目的 观察加味独活寄生合剂联合体外冲击波对寒湿痹阳型腰椎间盘突出症的临床疗效,及对NF-κB信号通路的影响.方法 将湖南中医药大学第一附属医院68例寒湿痹阻型腰椎间盘突出症患者按入组顺序随机分为试验组与对照组,每组34例.对照组予体外冲击波治疗,试验组在体外冲击波的基础上给予加味独活寄生合剂治疗,两组均治疗2周.采用疼痛视觉模拟(visual analogue scale,VAS)评分、Oswestry功能量化指数(oswestry disability index,ODI)评分及日本骨科协会评分(Japanese orthopaedic association,JOA)评估两组患者的疗效;用ELISA检测治疗前后血清NF-κB信号通路指标(p50、p65)、白细胞介素-8(Interleukin-8,IL-8)、白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10)、肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-alpha,TNF-α)表达含量.结果 治疗后,两组患者NF-κB信号通路指标(p50、p65)、IL-8、TNF-α与治疗前比较均降低(P<0.01),IL-10 明显升高(P<0.01).治疗后,两组患者JOA评分、ODI评分与治疗前比较均显著改善(P<0.01);且试验组效果优于对照组(P<0.01).两组患者VAS评分差异无统计学意义(P>0.05).结论 加味独活寄生合剂联合体外冲击波治疗腰椎间盘突出症可能通过抑制NF-κB信号通路的激活从而影响下游炎症因子表达,减轻LDH患者异常炎症反应,改善腰椎功能.

目的 探讨加味独活寄生合剂对膝骨关节炎小鼠血清白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及滑膜炎症的影响,初步判定加味独活寄生合剂治疗膝骨关节炎的最佳剂量.方法 将36只C57/BL6j小鼠随机分为空白组、模型组、西药对照组及中药低、中、高剂量组,除空白组外均通过膝关节注射木瓜蛋白酶溶液建立膝骨关节炎模型,空白组、模型组予生理盐水灌胃,西药对照组予双醋瑞因胶囊溶液灌胃,中药低、中、高剂量组分别按照6.28、12.56、25.12g/kg剂量灌胃加味独活寄生合剂.连续灌胃8周后,各组小鼠进行改良Lequesen MG量表评分,ELISA测定各组小鼠血清中IL-6、IL-1 β、TNF-α含量;HE染色及Masson染色观察膝关节滑膜组织结构形态及纤维组织增生情况.结果 与空白组相比,模型组改良Lequesen MG量表评分显著升高(P＜0.01),血清炎症因子含量明显升高(P＜0.01),HE染色可见滑膜组织丰富的血管增生及大量炎性细胞浸润等滑膜炎症表现,Masson染色可见大量胶原纤维增生;西药对照组、中药低剂量组改良Lequesen MG量表评分较模型组显著降低(P＜0.01),血清炎症因子含量均明显降低(P＜0.01),HE染色见滑膜炎症改善,Masson染色见胶原纤维增生减轻;中药中、高剂量组较西药对照组和中药低剂量组改良Leque-sen MG量表评分显著降低(P＜0.01),血清炎症因子含量明显降低(P＜0.01);HE染色示滑膜炎症明显好转,Masson染色见胶原纤维增生明显减轻.结论 加味独活寄生合剂可降低膝骨关节炎小鼠血清IL-6、IL-1β、TNF-α含量,改善膝关节滑膜炎症;12.56 g/kg剂量的加味独活寄生合剂对膝骨关节炎小鼠病情改善最明显.

