目的:对一个Ⅱ型糖尿病(T2DM)合并恶性肿瘤复杂家系进行基因变异分析，筛选其候选致病/易感基因。方法:用全外显子组测序(WES)技术对T2DM合并恶性肿瘤复杂家系的11名成员进行DNA测序，用生物信息学方法筛选候选致病/易感突变，并用Sanger测序对候选突变进行验证。结果:该家系共21人，其中11人诊断为T2DM，7人诊断为乳腺癌、胃癌、胰腺癌或脑瘤。对11名家系成员(7人诊断为T2DM，两人诊断为乳腺癌)进行了WES测序分析，筛选出6个候选糖尿病相关突变，其中功能丢失型(TOF)突变1个为瞬时受体电位阳离子M亚家族成员1(TRPM1) c．G4240T p．E1414X；非LOF突变5个，涉及腺苷酸激酶7(AK7)、CROCC、溶质载体家族15成员1(SLC15A1)、丝氨酸羟甲基转移酶2(SHMT2)、Teashirt锌指同源异型盒2(TSHZ2)基因。同时还筛选得到4个肿瘤相关遗传位点(rs3184504、rs1053338、rs11894115和rs11552449)。结论:TRPM1 c．G4240T变异可能是导致该家系糖尿病合并肿瘤发生的关键候选变异；而rs3184504、rs1053338、rs11894115和rs11552449遗传位点可能为该家系乳腺癌易感性位点。

目的:探讨卵巢消化系统来源转移性肿瘤的临床病理学特征。方法:回顾性分析大连市妇女儿童医疗中心（集团）妇产院区2006年4月至2020年1月21例卵巢消化系统来源转移性肿瘤患者的临床病理资料及随访资料，复阅切片，EnVision法行免疫组织化学检测，总结临床病理学特征。结果:21例患者年龄26~66岁，平均41.5岁；以腹部不适和/或腹痛就诊17例，以不规则阴道流血就诊4例。81.0%（17/21）发生于双侧卵巢，直径0.2~20.0 cm，以实性和囊实性为主，结节状或分叶状。镜下见肿瘤细胞弥漫浸润卵巢间质，伴有间质明显增生及黄素化。胃癌卵巢转移以印戒细胞癌为主，细胞角蛋白7（CK7）阳性，尾型同源盒转录因子2（CDX2）和细胞角蛋白20（CK20）部分阳性，配对盒基因8（PAX8）和富含AT序列特异性结合蛋白2（SATB2）阴性；结直肠癌卵巢转移主要表现为异型性明显的腺体，单个或形成筛状结构；阑尾肿瘤卵巢转移多呈类似卵巢交界性肿瘤的低级别肿瘤细胞及丰富的细胞外黏液，同时并发腹膜假黏液瘤。结直肠癌卵巢转移和阑尾肿瘤卵巢转移患者CK7和PAX8为阴性，CK20、CDX2及SATB2为阳性。平均随访36个月，18例在5年内复发，15例死亡；3例失访。结论:卵巢消化系统来源转移性肿瘤多为双侧，大体实性和囊实性为主，镜下表现为肿瘤细胞的弥漫性间质浸润，诊断时需结合病史、临床症状，肿物大体及组织学特征并辅以免疫组织化学综合分析，整体预后差，主要与卵巢原发性黏液性肿瘤鉴别。

