探讨医院未处理污水中碳青霉烯类耐药菌的流行情况、基因组特征及临床相关性，为院内评估公共卫生情况、预防交叉感染提供参考依据。收集2023年3月苏州大学附属第二医院污水处理站内未处理污水和26个病区洗手池U型排污管内污水，离心稀释后涂布于含有美罗培南（2 μg/ml）的LB固体平板分离耐药细菌，进行菌种鉴定、药敏分析、碳青霉烯酶基因PCR检测和全基因组测序；对基因组序列进行耐药基因识别，并采用回顾性研究方法，结合多位点序列分型（multilocus sequence typing，MLST）和单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）分析，比较其与同季度临床分离株的同源性。结果显示，从医院污水中分离出56株耐碳青霉烯类革兰阴性菌，来源于13个属，其中17株分离自医院总污水，气单胞菌属为最优势属（35.3%，6/17）；39株分离自17个病区的污水，假单胞菌属为最优势属（30.8%，12/39）。本院常见污水分离株均为多重耐药细菌，对部分二、三代头孢菌素类药物耐药率可达100%。来源于污水分离株的碳青霉烯酶基因共8种，包括 blaKPC、 blaNDM、 blaIMP、 blaVIM、 blaIND、 blaOXA-58-like、 blaOXA-48-like和 blaOXA-427-like。共39株污水分离株携带碳青霉烯酶基因，医院总污水中携带 blaKPC-2细菌的分离率（35.3%，6/17）最高，病区污水中携带 blaIMP-8细菌的分离率（31.8%，7/22）最高。14株污水分离株同时携带两种碳青霉烯酶基因，共6种组合型。本院还发现了 blaIMP-101新亚型。筛选4株污水分离株和11株临床分离株纳入SNP分析，其中临床和污水来源的2株ST11型肺炎克雷伯菌仅有15个SNP差异，具有高度同源性。综上，医院未处理污水中存在多种多重耐药的条件致病菌，具有在环境中散播耐药基因的潜在风险；医院污水和临床分离的高度同源肺炎克雷伯菌表明医院污水与临床感染的紧密联系。医院需加强对污水环境中耐药细菌和耐药基因的监测，防止医院污水中耐药细菌和耐药基因的广泛传播，预防污水中耐药细菌引起的院内感染。

本技术指南从消毒工艺、消毒效果评价和排放要求三个方面进一步提升了医疗机构污水和污物消毒的技术要求，适用于新冠肺炎疫情期间综合性医院、病例定点医院、医学观察区污水和污物的卫生管理。

