目的:建立高效液相色谱法(HPLC)同时测定真武汤中苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、新乌头碱、次乌头碱、乌头碱含量的方法.方法:应用HPLC,使用XBridge C18 色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)梯度洗脱,对真武汤中生物碱成分进行含量测定,同时参照《中华人民共和国药典》2020 年版对其双酯型生物碱进行限度检查.结果:苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、新乌头碱、次乌头碱、乌头碱质量浓度分别为9.314～93.140(r=0.999 6)、10.596～105.960(r=0.999 7)、6.848～68.480(r=0.999 7)、1.515～151.540(r=0.999 7)、1.434～143.420(r=0.999 8)、1.520～152.020 μg·mL-1(r=0.999 7)时与峰面积线性关系良好,加样回收率为 98.41%～102.17%,RSD 均小于 3.00%.15 批真武汤物质基准出粉率为 10.86%～17.73%;其物质基准中单酯型生物碱(苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱)质量分数分别为27.49～109.14、3.48～13.42、4.76～17.63 μg·g-1,双酯型生物碱(新乌头碱、次乌头碱和乌头碱)的总质量分数为2.55～17.67 μg·g-1.饮片中苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱和次乌头碱到物质基准平均转移率分别为 19.93%、22.34%、17.95%和 26.39%.结论:建立的HPLC简便、可靠、准确,可用于真武汤中单酯型生物碱和双酯型生物碱的含量测定,为真武汤相关制剂的质量控制提供参考.

目的 从miRNA-hERG途径探索双酯型生物碱对心肌细胞毒性的调控机制.方法 采用全细胞膜片钳技术测定hERG电流,实时荧光定量PCR测定基因表达水平,蛋白质免疫印迹实验测定蛋白表达.结果 3种双酯型生物碱均可降低hERG蛋白和基因表达水平,抑制心肌细胞hERG通道开放率,次乌头碱抑制作用最为显著且呈剂量依赖性.次乌头碱促进miR-134 表达量上升最明显,抑制miR-134 表达后hERG蛋白基因表达水平显著上升,hERG蛋白基因表达抑制率降低.结论 通过对miRNA表达进行修饰,次乌头碱可抑制hERG蛋白基因表达水平及hERG通道开放,此抑制效果可能是附子心脏毒性的重要组成部分.

目的:运用变异系数法-层次分析法(AHP)复合加权联用TOPSIS优选白附片炮制工艺参数,为白附片规范化炮制提供参考.方法:以煮制时间、浸漂时间和蒸制时间为考察因素,以穷举寻根法开展试验设计,以苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、新乌头碱、次乌头碱、乌头碱、水分、灰分和胆巴残留量为评价指标,以变异系数法-AHP复合加权计算权重系数,通过TOPSIS模型优选白附片炮制工艺参数.结果:白附片最优炮制工艺参数为煮制20 min、浸漂48 h、蒸制3 h.结论:该工艺稳定、可行,可为白附片的规模化加工炮制提供参考.

该文比较建昌帮阴附片、阳附片、淡附片3种附子炮制品在炮制过程中化学成分的变化,从成分角度为炮制减毒增效作用机制提供科学依据.分别对3种附片的炮制过程进行过程性取样,得到生附片、阴附片清水漂制(阴漂制)、阴附片姜汁润(阴姜润)、阴附片蒸制(阴蒸制、阴附片)、阳附片清水漂制(阳漂制)、阳附片砂炒(阳砂炒、阳附片)、淡附片清水漂制(淡漂制)、淡附片米泔水漂制(淡米泔水漂)、淡附片烤制(淡烤制、淡附片)样品,经UPLC-MS/MS检测提取液中乌头碱、新乌头碱、次乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头碱、乌头原碱、新乌头原碱、次乌头原碱、去甲猪毛菜碱、附子灵、去甲乌药碱的含量,再针对11组样品进行含量分析及聚类热图分析.3种饮片炮制过程中,漂制可大幅度降低附子中12种生物碱的含量;蒸制、炒制和烤制可显著降低双酯型生物碱(乌头碱、新乌头碱、次乌头碱)含量,显著提高单酯型生物碱(苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱)、胺醇型生物碱(乌头原碱、新乌头原碱、次乌头原碱)的含量.阴附片在炮制过程中,双酯型生物碱持续降低,单酯型生物碱、胺醇型生物碱呈现先降低后上升;阴附片、阳附片、淡附片在炮制过程中,双酯型生物碱持续降低,单酯型生物碱、胺醇型生物碱呈现先降低后升高趋势,蒸制的阴附片升高程度高于炒制的阳附片高于烤制的淡附片.综合分析3种附子炮制品中毒性成分及功效成分含量差异,得出建昌帮特色炮制方法确实可以实现对附子的减毒增效作用,为3种炮制方法作用机制提供参考.