目的 通过网络药理学预测加味独活寄生合剂治疗腰椎间盘突出症(lumbar disc herniation,LDH)的相关机制,并通过体外实验验证.方法 应用TCMSP、BATMAN-TCM数据库检索加味独活寄生合剂组成药物的活性成分以及潜在靶点.通过GeneCards、OMIM数据库搜集LDH相关的疾病靶点,构建"药物-化合物-疾病靶标"网络模型,获取加味独活寄生合剂干预LDH的交集靶标.运用STRING数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络获取核心靶点.使用R语言软件及Perl语言进行GO分析与KEGG通路分析获得可能的关键通路.提取原代终板软骨细胞,进行细胞形态学观察以及Ⅱ型胶原蛋白(CollagenⅡ)免疫荧光染色鉴定.将体外培养的第3代终板软骨细胞随机分成5组:空白对照组、模型对照组、加味独活寄生合剂低剂量组、加味独活寄生合剂中剂量组、加味独活寄生合剂高剂量组.其中后 4组使用添加含有 10 ng/mL的白细胞介素 17(interleukin-17,IL-17)的DMEM培养基对细胞进行诱导退变造模.流式细胞技术检测各组细胞周期;ELISA检测各组细胞IL-6的含量;实时荧光定量PCR检测p-p65、MMP9 mRNA的表达;Western blot法检测p-p65、MMP9 蛋白表达情况.结果 网络药理学结果显示,根据ADME标准共筛选加味独活寄生汤 19 种药物共计 295种活性成分,与LDH的疾病靶标相匹配得到交集靶标 50个.通过PPI提取得到IL-6 成为核心靶标可能性最大,GO分析和KEGG通路分析得到IL-17相关信号途径的富集因子较高.体外实验结果:相比于空白对照组,其他各组细胞生长情况明显受到抑制(P＜0.05);相比于模型对照组,加味独活寄生合剂各组生长情况明显受到促进(P＜0.05).相比于空白对照组,模型对照组及加味独活寄生合剂各组IL-6、p-p65、MMP9 表达显著升高(P＜0.05);相比于模型对照组,加味独活寄生合剂各组IL-6、p-p65、MMP9 表达显著降低(P＜0.05).结论 加味独活寄生合剂通过多靶点、多通路抑制炎症反应和细胞凋亡,可能通过调控IL-17/NF-κB,促进终板软骨细胞的增殖,抑制IL-6以及MMP9 的表达,从而发挥对LDH的治疗作用.

目的 探讨加味独活寄生合剂促进膝骨关节炎(KOA)软骨细胞增殖的临床疗效及其作用机制.方法 采用随机数字表法将60例患者随机分为治疗组和对照组各30例.治疗组予加味独活寄生合剂,每次62.5 mL,每日2次,口服;硫酸氨基葡萄糖胶囊,每次1粒,每日3次,口服.对照组予双醋瑞因胶囊,每次1粒,每日2次,口服;硫酸氨基葡萄糖胶囊,用法用量同治疗组.嘱患者行股四头肌舒缩功能锻炼,注意保暖.连续治疗6周.观察2组治疗前后视觉模拟评分法(VAS)评分、西安大略和麦克马斯特大学骨关节炎指数(WOMAC),检测患膝关节液白细胞介素-1(IL-1)、一氧化氮(NO)、Wnt5a、β-连环蛋白(β-catenin)、Sox9、胶原蛋白Ⅱ(CollagenⅡ)含量,监测不良反应.结果 与本组治疗前比较,2组治疗后 IL-1、NO、Wnt5a、β-catenin含量明显降低(P<0.05),Sox9、CollagenⅡ含量明显升高(P<0.05),VAS评分、WOMAC明显降低(P<0.05),以上指标2组治疗后比较差异无统计学意义(P>0.05).2组均未见明显不良反应.结论 加味独活寄生合剂可降低关节液中炎症因子水平,抑制Wnt信号通路,通过调节通路中Sox9、CollagenⅡ表达促进KOA软骨细胞的增殖分化,有效缓解疼痛并改善关节功能.

