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甲病毒单轮感染颗粒的构建及其应用
编辑人员丨2024/1/20
甲病毒(alphavirus)主要包括致关节炎的旧世界甲病毒和引发致命性脑炎的新世界甲病毒,感染人体后可引起严重疾病.为了使用安全方便的工具来研究甲病毒的入侵机制,本研究建立了基于鼠白血病病毒(murine leukemia virus,MLV)的假病毒颗粒和基于新德毕斯病毒(Sindbis virus,SINV)的病毒复制子颗粒(virus replicon particle,VRP)系统.利用包装的假病毒和复制子颗粒,验证了硫酸乙酰肝素生成相关基因B3gat3(beta-1,3-glucuronyltransferase 3)和致关节炎甲病毒入胞受体基因 Mxra8(matrix remodeling associated 8)的敲除对不同甲病毒成员入胞的影响.本研究构建的MLV假病毒和SINV复制子颗粒系统,为甲病毒成员的入侵感染机制研究和抗病毒策略开发等提供了安全可靠的实验工具.
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编辑人员丨2024/1/20
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YFV17D非感染性报告复制子及假病毒包装系统的建立
编辑人员丨2023/9/23
构建YFV17D非感染性复制子及假病毒包装系统,旨在进一步解析黄热病毒的复制、组装分子机制.该研究利用反向遗传学技术,将基于SP6 启动子的单拷贝YFV17D报告复制子改造成由CMV启动子驱动的低拷贝YFV17D报告复制子,同时将表达YFV17D结构蛋白的包装质粒与复制子质粒共同转染BHK-21 细胞而建立YFV17D的反式假病毒包装系统.通过检测NanoLuc萤光素酶活性(Nluc)、oxGFP和mCherry荧光蛋白表达、间接免疫荧光实验监测病毒双链RNA来确定复制子在BHK-21细胞中复制情况和包装效果.结果表明,与复制缺陷型复制子相比,野生型复制子转染至BHK-21 细胞中,随着转染时间的增加,Nluc活性、oxGFP和mCherry荧光蛋白表达也随之增加,同时dsRNA也随时间延长而增多.将复制子质粒和包装质粒共同转染至BHK-21 细胞后,收集上清再次感染BHK-21 细胞,随后通过检测Nluc活性和oxGFP与mCherry蛋白的表达而确定假病毒包装成功.综上,成功构建了携带不同报告基因的YFV17D复制子,用于监控病毒基因组RNA的复制;成功搭建由包装质粒提供的结构蛋白,将不具备感染性的YFV17D亚基因复制子打包成具有单轮感染能力的YFV17D假病毒系统.
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编辑人员丨2023/9/23