目的 探究西藏不同地区乌头属药用植物的品质差异,完善质量标准.方法 以西藏地区3种乌头属植物为研究对象,采用药典方法测定其水分、灰分、浸出物;利用青稞酒进行炮制,采用HPLC法对其炮制前后生物碱的含量进行测定.结果 暂定铁棒锤、露蕊乌头、工布乌头水分含量分别不得超过8.60％、7.86％、8.18％;总灰分含量分别不得超过3.38％、4.09％、4.86％;酸不溶性灰分含量分别不得超过0.29％、0.71％、1.48％;浸出物含量分别不得低于15.56％、7.34％、15.78％;对比生品的生物碱质量分数发现,经青稞酒炮制后生物碱质量分数均不同程度的明显下降.单酯型生物碱质量分数从高到低依次为工布乌头＞铁棒锤＞露蕊乌头,双酯型生物碱质量分数从高到低依次为铁棒锤＞工布乌头＞露蕊乌头.结论 改进后的HPLC法可同时检测双酯型生物碱和单酯型生物碱,方法易操作且准确可行.为西藏地区的乌头属药用植物的品质分析以及制定完善质量标准提供一定研究依据和数据支撑.

目的:本研究利用药效团、分子对接及实时反转录PCR(RT-PCR)方法探究诃子制草乌通过瞬时受体电位香草酸 1(TRPV1)介导的减毒机制.方法:采用Discovery Studio 4.0 软件构建基于TRPV1 激动剂分子共同特征的TRPV1 激活药效团,虚拟筛选出草乌中的潜在活性成分;对草乌成分及诃子制草乌中引入的诃子成分进行Autodock vina分子对接研究;根据结果选出代表性成分,采用实时反转录PCR验证是否可促进心肌细胞中TRPV1 mRNA表达.结果:药效团共筛选出草乌中包括毒性较大的双酯型生物碱乌头碱、新乌头碱及次乌头碱在内的 13 个成分,分子对接结果表明这 13 个成分及诃子制草乌引入的诃子成分均有潜力与TRPV1 结合.RT-PCR实验中没食子酸和新乌头碱在浓度≥25 μmol/L时,均可明显促进大鼠H9c2 心肌细胞中TRPV1 mRNA表达的增加,随着给药浓度的增大表达量增加,新乌头碱促进TRPV1 mR-NA表达的作用更强.药效团、分子对接结果表明诃子和草乌中均含有多种具备TRPV1 激活潜力的成分.结论:实验证明新乌头碱、没食子酸均可在一定程度上激活TRPV1 通道,可作为TRPV1 的激动剂.根据结果推测,诃子可能会通过拮抗草乌中的活性成分与TRPV1 的结合,从而降低草乌通过TRPV1 介导的毒性;也可能是诃子制草乌在引入没食子酸等诃子成分后,可在安全剂量范围内使TRPV1 通道快速脱敏从而实现减毒.

乌头属毛茛科植物,其主要成分是乌头碱,为剧毒的双酯型生物碱,摄入乌头碱0.2 mg即能使人中毒,3～5 mg即可致死,目前尚无特效解毒剂[1].严重恶性心律失常是重度乌头碱中毒的主要死亡原因之一.回顾分析我院2012年1月接诊并成功救治的4例重度急性乌头碱中毒患者的临床资料,报告如下.一、临床资料1.中毒原因及临床表现:4例乌头碱中毒患者均为男性,年龄22～32岁,既往体健.中毒原因均为同时服草乌药酒约250 ml,就诊时间均为出现症状1h左右.

目的 采用HPLC法同时测定草乌中苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、新乌头碱、乌头碱、次乌头碱等6种生物碱的含量.方法 采用Gemini C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-5 mmol·L-1NaH2PO4水溶液(50∶50,磷酸调pH4.5,含7 mmol·L-1十二烷基硫酸钠),检测波长235 nm,流速1.0 mL· min-1,柱温35℃.结果 6种生物碱可完全分离,线性范围均为0.83 ～19.75 μg(r均＞0.99);日内、日间和进样精密度的RSD均＜2％,平均加样回收率分别为103.2％、103.2％ 、103.1％、101.0％ 、102.3％、100.5％ (n =6).结论 所用方法简单、准确、分离效果好,可同时测定草乌中6种生物碱的含量.

乌头碱类药物包括附子、川乌、草乌、雪上一支蒿和一些地方药材及民族药材,为剧毒的双酯型生物碱.在很多民间地区,乌头碱类药物常被用于治疗骨性关节炎,风湿疼痛,气喘咳嗽等疾病,但应用不当极易引起中毒.急性乌头碱中毒患者主要临床表现为恶心、呕吐、晕厥、四肢刺痛和麻木以及恶性心律失常等[1],急性乌头碱中毒致恶性室性心律失常是本病致死的主要原因之一.

目的 比较生姜煮汁制、于姜煮汁制、生姜榨汁制、生姜片拌蒸制、干姜片拌蒸制附子Aconiti lateralis RadixPraeparata中苯甲酰新乌头碱、苯甲酰次乌头碱、苯甲酰乌头碱、新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的含有量.方法 酸碱滴定法测定总生物碱含有量;HPLC法测定6种生物碱含有量,分析采用Waters Symmetry(C)C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);以乙腈-0.04 mol/L醋酸铵为流动相,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;检测波长235 nm;柱温35℃.结果 各炮制品中总生物碱、双酯型生物碱(新乌头碱、乌头碱、次乌头碱)含有量明显低于生品,以生、干姜片拌蒸制品更明显.干姜片拌蒸制品中苯甲酰次乌头碱、苯甲酰乌头碱含有量最低;生品中苯甲酰新乌头碱含有量最低.结论 与其他姜制方法相比,生、干姜片拌蒸制可更有效地降低附子毒性.