目的:分离可裂解烧伤患者泛耐药肺炎克雷伯菌的噬菌体，研究其生物学特性、基因组信息及对细菌生物膜的作用。方法:(1)2018年，取分离自上海交通大学医学院附属瑞金医院(下称瑞金医院)烧伤患者血液的泛耐药肺炎克雷伯菌UA168(下称宿主菌)液，采用污水共培养法及滴板法和双层琼脂平板法，从瑞金医院污水中分离纯化得到烧伤患者泛耐药肺炎克雷伯菌噬菌体，将其命名为噬菌体KP168，观察其噬菌斑形态。(2)取噬菌体KP168液行氯化铯密度梯度离心和透析后，采用磷钨酸负染法通过透射电子显微镜观察噬菌体KP168形态。(3)取噬菌体KP168液，采用滴板法检测其对从瑞金医院烧伤患者血液中分离得到的20株泛耐药肺炎克雷伯菌的裂解能力，计算裂解率。(4)分别以感染复数为10.000、1.000、0.100、0.010和0.001共同常规振荡培养初始效价为9.3×10 11噬菌斑形成单位(PFU)/mL噬菌体KP168液(每管400 μL)和浓度为1×10 9集落形成单位(CFU)/mL宿主菌液(每管4 mL)4 h(每种感染复数1管)，采用双层琼脂平板法测算噬菌体KP168效价(测算方法下同)以筛选最佳感染复数，实验重复3次。(5)以感染复数为0.005混合浓度为1×10 9 CFU/mL宿主菌液(每管4 mL)和效价调整为5×10 7 PFU/mL噬菌体KP168液(每管400 μL)，分别于混合后0(即刻)、1、2、3、4、5、15、30 min(每个时间点1管)采用双层琼脂平板法计数噬菌斑(计数方法下同)，计算已吸附噬菌体百分比以筛选最佳吸附时间，实验重复3次。(6)以感染复数为0.005混合浓度为1×10 9 CFU/mL宿主菌液(每管300 μL)和效价调整为5×10 8 PFU/mL噬菌体KP168液(每管60 μL)，静置最佳吸附时间后常规振荡培养，分别于培养0(即刻)、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100 min测算噬菌体KP168效价，绘制一步生长曲线，实验重复3次。(7)取效价为2.5×10 10 PFU/mL噬菌体KP168液，分别于37、40、50、60、70 ℃静置培养1 h(每个时间点3管，每管1 mL)，计数噬菌斑并绘制热稳定曲线。取效价为3.0×10 10 PFU/mL噬菌体KP168液，分别加入pH值为5.0、6.0、7.0、7.4、8.0、9.0、10.0的SM缓冲液于37 ℃静置培养1 h(每种pH值3管，每管含100 μL噬菌体KP168液、900 μL SM缓冲液)，计数噬菌斑并绘制酸碱稳定曲线。(8)取噬菌体KP168液同实验(2)透析后行DNA抽提与测序，用Prokka对全基因组进行注释以获得噬菌体KP168编码序列，使用Nucleotide BLAST功能进行核酸序列比对以寻找与噬菌体KP168核酸序列相似度最高的已知噬菌体，使用Blastx功能将编码序列翻译成蛋白质后进行功能预测，比对抗性基因数据库和毒力因子数据库。(9)于96孔板中，分别以感染复数为1.000、0.100、0.010和0.001，在浓度为1.5×10 8 CFU/mL(浓度下同)的200 μL宿主菌液中加入初始效价为5.8×10 10 PFU/mL噬菌体KP168液20 μL(每种感染复数3孔)共同培养48 h；将200 μL宿主菌液静置培养48 h后，分别加入效价为1×10 6、1×10 7、1×10 8、1×10 9、1×10 10 PFU/mL的噬菌体KP168液20 μL(每种效价3孔)静置作用4 h。2种实验均以200 μL宿主菌液中加入SM缓冲液20 μL(3孔)为阴性对照，以220 μL LB培养液(3孔)为空白对照，均采用酶标仪测定吸光度值并分别计算生物膜抑制率和生物膜破坏率，实验均重复3次。 结果:(1)成功分离纯化噬菌体KP168，其噬菌斑透亮，呈圆形，直径约1.5 mm。(2)噬菌体KP168呈正多面体结构，直径约为50 nm，无尾部结构。(3)噬菌体KP168可裂解20株烧伤患者泛耐药肺炎克雷伯菌中的13株，裂解率为65.0%。(4)感染复数为1.000时，噬菌体KP168与宿主菌共同培养4 h后，效价最高，以此为最佳感染复数。(5)噬菌体KP168与宿主菌混合后4 min，已吸附噬菌体百分比最高，以此为最佳吸附时间。(6)一步生长曲线表明噬菌体KP168裂解宿主菌时，潜伏期约10 min，裂解期约40 min。(7)噬菌体KP168在40 ℃、pH值为7.4时，噬菌斑数最多，活性最大。(8)噬菌体KP168基因组是线状双链DNA，长度为40 114 bp；有48个可能编码序列；与Klebsiella phage_vB_Kp1相似度最高；编码序列翻译蛋白对应的已知最相似蛋白中包含23个假设蛋白和25个已知功能蛋白；未见抗性基因和毒力因子基因；获得GeneBank登录号MN585130。(9)以各感染复数共同培养噬菌体KP168与宿主菌48 h后，生物膜抑制率相近，平均约为45%；效价为1×10 9 PFU/mL噬菌体KP168作用于宿主菌已形成的生物膜4 h后，生物膜破坏率最高，达平均42%。 结论:本研究自污水中分离得到1株烧伤患者泛耐药肺炎克雷伯菌噬菌体——噬菌体KP168，该株噬菌体属于无尾科噬菌体，宿主谱宽、吸附时间短、潜伏期短，具有一定的热和酸碱稳定性；其基因组信息明确，不含抗性基因及毒力因子基因；对细菌生物膜的形成有抑制作用，对已形成的细菌生物膜有破坏作用。