目的:探讨姜黄素对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞A549和H460放射敏感性的影响，并探索长链非编码RNA（lncRNA）同源异型盒基因转录的反义基因间RNA （HOTAIR）在其中的调节机制。方法:将培养的NSCLC细胞A549和H460根据处理方法的不同，采用4种方式进行分组。（1）分别将NSCLC细胞A549和H460分为6组：0、15、30、60、120和240 μmol/L姜黄素组，采用细胞计数试剂盒8(CCK-8）实验检测各组细胞的增殖活力；（2）分别将NSCLC细胞A549和H460分为8组：0、2、4、6 Gy γ射线照射组及其与30 μmol/L姜黄素联合组，采用CCK-8实验和平板克隆形成实验检测各组细胞的增殖活力；（3）将NSCLC细胞A549分为4组：空白对照组、30 μmol/L姜黄素组、4 Gy γ射线照射组和30 μmol/L姜黄素+4 Gy γ射线照射联合组，采用实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）实验检测各组细胞中5种促癌lncRNA和5种抑癌lncRNA的表达情况；（4）将NSCLC细胞A549分为6组：空白对照组、30 μmol/L姜黄素组、30 μmol/L姜黄素+lncRNA HOTAIR过表达组、4 Gy γ射线照射组、4 Gy γ射线照射+30 μmol/L姜黄素联合组和4 Gy γ射线照射+30 μmol/L姜黄素+lncRNA HOTAIR过表达组，采用CCK-8实验和平板克隆形成实验检测各组细胞的增殖活力。采用学生 t检验进行统计学分析。 结果:（1) CCK-8实验结果显示，不同浓度的姜黄素处理可以剂量和时间依赖的方式降低NSCLC细胞A549和H460的增殖活力，且除了15 μmol/L姜黄素作用24 h之外，其余浓度和时间的姜黄素组与对照组相比，差异有统计学意义（ t=3.884~5.731， P=0.000~0.043 ）。（2）CCK-8实验和克隆形成实验结果显示，30 μmol/L姜黄素＋不同剂量的γ射线照射联合处理可使γ射线照射单独处理下的NSCLC细胞A549和H460的增殖活力和克隆形成能力进一步降低，差异有统计学意义（ t=2.503~12.418 ， P=0.000~0.044）。（3）qRT-PCR实验结果显示，与空白对照组相比，lncRNA HOTAIR在γ射线单独处理后表达升高（ t=3.317， P=0.040），而30 μmol/L姜黄素单独处理和30 μmol/L姜黄素+4 Gy γ射线联合处理均可下调A549细胞中促癌lncRNA HOTAIR的表达（ t=3.205、5.916， P=0.038、0.000）。（4）对HOTAIR进行过表达处理，可消除姜黄素对NSCLC细胞A549增殖的抑制并增强其放射敏感性（ t=3.584~5.802， P=0.000~0.004）。 结论:姜黄素可以通过下调促癌lncRNA HOTAIR的表达从而抑制NSCLC细胞的增殖活力，并增强其放射敏感性。

目的:制备新型的靶向长链非编码RNA （lncRNA）同源异型盒基因转录的反义基因间RNA (HOTAIR）的反义寡核苷酸（ASON）探针 99Tc m-HYNIC-ASON (HYNIC为联肼尼克酰胺），探讨其对人脑胶质瘤U87细胞增殖和迁移能力的影响。 方法:设计并通过化学修饰合成HOTAIR的ASON，使用双功能螯合剂HYNIC偶联 99Tc m并进行纯化。采用快速薄层层析(ITLC）法和琼脂糖凝胶电泳分别检测探针的标记率、放射化学纯度、体外稳定性及完整性。细胞摄取实验分为2组：Lipo- 99Tc m-HYNIC-ASON组（转染组）和 99Tc m-HYNIC-ASON组（未转染组），通过脂质体转染探针，测定人脑胶质瘤U87细胞对探针的摄取率；细胞计数试剂盒8(CCK-8）实验和细胞划痕实验分为3组：Lipo- 99Tc m-HYNIC-ASON组（转染组）、 99Tc m-HYNIC-ASON组（未转染组）、 99Tc m-Control组（对照组），分别检测转染探针后细胞增殖和迁移能力的变化。2组间比较采用Student t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:99Tc m-HYNIC-ASON的标记率为（90.0±5.6）%。琼脂糖凝胶电泳结果显示， 99Tc m与探针成功标记并且没有明显的降解，探针孵育12 h的放射化学纯度>80%。细胞摄取实验结果显示，转染后5 h，探针Lipo- 99Tc m-HYNIC-ASON在人脑胶质瘤U87细胞中的摄取率最大（0.70%），与未转染组（0.16%）相比，差异有统计学意义（ t=17.81， P<0.01）。CCK-8实验结果显示，转染探针Lipo- 99Tc m-HYNIC-ASON能抑制人脑胶质瘤U87细胞的增殖能力，与未转染组相比，在各个时间点（1、2、3、4、5 d）的差异均有统计学意义（ t=2.336~30.230,均 P<0.05）。细胞划痕实验结果显示，转染探针Lipo- 99Tc m-HYNIC-ASON能抑制人脑胶质瘤U87细胞的迁移，3组细胞间隙融合率的差异有统计学意义( F=331.8， P<0.01)，与未转染组相比，转染组细胞间隙融合率明显降低，且差异有统计学意义（60.0％对23.6%， t=51.54， P<0.01）。 结论:成功合成了靶向人脑胶质瘤lncRNA HOTAIR的探针 99Tc m-HYNIC-ASON，该探针具有良好的体外稳定性和靶向结合能力，能够抑制人脑胶质瘤U87细胞的增殖和迁移。

