目的:制备重组流感病毒血凝素(hemagglutinin, HA)三聚体蛋白疫苗并进行相关表征分析，研究重组HA三聚体在小鼠模型中的免疫原性。方法:构建稳定表达HA三聚体蛋白的CHO细胞株，通过Western blot、单向免疫扩散试验、蛋白质粒径检测和N-糖基化位点分析对重组蛋白进行定性及定量分析。根据剂量、佐剂等处理条件的不同将BALB/c小鼠分为11个组，并进行一致的免疫程序。初次免疫后56 d检测血清中和抗体效价，以评价免疫原性。结果:构建的CHO细胞株能够分泌表达HA三聚体。HA三聚体具备生物学活性能够在单向琼脂免疫扩散试验中形成沉淀环，蛋白质粒径大小约为18.79 nm，具有10个N-糖基化位点，包括高甘露糖型、复合糖型和杂合糖型；HA三聚体重组蛋白疫苗在2次免疫小鼠后，3.75 μg剂量配伍RFH01佐剂与对照组单价疫苗原液15 μg引起的中和抗体效价差异无统计学意义( P＝0.431 2， U＝36)，配伍佐剂组免疫后血清抗体效价均高于未加佐剂组，其中15 μg HA三聚体+RFH01组效价最高，为1 280。 结论:成功制备了流感病毒重组HA三聚体蛋白，其与RFH01佐剂配伍能够诱导BALB/c小鼠产生针对流感病毒的体液免疫应答，为流感病毒重组亚单位疫苗的研发提供了参考。

目的:分别用新型复合层析介质Capto Core700和传统分子筛介质Sepharose 4FF纯化MDCK细胞制备的H5N1型流感病毒浓缩液，并比较分离纯化效果。方法:用Capto Core700与Sepharose 4FF纯化灭活H5N1型流感病毒浓缩液，透射电镜分析不同样品中病毒颗粒的形态；分别用单向免疫扩散法(single radial immunodiffusion, SRID)、福林酚法(Lowry法)、双抗体夹心ELISA、qPCR检测不同层析介质纯化前后病毒血凝素含量、总蛋白质含量、宿主细胞蛋白质(host cell protein, HCP)含量和宿主细胞DNA(host cell DNA, HCD)含量，计算病毒抗原回收率和杂质去除率；用动物实验检测不同纯化病毒的免疫原性，并用 t检验分析两种层析介质纯化效果差异。 结果:Capto Core700与Sepharose 4FF纯化的H5N1型流感病毒在透射电镜下均呈典型的流感病毒形态；两种层析介质纯化后病毒血凝素回收率差异无统计学意义( P>0.05)，但前者的杂质(总蛋白质、HCP、HCD)去除率均高于后者，且差异有统计学意义( P<0.05)；动物实验表明两种层析介质纯化的病毒样品均具有良好的免疫原性。 结论:相对于Sepharose 4FF层析介质，Capto Core700在保证病毒抗原蛋白回收率的基础上可以更有效地去除HCP、HCD和总蛋白质等工艺相关杂质。本研究为MDCK细胞生产H5N1型流感病毒疫苗纯化工艺开发提供了参考。

目前,流感疫苗血凝素(hemagglutinin,HA)含量最常用的检测方法仍为单向免疫扩散法(single-radial immuno-diffusion,SRID),但该方法所需标准品制备耗时较长,通常需要2～3个月.在大流行流感发生初期无法获得标准参考品时,如何精确定量分析HA,一直是HA含量检测面临的难题.高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)具有快速、灵敏度高、重复性较好以及准确性高的特点,利用不同的分离原理可快速测定HA含量,在流感疫苗HA含量检测方面已得到很多应用.本文对HPLC在流感疫苗HA含量检测中应用的研究进展作一综述.

目的 探讨FOXP3在肝癌组织中的表达及其对抗肿瘤免疫应答的影响.方法 收集2014年9月至2016年9月间接受手术治疗的原发性肝癌患者86例作为观察组,健康人50例作为正常对照组.采用荧光定量PCR法检测观察组肝癌组织、癌旁组织中FOXP3 mRNA表达量;采用流式细胞仪检测观察组、正常对照组外周血中Th17/Treg细胞比率,采用酶联免疫吸附法测定Th1/Th2细胞因子含量,采用单向琼脂扩散法测定免疫球蛋白含量.采用Pearson检验评估肝癌组织FOXP3 mRNA表达量与抗肿瘤免疫的相关关系.结果 肝癌组织中FOXP3 mRNA表达量显著高于癌旁组织(P <0.05);观察组患者外周血中Th17细胞比率、Th17/Treg均显著低于正常对照组,Treg细胞比率高于正常对照组;外周血中Th1细胞因子干扰素γ(IFN-γ)、白介素-12p40(IL-12p40)的含量低于正常对照组,Th2细胞因子白介素4(IL-4)、白介素6(IL-6)的含量高于正常对照组;外周血中免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)的含量高于正常对照组(P <0.05).结论 FOXP3在肝癌组织中高表达,可直接影响患者的抗肿瘤免疫状态.