噬菌体疗法是治疗多重耐药菌感染的重要手段之一。这类噬菌体通常从医院污水中分离得到，然而迄今为止对医院污水中噬菌体的分布情况尚无系统研究。本研究旨在以临床分离的常见病原菌为宿主，分离其对应的噬菌体，以此评估医院污水中噬菌体的生态分布情况，并为临床耐药菌噬菌体的分离和应用提供参考。本研究采用横断面研究设计，选择2023年5—6月山东大学齐鲁医院临床微生物实验室分离得到的125株病原菌（分属于16个不同的菌种）作为目标菌株，利用双层平板夹心法从医院污水中分离纯化这些菌株对应的噬菌体。同时，借助宏基因组二代测序技术（mNGS）分析同批次污水中病原菌的分布情况，初步探究污水中病原菌与噬菌体之间的丰度对应关系。结果显示，以125株临床病原菌为宿主，共分离获得56株噬菌体，分别对应鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌等6种病原菌。这6种病原菌均包含了不同耐药程度的菌株，其中鲍曼不动杆菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌中多重耐药菌株占比较高。这6种病原菌的噬菌体获得率由高到低依次为：大肠埃希菌（80%）、嗜麦芽窄食单胞菌（75%）、铜绿假单胞菌（70%）、肺炎克雷伯菌（66.67%）、鲍曼不动杆菌（36.36%）和金黄色葡萄球菌（12.5%）。初步的mNGS测序结果显示，在该批次污水中，丰度较高的病原菌分别为屎肠球菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、粪肠球菌、鲍曼不动杆菌、产气克雷伯菌、密歇根克雷伯菌和铜绿假单胞菌。综上，医院污水中可分离到大多数临床常见革兰阴性病原菌的噬菌体，且分离率较高；然而革兰阳性病原菌的噬菌体分离率较低，在本研究中仅分离到与金黄色葡萄球菌对应的噬菌体。对应的mNGS测序结果表明革兰阴性病原菌在污水中的分布与噬菌体的生态分布可能具有一定的正相关关系。

目的:建立和评价基于三氯化铁-聚偏氟乙烯（FeCl 3-PVDF）膜滤器富集自然水体中噬菌体的方法。 方法:基于絮凝浓缩原理，利用铁离子絮凝结合膜过滤器建立从水样中回收噬菌体的方法。利用琼脂双层法测定噬菌体滴度、噬菌体荧光染色观察和实时荧光PCR反应等方法检测噬菌体的回收效率。采集不同来源的水体标本进行模拟实验评价富集效果，同时以医院排出污水作为实际水样，利用临床常见的耐药菌作为宿主指示菌，进一步分析FeCl 3-PVDF膜滤器富集方法对自然实际水样中噬菌体的富集效果。 结果:建立了铁离子浓度50 mg/L，采用PVDF膜滤器富集自然水体中噬菌体的方法。该方法对噬菌体的回收率为93%~100%；在多功能显微镜下观察发现富集后水样的噬菌体明显增多，酶标仪测定富集后水样荧光值约为富集前的13倍；对医院外排水实际水样浓缩处理后，浓缩组和未浓缩组噬菌体的分离阳性率分别为23%和4%，浓缩组荧光值为未浓缩组的2~24倍。结论:FeCl 3-PVDF膜滤器方法可简便、高效快速地富集不同水体样本中噬菌体。

