T细胞受体(TCR)序列可作为分辨T细胞特异性的唯一标签,因其多样性的特征,在特定时间内个体循环系统中所有TCR构成的TCR组库可以反映个体的抗肿瘤免疫状态.单细胞TCR测序技术能够在单细胞水平上检测编码TCR双链的基因序列和表达量等信息,包括获得TCR的α链和β链的配对信息,从而在细胞水平上更为准确地探索TCR组库的异质性,还可结合其他技术将TCR序列与基因组、转录组、蛋白质组等多组学信息成套配对,精准展现细胞水平上的多角度信息.因该技术具有高通量、高分辨率的优势而被广泛应用于肿瘤免疫治疗相关研究,为探索TME中T细胞功能、发展T细胞受体工程化T细胞(TCR-T)疗法、预测免疫检查点抑制剂(ICI)疗效等提供重要依据,成为重要的筛选工具,期待该技术的发展使更多肿瘤患者受益.

目的 基于单细胞核转录组测序(snRNA-seq)技术描绘多发性大动脉炎(TAK)外周血单个核细胞(PBMC)基因和功能的异质性改变,阐述TAK可能的免疫机制.方法 收集确诊为TAK患者的PBMC共6例为疾病组(TAK组),同期就诊的健康人群6例PBMC为正常组(NC组).基于snRNA-seq工作流程建库测序,下机数据采用R 3.6.2软件进行主成分分析(PCA)及t-分布随机邻域嵌入(tSNE)分析等手段对两组PBMC样本池的单个核细胞的基因表达进行检测.结果 TAK患者PBMC的免疫细胞的相对比例和含量都发生了改变;高克隆TCR可高度同源性匹配整合素beta-3的氨基酸序列;T细胞介导的干扰素γ和TNFα通路显著上调;TNFRSF13B+记忆B细胞比例明显升高;所有细胞类型中单核细胞所形成的的配体受体相互作用始终最多.结论 TAK的发生发展过程中PBMC参与了复杂的调节,多种免疫炎症因子异常表达,其中单核细胞在PBMC的相互作用中占据了重要地位.

目的 探讨淋巴结滤泡辅助T细胞淋巴瘤伴霍奇金/Reed-Sternberg(HRS)样细胞的临床病理学特征、鉴别诊断及基因遗传学特征.方法 对5例淋巴结滤泡辅助T细胞淋巴瘤(nTFHL)伴HRS样细胞的临床资料、淋巴结活检组织形态学、免疫组化(IHC)、T/B细胞克隆性评估及NGS(二代测序)特征进行分析.结果 5例患者,男性4例,年龄分别为65、40、69、75岁;女性1例,年龄57岁.IHC结果示:异型淋巴细胞表达CD3、CD5、PD-1、BCL-6、CD4、CD10,Ki-67 阳性率 40～70％;HRS 样细胞表达 CD30、CD20、PAX-5、C-MYC、MUM-1 阳性,Ki-67 阳性率90％;1例HRS样细胞表达BOB-1,不表达OCT-2;3例HRS样细胞表达CD15、1例HRS样细胞不表达CD15、1例未行CD15染色;EBV原位杂交示:5例HRS样细胞均为阳性.T/B细胞克隆性评估结果:5例TCRG基因检测到单克隆重排,伴或不伴有IGH基因重排.NGS检测结果示:5例均检测到RHOA基因G17V及TET2基因突变.综合淋巴结形态学、IHC、基因重排及NGS结果诊断为nTFHL伴HRS样细胞.结论 nTFHL罕见病例可出现HRS样细胞,这些细胞呈现B细胞免疫表型.肿瘤性T细胞经TCR重排研究证实为克隆性.此外,在肿瘤性T细胞中还发现了 RHOA和TET2突变.根据文献报道,TET2突变为导致nTFHL发展的第二次打击RHOA突变奠定了基础.若要深入探讨HRS细胞对于nTFHL细胞遗传学的影响,显微切割HRS样细胞进行单细胞测序及基因检测可能更能说明问题.