目的 探讨吉西他滨与顺铂方案对非小细胞肺癌(NSCLC)患者免疫球蛋白的影响.方法 选取2014年4月-2016年10月我院收治的150例晚期NSCLC患者(采用吉西他滨联合顺铂治疗)为治疗组;选择同期150例于我院体检者作为对照组.采用单向免疫扩散法检测两组免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM、IgD、IgE)及补体(C3、C4)的变化,分析两组NK细胞、Treg细胞及CD4+、CD8+调节性T细胞的分布特点,并对两组的相应指标进行比较.结果 治疗组化疗后,IgG、IgE、IgM逐渐下降,其中IgG下降最明显;补体C3、C4含量在前两个疗程呈现微弱上升,之后开始迅速下降;CD3、CD4、CD4/CD8、NK细胞比例显著下降,CD8、Treg细胞比例明显升高.结论 经吉西他滨与顺铂化疗后,NSCLC患者免疫功能被显著抑制,免疫球蛋白、NK细胞明显下降,T细胞亚群紊乱,机体的免疫功能受损.化疗期间应该监测患者的免疫功能变化,及时调整用药及预防感染的发生.

目的 探讨香菇多糖联合化疗治疗老年胃癌患者的临床疗效及对血清白细胞介素(IL)-2和IL-6水平和免疫功能的影响.方法 选择该院2015年3月至2016年5月收治的96例老年胃癌患者,根据随机数表法将患者分为对照组和研究组,每组各48例.对照组患者采用FOLFOX4化疗方案进行治疗,而研究组患者在对照组的基础上联合应用香菇多糖进行治疗.两组患者的疗程均为4 w.治疗结束后统计两组患者的临床总有效率,分别于治疗前后应用酶联免疫吸附测定法检测血清IL-2和IL-6水平,同时用流式细胞仪检测治疗前后外周血中 T淋巴细胞亚群变化情况,包括血细胞簇分化抗原(CD3+、CD4+、CD8+和 CD4+/CD8+)、自然杀伤(NK)细胞,并采用单向琼脂扩散法检测免疫球蛋白(IgA、IgG和IgM)水平.评价治疗前后两组患者的生活质量,并分析治疗期间两组患者不良反应的发生率.结果 研究组患者的临床总有效率明显高于对照组(P<0.05);与研究组患者治疗后血清中IL-2水平明显高于治疗前,IL-6水平显著低于治疗前(P<0.05),对照组患者治疗后血清中IL-2水平明显低于治疗前,IL-6水平显著高于治疗前(P<0.05),同时研究组患者治疗后血清中IL-2水平明显高于对照组,而IL-6水平显著低于对照组(P<0.05);治疗前相比,研究组患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK细胞、IgA、IgG和IgM水平明显升高,而CD8+水平显著下降(P<0.05),对照组患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK细胞、IgA、IgG和IgM水平明显降低,而CD8+水平显著升高(P<0.05),同时研究组患者治疗后免疫功能指标改善情况明显优于对照组(P<0.05);研究组患者生活质量的改善率显著高于对照组(P<0.05);研究组患者不良反应发生率明显低于对照组(P<0.05).结论 香菇多糖联合化疗能够有效治疗老年胃癌患者,在改善患者血清IL-2、IL-6水平的同时,能够提高患者机体的免疫功能和生活质量,并且安全性较高.

目的 探讨预存式自体输血联合同种异体自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)输注对胃癌手术后患者免疫功能的影响.方法 按照随机数字表法将120例胃癌患者分为对照组和观察组,各60例.对照组采用异体输血;观察组采用预存式自体输血联合同种异体 NK 细胞输注.两组均以治疗10 d为1个疗程;治疗前后采用单向免疫扩散法测定补体C3、C4水平,速率散射比浊法测定血清免疫球蛋白 IgG、IgA和 IgM,酶联免疫吸附试验检测治疗前后白细胞介素-10(interleukin,IL-10)、白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平,采用流式细胞仪法测定T细胞亚群(CD4+、CD3+、CD8+及CD4+/CD8+).结果两组治疗后C3、C4、IL-2和 IL-10水平升高,血清 IgG、IgA、IgM 和 TNF-α水平均下降.观察组 CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+细胞异常例数均少于对照组;IgG、IgA、IgM、C3及C4异常例数少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).CD8、TNF-α水平低于对照组;C3、C4、IL-2、IL-10、CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 预存式自体输血联合同种异体自然杀伤细胞输注能促进 T 细胞亚群平衡,调节肿瘤手术患者体液免疫,有利于提高患者免疫力,调节炎性细胞因子水平.