目的 探讨结直肠癌组织同源异型盒基因A5(HOXA5)、三结构域蛋白14(TRIM14)蛋白表达水平与临床病理特征及患者预后的关系.方法 回顾性收集整理2016年5月至2018年5月期间于河南中医药大学郑州人民医院确诊的120例结直肠癌患者癌组织及癌旁组织标本及相关临床资料,采用免疫组化法检测组织HOXA5、TRIM14 蛋白表达水平;分析HOXA5、TRIM14 水平与结直肠癌患者临床病理特征及预后的关系;采用Kaplan-Meier法分析组织中HOXA5、TRIM14表达与结直肠癌5年生存率的关系;采用Cox比例风险回归模型分析结直肠癌5年预后影响因素.结果 结直肠癌组织中TRIM14蛋白阳性率为73.33%,明显高于癌旁组织的10.00%,HOXA5蛋白阳性率为27.50%,明显低于癌旁组织的81.67%,差异均有统计学意义(P<0.05).TRIM1蛋白阳性表达患者肿瘤低分化比例为42.05%,浸润深度T3～T4比例为72.73%,有淋巴结转移比例为47.73%,有远处转移比例为29.55%,明显高于TRIM1蛋白阴性表达的12.50%、37.50%、12.50%、6.25%,差异均有统计学意义(P<0.05);HOXA5蛋白阴性表达患者肿瘤低分化比例为41.38%,浸润深度T3～T4 比例为77.01%,有淋巴结转移比例为48.28%,有远处转移比例为29.89%,明显高于HOXA5蛋白阳性表达的15.15%、27.27%、12.12%、6.06%,差异均有统计学意义(P<0.05).结直肠癌组织中HOXA5阴性表达和TRIM14阳性表达患者的5年生存率分别为57.47%、59.09%,明显低于HOXA5阳性表达患者的90.91%和TRIM14阴性表达患者的87.50%,差异均有统计学意义(P<0.05).死亡组患者有淋巴结转移比例为85.00%,有远处转移比例为55.00%,明显高于生存组的15.00%、7.50%,差异均有统计学意义(P<0.05).经Cox比例风险回归模型分析结果显示,TRIM14是结直肠癌患者5年内死亡的独立危险因素,HOXA5是结直肠癌患者5年内死亡的保护因素(P<0.05).结论 结直肠癌组织中TRIM14呈高表达状态,HOXA5呈低表达状态,两者均与TNM分期、肿瘤分化程度、浸润深度等临床病理特征及预后相关,有作为预后标志物及治疗靶点的潜力.

[目的]探讨同源异型盒蛋白 2B(PHOX2B)在外周神经母细胞性肿瘤(pNTs)4 种分型组织中的表达差异.[方法]回顾性分析 2019 年 1 月至 2022 年 12 月本院收治的 65 例pNTs患儿的临床资料,根据免疫组化综合评分方法对 pNTs 4 种分型中 PHOX2B的表达情况进行分析,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估PHOX2B免疫组化综合评分预测神经母细胞瘤(NB)、节细胞性神经母细胞瘤(GNB)混杂型(GNBi)、节细胞性神经母细胞瘤结节型(GNBn)和节细胞性神经瘤(GN)的价值.[结果]男、女患儿病例数分别为 33 例、32 例,无明显的性别差异;年龄分布主要为 6 岁以下患儿,其所占比例为 75.38%(49/65);腹膜后为常见原发部位,其次为纵隔和肾上腺.PHOX2B在 NB中免疫组化综合评分最高,其次为 GNBn,GNBi 和 GN 表达最弱,NB免疫组化综合评分显著高于 GNBn、GNBi、GN,GNBn免疫组化综合评分显著高于 GNBi、GN,差异均有统计学意义(P<0.05).ROC曲线结果显示,PHOX2B免疫组化综合评分为 5 分时可作为诊断 NB 的参考阈值,PHOX2B 免疫组化综合评分为 3 分可作为诊断 GNBn的参考阈值(P<0.05).[结论]PHOX2B在 pNTs 不同类型的表达有显著差异,其表达强度可作为 pNTs病理分型的依据.