目的:观察加味独活寄生合剂对膝关节骨性关节炎(膝骨关节炎)关节液中白细胞介素-1(IL-1)、NO、Sox9及胶原蛋白(CollagenⅡ)的影响,探讨加味独活寄生合剂对膝骨关节炎关节软骨的保护机制.方法:选择湖南中医药大学第一附属医院骨伤科门诊的膝骨关节炎患者60例,按照随机数字表法,随机对照分为两组,加味独活寄生合剂组(治疗组)和独活寄生合剂组(对照组),两组患者口服药物均为每次62.5mL,每天2次,治疗时间为6周,观察两组患者用药前后视觉模拟疼痛评分(VAS)和西安大略和麦玛斯特大学骨关节炎指数(WOMAC)的改变,同时抽取治疗前后关节液,采用ELISA法检测IL-1、NO、Sox9及CollagenⅡ并进行本组治疗前后和两组间对比.结果:治疗后两组患者VAS评分和WOMAC评分均明显降低(P＜0.05),且加味独活寄生合剂组临床效果改善更佳(P＜0.05);治疗后两组关节液中IL-1、NO含量明显降低(P＜0.05),Sox9及CollagenⅡ含量明显升高(P＜0.05),且两组组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:加味独活寄生合剂能够有效的缓解膝骨关节炎患者的临床症状,同时能够降低炎性因子IL-1、NO,增加Sox9、CollagenⅡ蛋白的含量,促进关节软骨的增殖修复,这也许是加味独活寄生合剂治疗膝骨关节炎的分子机制.

目的 观察加味独活寄生合剂含药血清对兔退变软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响.方法 将体外培养的兔关节软骨细胞按随机数表分为6组:空白对照组,模型组,加味独活寄生合剂含药血清低、中、高剂量组及Wnt信号通路阻断剂组,后五组予白介素-1β诱导为退变软骨模型,然后予不同剂量的含药血清及sFRP-3干预.采用流式细胞仪检测细胞生长及周期情况,实时荧光定量PCR检测Wnt/β-catenin mRNA的表达.结果 流式细胞仪检测结果显示,与空白对照组比较,模型组及加味独活寄生合剂含药血清低、中、高剂量组细胞生长情况明显减慢.实时荧光定量PCR检测结果显示,与模型组相比,加味独活寄生合剂含药血清低、中、高剂量组β-catenin mRNA均有降低.结论 加味独活寄生合剂含药血清对白介素-1β诱导为退变软骨模型有一定的保护作用,其作用机制可能与调控Wnt信号通路有关.

目的:观察加味独活寄生合剂联合股四头肌功能锻炼治疗膝骨关节炎的临床疗效.方法:将72例膝骨关节炎患者随机分为治疗组和对照组,每组36例,治疗组患者予加味独活寄生合剂口服联合股四头肌功能锻炼,对照组患者予双醋瑞因胶囊口服联合股四头肌功能锻炼.治疗6周后观察两组患者疼痛评分、功能评分,测量直腿抬高状态下大腿周径;治疗前后均行关节穿刺取关节液,检测关节液中IL-1、NO含量.结果:两组患者治疗后视觉模拟评分(VAS)均明显降低(P＜0.05);治疗后两组患者VAS评分比较,治疗组低于对照组(P＜0.05);治疗组患者治疗后膝关节功能Western Ontario and McMaster Univesrsities(WOMAC)评分低于对照组(P＜0.05).两组患者治疗后大腿周径均增加,治疗组患者治疗后大腿周径大于对照组(P＜0.05).与治疗前比较,治疗后两组患者关节液IL-1、NO含量均明显降低(P＜0.05);两组患者治疗后关节液IL-1、NO含量比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:加味独活寄生合剂联合股四头肌功能锻炼治疗膝骨关节炎,可抑制炎症反应,减轻关节疼痛,增加膝关节肌力,改善膝关节功能.