结直肠癌是世界高发和高致死率的恶性肿瘤.靶向新抗原的免疫治疗已被证实可以诱导癌症患者肿瘤持续消退,但这些特异性新抗原,仅适用于个体精准治疗.随着大量的高频肿瘤基因突变被发现,这些与突变相关的高频新抗原可覆盖更多人群,具有较强的临床意义.然而目前结直肠癌中是否也存在高频新抗原仍不清楚.本研究利用来源于321个结直肠癌患者的体细胞突变数据库,联合1种标准过滤和7种预测算法,筛选并获得了25个基于中国人高频分型HLA-A*1101限制性的高频新抗原,它们均具有高亲和力(IC50<50 nmol/L)和高呈递分值(>0.90);其中,除了阳性对照多肽KRAS_G12V8-16外,11个高频新抗原能够在体外诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)分泌 γ 干扰素(interferon gamma,IFN-γ),证实具有免疫原性.选取免疫原性最强的新抗原C1orf170_S418G413-421及阳性对照多肽KRAS_G12V8-16体外刺激T细胞,利用流式细胞分选及单细胞转录组测序技术,获得其特异性CTL的免疫组库信息,所构建的TCR-T(T-cell receptor engineered T cell)能够识别新抗原并分泌细胞因子.以上结果表明,本研究开发了一种利用体细胞数据库预测并体外筛选验证具有免疫原性高频新抗原的方法,为结直肠癌及其他癌种的多肽、DC(dendritic cells)疫苗、TCR-like抗体、TCR-T等免疫治疗提供了重要的多肽靶点和TCR信息,具有实际的临床应用价值.

药物不良反应(adverse drug reactions,ADRs)可分为A型和B型.B型药物不良反应包括免疫介导的药物不良反应(immuneI mediated adverse drug reactions,M-ADRs)和非免疫介导药物不良反应.B型药物不良反应与不同人群携带特定人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)等位基因密切相关,除传统方法用于检测ADR以外,新一代TCR测序、 单细胞测序及肠道菌群检测等方法可用于预测药物不良反应.本文主要综述目前B型药物不良反应的发病机制、 遗传因素以及临床应用的进展,有助于预防以及更好地管理药物不良反应.

阿尔茨海默病(AD)是一种不可治愈的神经退行性疾病,是21世纪以来面临的一个巨大挑战.了解免疫系统参与对抗疾病至关重要.现综述对适应性免疫特别是T淋巴细胞在AD发病机制中的研究,初步证实以T淋巴细胞及其亚群、固有免疫细胞为主,通过与Aβ、Tau及HSV、EBV等自身/外源抗原发生免疫反应,未来亟需通过单细胞测序、BCR/TCR组库等高通量分析技术,及更多志愿者的CSF,整体研究AD炎症微环境的免疫应答、鉴定AD特异性抗原.这有助于确定新的靶标和治疗方案.

近年来以T细胞为基础的肿瘤免疫治疗发展迅速,但仅对部分肿瘤患者有效,因此亟待探索有效的检测方法和预测指标.T细胞受体(TCR)是T细胞抗原识别的关键分子.T细胞在胸腺成熟过程中经历了TCR基因重排,形成了TCR高度多样性,体内所有TCR类型与数量组成TCR组库.借助免疫组库测序技术可得到特定时期肿瘤患者TCR组库的信息,如TCR多样性、克隆性等特点,为个体化肿瘤免疫治疗方案的选择以及疗效预测提供了新线索.二代测序技术和单细胞测序技术的发展极大地扩展了TCR组库研究的深度与广度,极大地促进其在肿瘤免疫治疗领域的应用.本文通过对TCR组库测序应用领域、测序方法及其统计学评估指标进行综述,展示了TCR组库检测作为新型生物标志物来预测及评估患者预后的潜能,为个体精准化肿瘤免疫治疗提供新策略.