抑制了细胞生长以及侵袭和迁移能力,t值分别为21.266、28.590和27.756,均P＜0.001,增加了细胞凋亡,t=36.884,P＜0.001.与 si-circCLK3+anti-miR-NC 组相比,si-circCLK3+anti-miR-216a-5p 组细胞克隆形成能力、迁移及侵袭能力均增强,t值分别为10.447、20.211和18.429,均P＜0.001.结论 circCLK3敲除通过上调miR-216a-5p表达而抑制乳腺癌细胞生长、迁移及侵袭.

目的 研究川崎病(KD)患儿外周血长链非编码RNA(LncRNA)SNHG5、微小RNA(miR)-132的差异表达及临床意义.方法 选择2016年1月至2020年12月在苏州市中西医结合医院儿科确诊的62例KD患儿作为KD组,另选取同期进行健康体检的80例健康儿童作为对照组.采用荧光定量聚合酶链式反应检测两组受试者外周血LncRNA LINC00999、miR-6780、LncRNA PSORS1C3、miR-216a、LncRNA SNHG5、miR-132、miR-92的表达水平,采用超声心动图评估KD患儿的冠状动脉病变(CAL)情况并分为CAL组和无CAL(NCAL)组;采用Pearson检验分析LncRNA SNHG5与miR-132的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析ln-cRNA SNHG5及miR-132对KD及KD合并CAL的诊断价值.结果 KD组外周血中LncRNA SNHG5的表达水平高于对照组,miR-132的表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).LncRNA LINC00999、miR-6780、LncRNA PSORS1C3、miR-216a、miR-92表达水平与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);KD组外周血中LncRNA SNHG5与miR-132的表达水平呈负相关(r=-0.527,P<0.001);KD组中CAL组患儿外周血中LncRNA SNHG5的表达水平高于NCAL组,miR-132的表达水平低于NCAL组,差异有统计学意义(P<0.05).经ROC曲线分析,LncRNA SNHG5及miR-132的表达水平对KD(截断值分别为1.205、0.871,灵敏度分别为86.25%、75.00%,特异度分别为88.71%、85.48%)及KD合并CAL(截断值分别为1.138、0.643,灵敏度分别为63.46%、67.31%,特异度分别为80.00%、80.00%)均具有诊断价值.结论 KD患儿外周血中LncRNA SNHG5表达增加、miR-132表达降低,两者可作为诊断KD及KD合并CAL的标志物.