目的:分离提纯1株新型耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的噬菌体，并对其基因组学信息和生物学特性进行分析。方法:采用实验研究方法。取分离自陆军军医大学（第三军医大学）第二附属医院收治的1例胸骨正中切口感染的63岁女性患者创面的MRSA（下称宿主菌）液，采用污水共培养法和双层琼脂平板法从该院污水中分离提纯得到噬菌体，并命名为噬菌体SAP23，观察噬菌斑形态。采用磷钨酸负染法将噬菌体SAP23染色，采用透射电子显微镜观察其形态。采用十二烷基磺酸钠/蛋白酶裂解方案制备噬菌体SAP23 DNA，在Illumina NovaSeq PE150平台下进行全基因组测序，并完成序列组装、注释、系统发生树等基因组学分析。将噬菌体SAP23液分别按10.000 0、1.000 0、0.100 0、0.010 0、0.001 0、0.000 1感染复数与宿主菌液共培养4 h后，采用点滴法测定噬菌体效价，筛选最佳感染复数，此处及以下样本数均为3。按测得的最佳感染复数取噬菌体SAP23液与宿主菌液分别共同孵育5、10、15 min后，同前测定噬菌体效价，筛选最佳吸附时间。按测得的最佳感染复数取噬菌体SAP23液与宿主菌液按最佳吸附时间孵育后，分别于培养0（即刻）、5、10、15、20、30、40、50、60、80、100、120 min，同前测定噬菌体效价，绘制一步生长曲线。取噬菌体SAP23液分别在温度为4、37、50、60、70、80 ℃下，在pH值为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12下孵育1 h，测定稳定性。取陆军军医大学（第三军医大学）微生物教研室储存的41株MRSA，完成噬菌体SAP23的宿主谱范围检测。结果:噬菌体SAP23能在宿主菌双层琼脂板上形成透明噬菌斑。噬菌体SAP23头部是直径为（88±4）nm的多面体，其尾部长度为（279±21）nm、宽度为（22.6±2.6）nm。噬菌体SAP23基因组为全长151 618 bp的线状双链DNA，序列两端有11 681 bp的长末端重复序列，预测出220个开放阅读框，噬菌体可编码4个转运RNA，未预测出毒力因子或抗性基因，注释功能的噬菌体SAP23基因可分为5个组，GenBank登录号为MZ427930，噬菌体SAP23全基因组序列与共线性分析中的6个葡萄球菌噬菌体全基因组序列有5个局部共线区域，但在局部共线区域内部或外部存在差异。噬菌体SAP23属于 Herelleviridae科 Twortvirinae亚科 Kayvirus病毒属。噬菌体SAP23的最佳感染复数为0.010 0，最佳吸附时间为10 min，潜伏期约为20 min，裂解期约为80 min；在4~37 ℃温度条件及pH值为4~9的条件中，稳定性较好。噬菌体SAP23可裂解41株MRSA中的3株。 结论:噬菌体SAP23为 Herelleviridae科 Twortvirinae亚科 Kayvirus病毒属成员，潜伏期短，其对温度和酸碱耐受性好，可有效裂解MRSA，为不含毒力因子和抗性基因的新型烈性窄谱噬菌体。

目的:分离1株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)噬菌体，评估生物学特性和抗菌性能，并用于小鼠创面MRSA感染治疗。方法:苏北人民医院污水站收集污水，共培养法和双层琼脂平板法从该污水中分离MRSA噬菌体SBSS-1，观察噬菌斑形态、大小。透射电子显微镜(TEM)观察其微观形貌，并测量大小。测定其最佳感染复数(MOI)、一步生长曲线、不同pH、不同温度增殖活性。细菌活死染色、扫描电子显微镜(SEM)观察其抗菌性能。将噬菌体SBSS-1治疗创面MRSA感染小鼠，马松染色评价胶原水平，酶联免疫试剂盒检测炎性因子，免疫荧光检测血管、肉芽组织形成标志物，Image J 6.0软件分析荧光强度。两组间比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:成功分离噬菌体SBSS-1，可形成大小为2.7~4.2 mm的透明噬菌斑。头部为正二十面体，直径(73±5) nm，连接长(201±17) nm、宽(18±5) nm的非可收缩性尾巴。属于有尾噬菌体目(Caudovirales)，长尾噬菌体科(Siphoviridae)。最佳MOI为0.1，潜伏期为20 min，裂解期为40 min，平均裂解量72 PFU/Cell；在4 ℃~50 ℃、pH 3~11，活性稳定。其可破坏MRSA膜结构，使大部分细菌呈红色荧光，并使MRSA皱缩，损伤。噬菌体SBSS-1组创面直径显著低于对照组[(0.16±0.04) cm比(0.55±0.03) cm， t＝22.06， P<0.05]；噬菌体SBSS-1组胶原沉积较对照组增多；噬菌体SBSS-1组创面创面肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1β、白细胞介素-6表达水平显著低于对照组[(100.30±9.87) pg/ml比(310.00±26.46) pg/ml， t＝7.425， P<0.05；(33.33±4.67) pg/ml比(126.00±7.94) pg/ml， t＝10.060， P<0.05；(197.00±10.44) pg/ml比(711.00±45.45) pg/ml， t＝11.020， P<0.05]；噬菌体SBSS-1组小鼠创面白细胞介素-10表达水平显著高于对照组[(130.30±10.59) pg/ml比(27.33±7.54) pg/ml， t＝7.926， P<0.05]；噬菌体SBSS-1组创面细胞增殖标志物细胞核增殖抗原(Ki-67)抗原荧光强度显著高于对照组(222.70±16.76比62.67±4.70， t＝9.193， P<0.05)；噬菌体SBSS-1组创面血小板内皮细胞黏附分子荧光强度显著高于对照组(200.70±10.81比43.00±2.31， t＝14.270， P<0.05)。 结论:成功分离MRSA噬菌体SBSS-1，抗菌效果显著，能够促进MRSA感染创面愈合。