目的:探讨自体血回输与异体输血对颅脑手术患者部分血清炎症因子及免疫球蛋白水平的影响.方法:选取行颅脑手术的患者100例为研究对象,按术中输血方式均分为自体血回输组和异体输血组;分别于术前、术后第1天及第7天采集患者静脉血,采用单向免疫扩散法检测免疫球蛋白IgG、IgA及IgM水平,放射免疫法检测白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-6(IL-6)及干扰素γ(IFN-γ)水平,采用全自动生化分析仪检测红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb)、白细胞(WBC)及血小板(PLT)水平.结果:术后第1天及第7天自体血回输组IL-8、IL-6水平低于异体输血组,IFN-γ水平高于异体输血组,差异有统计学意义(P＜0.05);术后第1天及第7天自体血回输组IgG和IgA水平明显高于异体输血组、差异有统计学意义(P＜0.05),术后两组IgM水平的差异无统计学意义(P＞0.05);术后第1天及第7天自体血回输组RBC及Hb水平明显高于异体输血组,WBC明显低于异体输血组,差异有统计学意义(P＜0.05),两组术后PLT水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论:自体血回输对颅脑手术患者免疫功能的影响较小,患者术后炎症反应轻.

目的 探讨妊娠高血压综合征(pregnancy-induced hypertension syndrome,PIH)患者的免疫功能与内分泌相关性.方法 选取山东省妇幼保健院2016年1月至2017年11月期间收治确诊的98例PIH患者作为观察组,另选取该时间段内100例正常孕妇和未孕健康妇女作为对照Ⅰ组与对照组Ⅱ组.流式细胞仪检测CD3、CD4、CD8和CD20水平,放射免疫法检测免疫球蛋白(immunoglobulin,IG)A、IgG、IgM水平,单向免疫扩散法检测IgA及补体C3、C4水平.同时采用GC911γ放免计数仪检测促卵泡激素(follicle-stimulating hormone,FSH)、促黄体酮生成激素(luteinising hormone,LH)、垂体泌乳素(pitui-tary prolactin,PRL)水平,并对三组人群免疫功能与内分泌等相关指标检测并进行对比分析.结果 观察组CD3、CD4、CD8等细胞亚群及补体C4水平低于对照Ⅰ组与Ⅱ组,而CD20、CD4/CD8、IgG、IgA、IgM与补体C3等水平高于对照Ⅰ组与Ⅱ组,组间差异具有统计学意义(P＜0. 05);观察组FSH与LH水平低于对照Ⅰ组,但高于对照Ⅱ组,PRL水平高于对照Ⅰ组与Ⅱ组,组间差异具有统计学意义(均 P＜0. 05);观察组患者FSH和LH与CD3、CD4、CD8以及补体C4呈正相关,与CD20、CD4/CD8、IgG、IgA、IgM呈负相关;PRL与CD3、CD4、CD8以及补体C4呈负相关,与CD20、CD4/CD8,IgG、IgA、IgM呈正相关(P＜0. 05).结论 PIH患者的免疫功能与内分泌各激素有一定关联,在积极降压治疗的过程中,还应注重免疫状态及其内分泌功能稳定的调节.

目的 探讨谷胱甘肽S-转移酶系(GlutathioneS-transferases,GSTs)中GSTM1和GSTT1基因多态性与正常汉族人及内源性高甘油三酯血症(endogenous hypertriglyceridemia,HTG)患者血脂及载脂蛋白水平的相关性.方法 采用多重PCR对237名正常人和102例HTG患者GSTM1和GSTT1基因的多态性进行分析,采用酶法和单向免疫扩散法对血脂和载脂蛋白水平进行测定.结果 GSTM1非缺失基因型(GSTM1+)和缺失基因型(GSTM1-)携带者的频率在正常对照组分别为39.2％和60.8％,在HTG组分别为47.6％和52.4％;GSTT1非缺失型(GSTT1+)和缺失型(GSTT1-)者的频率在正常对照组分别为51.5％和48.5％,在HTG组分别为57.3％和42.7％.未见两组之间上述基因的基因型频率存在差异.进一步分析发现,正常汉族人GSTT1-/GSTM1-双缺失型者HDL-C水平最低(1.29±0.30 mmol/L),均低于其他3种基因型组合携带者,HDLC水平在GSTT1-/GSTM1-和GSTT1+/GSTM1-者之间差异存在统计学意义(P＜0.05),但在HTG组未观察到类似的变化,两种基因分别基因型分析也未见血脂和载脂蛋白水平在对照组和HTG组有统计学差异存在.结论 GSTM1、GSTT1基因多态性联合基因型与成都地区正常汉族中国人血清HDL-C水平存在关联,但未见其与HTG患者血脂及载脂蛋白水平有关.