目的 采用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)的代谢组学方法,探讨加味独活寄生合剂对膝骨关节炎(KOA)肝肾亏虚证的疗效机制.方法 选择25名KOA肝肾亏虚证患者,予加味独活寄生合剂,62.5 mL/次,2次/d,口服,7 d为1个疗程,共4个疗程.采用GC-MS检测患者治疗前后血清,并进行多元统计分析.结果 患者治疗后血清中乳酸、丙氨酸、甘油、琥珀酸、葡萄糖、花生四烯酸含量明显降低,氨基丙二酸、苏氨酸、脯氨酸、肌醇含量明显上升(P<0.05);寻找到三羧酸循环、甘油酯代谢、花生四烯酸代谢、淀粉和蔗糖代谢、磷酸肌醇代谢等主要代谢通路对代谢物的回调发挥了重要作用.结论 加味独活寄生合剂可能通过调控机体能量代谢、氨基酸代谢、脂质代谢等途径缓解KOA肝肾亏虚证患者关节肿痛,实现治疗效果.

目的:通过超高效液相色谱-四级杆-时间飞行质谱仪(UPLC-Q-TOF)分析加味独活寄生合剂及含药血清,筛选出其主要物质成分及入血清成分.方法:采用Agilent Extend C18(2.1 mm×50mm,1.8 μm)色谱柱,流动相:乙腈-水(水中含0.1％甲酸,质谱级)按规定条件进行梯度洗脱,流速:0.4 mL/min,进样量:2μL,质谱检测条件:离子化方式为电喷雾离子化(ESI),准确质量数用ESI-L Low Concentration Tuning Mix(G1969-85000)校正,正离子分析模式,通过比较样品峰、保留时间等质谱信息,并结合提取离子流图及与对照品、相关文献数据对比进行化学成分确认.结果:(1)加味独活寄生合剂UPLC-Q-TOF分析确认了47个共有峰,通过分析比对主要包括亚麻酸甲酯、腺苷、邻苯二甲酸二异丁酯、金合欢基丙酮、十二酸甘油酯等47个化合物,主要来源为加味独活寄生合剂处方中的独活、桑寄生、杜仲、秦艽等,当前的条件分析尚未检测到细辛的药物成分.(2)加味独活寄生合剂含药血清UPLC-Q-TOF分析指认33个共有峰,通过分析比对主要包括邻苯二甲酸二异丁酯、金合欢基丙酮、十二酸甘油酯、邻苯二甲酸丁辛酯、桃叶珊瑚苷等33个化合物,主要来源为加味独活寄生合剂处方中的独活、桑寄生、杜仲、制天南星、黄芩、木瓜、威灵仙等.当前的条件分析加味独活寄生合剂含药血清中尚未检测到细辛、肉桂、秦艽、当归4味药物成分.结论:UPLC-Q-TOF指认了加味独活寄生合剂47个共有峰,含药血清33个共有峰,从整体上系统地反映加味独活寄生合剂的物质化学信息,初步确认了33个入血化学成分,以提示加味独活寄生合剂的药效物质基础,为药效实验提供了参考和依据.

目的 本实验拟通过16S rRNA测序研究加味独活寄生合剂调控肠道菌群治疗膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)的潜在机制.方法 8周龄雄性C57小鼠随机分为3组:假手术组、KOA模型组、KOA模型+加味独活寄生合剂组(给药组),6只/组.手术诱导建立KOA模型,给药组以16.25 mL·kg-1灌胃/天,另两组给予生理盐水,8周后取小鼠膝关节和结肠,制备成石蜡切片后行番红O-固绿、免疫组化染色观察软骨变化,16S rRNA测序观察菌群变化.结果 番红O-固绿染色发现,与模型组比较,给药组明显增加了软骨面积、降低了OARSI评分;16S rRNA结果表明,加味独活寄生合剂能调控KOA小鼠肠道菌群丰富度,改善Alpha多样性(Chao1、Simpson)和Beta多样性(PCoA、NMDS).LefSe分析显示,3组间均存在丰度差异明显的物种,包括厚壁菌门、梭杆菌门、变形菌门等.MetaCyc分析发现,加味独活寄生合剂对脂肪酸、糖和氨基酸等代谢途径均有影响(P<0.05).结论 加味独活寄生合剂能够有效保护关节软骨,延缓KOA病程进展,其机制可能是通过调节肠道菌群结构、保护肠道屏障、减轻炎症反应而实现.