目的 了解桐乡市2019-2022年县镇两级医院消毒质量状况,为进一步加强医院消毒和感染控制提供依据.方法 抽取该市10家县镇级医院,按照GB 15982-2012《医院消毒卫生标准》实施现场采样,检测并分析两级医院不同监测项目的消毒质量.结果 2019-2022年共采集样品664份,总合格率为93.98％,各年份合格率依次为91.91％、99.26％、95.38％和91.63％,差异有统计学意义(x2=10.682,P＜0.05).县级医院消毒质量合格率高于镇级医院(97.60％vs 91.13％;x2=12.110,P＜0.05).监测项目中,使用中消毒液和灭菌器灭菌效果合格率最高,均为100.00％;其次为医护人员手卫生、室内空气、医院污水和物体表面消毒效果,合格率均＞97.00％;合格率最低为诊疗用水,仅为80.00％.镇级医院无菌物品和诊疗用水合格率均＜73.00％,明显低于县级医院(x2=4.438和5.198,P＜0.05).结论 桐乡市县镇两级医院消毒质量合格率整体较高,但仍存在薄弱环节,县级医院仍需提高无菌物品和诊疗用水消毒管理水平.

目的 了解2019-2021年甘肃省某综合三甲医院环境消毒灭菌工作质量,了解消毒后微生物分布情况及医院感染主要病原菌耐药情况,发现消毒灭菌工作中存在的问题和隐患,有效预防和控制感染性疾病的暴发和流行,为医院感染防控措施的制定提供科学依据.方法 根据《消毒技术规范》和《医院消毒卫生标准》对医院空气、物表、医务人员手、内镜、口腔用水、压力蒸汽灭菌器以及医疗污水采样,判定是否符合卫生学标准,并对分离出的病原菌采用微量肉汤稀释法进行药敏试验.结果 2019-2021年共采样1 054份,合格843份,合格率为79.98％.其中,空气合格率为88.15％,物表合格率为85.34％,外科手合格率为56.16％,卫生手合格率为79.64％,医疗用水(口腔用水)合格率为33.33％,医疗用水(其他用水)合格率为85.42％,内镜合格率为86.42％,压力蒸汽灭菌器合格率为100.00％,污水合格率为83.33％.消毒后环境微生物分布占比居前5位的分别为人葡萄球菌(13.60％)、表皮葡萄球菌(13.05％)、藤黄微球菌(7.68％)、沃氏葡萄球菌(6.03％)和科氏葡萄球菌(5.81％).检出医院感染主要病原菌鲍曼不动杆菌5株(0.55％)、金黄色葡萄球菌5株(0.55％)、粪肠球菌3株(0.33％)、铜绿假单胞菌2株(0.22％)、大肠埃希菌1株(0.11％)和肺炎克雷伯菌肺炎亚种1株(0.11％).病原菌鉴定结果以革兰阳性菌为主,主要医院感染病原菌检出于手术室、重症监护室等重点科室,且呈现多重耐药现象.结论 该三甲医院总体上消毒质量略低,且消毒效果不稳定,检出常见医院感染病原菌,且耐药情况不容乐观,需加强医院消毒监督管理,制定防治措施,并提高消毒效果.

目的 了解广州市医疗机构的消毒质量状况,以加强医院消毒管理.方法 通过现场采样和检测方法,对该市各级医疗机构重点部门消毒质量进行监测与分析.结果 连续10年共监测不同级别医疗机构的不同对象样品92947件,消毒质量总合格率 93.22%.在10项监测项目中,医务人员手、紫外线灯、污水和医疗用水的合格率较低.不同年份消毒质量合格率差异具有统计学意义(χ2=361.88,P<0.001),其中2019年最高(96.53%),2014年最低(91.12%).不同监测项目的消毒质量合格率差异有统计学意义(χ2=4385.29,P<0.001),其中污水的合格率最低(76.04%).不同级别医疗机构消毒质量合格率差异有统计学意义(χ2=436.82,P<0.001),市、区、县三级医疗机构消毒质量合格率分别为94.59%、95.29%和93.35%;诊所及卫生院的合格率90.90%.结论 广州市医疗机构消毒质量总合格率超过90%,但存在薄弱环节,应加强医疗机构全面管理,以提高整体消毒管理水平.