目的 观察正常及损伤后小鼠脊髓中淋巴管的分布及特点,探讨脊髓损伤修复过程中有无淋巴管的参与.方法 成年雄性KM小鼠39只,小鼠随机分为两组:正常组6只和损伤组33只.将损伤组小鼠随机分为术后1 d组、术后3 d组、术后5 d组、术后7 d组和术后14 d组,每组6只.损伤组部分小鼠针刺损伤后死亡3只,后随机补充样本.正常组不损伤脊髓,损伤组采用针刺法制备脊髓损伤.通过免疫组织化学方法检测脊髓中淋巴管内皮细胞的分布,观察正常及针刺损伤后小鼠脊髓中淋巴管内皮细胞标记物同源异型盒基因转录因子1(prox-1)、淋巴管内皮细胞透明质酸受体-1(lyve-1)、平足蛋白(podoplanin)以及血管内皮细胞标记物CD34的表达情况.通过对脊髓样本进行免疫荧光染色,观察lvye-1/prox-1、lyve-1/podoplanin及CD34/prox-1的共表达情况,探讨新生淋巴管内皮细胞的来源.结果 正常成年小鼠脊髓中存在淋巴管样结构,并呈节段性分布,横向走行于白质与灰质间;针刺损伤处的脊髓出现新生淋巴管样结构,同时表达prox-1、podoplanin、lyve-1和CD34;脊髓损伤处瘢痕化后,新生的淋巴管样结构消失.结论 正常成年小鼠脊髓中存在节段性横向分布的淋巴管样结构;脊髓损伤处重建过程中有新生淋巴管样结构的参与,新生淋巴管内皮细胞可能来源于周围既存的淋巴管或血管内皮细胞.

原发性鼻腔非肠型腺癌(non-intestinal-type adenocarcinoma,non-ITACs)是一种罕见病,缺乏特异的临床表现,术前诊断较困难.2022年1月5日枣阳市第一人民医院收治1例non-ITACs女性患者,75岁,因左侧鼻塞1年余,加重1个月余入院.鼻窦冠状位CT示左侧上颌窦壁骨质破坏,左侧上颌窦肿瘤性病变可能,不排除炎性病变.镜下肿瘤呈腺样增生,以背靠背或相互衔接的方式排列,局部呈乳头状结构,膨胀性浸润性生长.局部细胞呈高柱状,伴有明显的细胞内黏液,细胞核轻-中度异型,核分裂象可见.免疫组织化学染色示肿瘤细胞细胞角蛋白7(cytokeratin 7,CK7)(+),CK20、Villin、尾型同源盒转录因子2(caudal-related homeobox transcription factor,CDX2)、特异AT序列结合蛋白2(specific AT sequence binding protein 2,SATB-2)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)、甲状腺转录因子(thyriod transcription factor-1,TTF-1)、P40、S-100、SOX10、配对盒基因8蛋白(paired box protein 8,PAX-8)均(-),Ki-67(增殖指数为10%).non-ITACs可以依据临床及病理组织学特征,并结合免疫组织化学染色明确诊断,分子诊断结果可以为该肿瘤的治疗提供有力帮助.

目的 建立胰腺癌耐药细胞株,探寻新的胰腺癌细胞耐药基因并初步研究其作用机制.方法 采用大剂量间歇诱导法建立对顺铂(CDDP)和吉西他滨(GEM)耐药的细胞株.采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测其半数致死量(IC50)、耐药指数(R)及交叉耐药情况,并观察其生长差异.应用流式细胞术检测耐药细胞的周期变化,Transwell迁移实验检测其迁移能力的改变,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中多药耐药相关基因的变化.结果 成功获得对CDDP耐药的细胞株JF305/CDDP和对GEM耐药的细胞株PANC-1/GEM.JF305/CDDP和PANC-1/GEM细胞株的耐药指数分别为15.3和27.31,并存在交叉耐药.与亲代细胞相比,JF305/CDDP细胞的生长增殖速度减慢,第4天时吸光度(A)值分别为0.60±0.01和1.00±0.06(P=0.002);JF305/CDDP细胞的G1+G2期细胞比例增加[(70±3)％和(55±3)％],而S期细胞比例减少[(30±2)％和(45±2)％,P=0.041];JF305/CDDP细胞穿过Transwell小室的数量增加[(158±5)个/视野和(32±1)个/视野,P<0.001];JF305/CDDP细胞中多药耐药基因1(MDR1)、多药耐药相关蛋白2(MRP2)和同源(异型)框基因2(MSX2)的表达量增加到(5.10±0.63)倍、(7.20±0.84)倍和(6.95±0.77倍).在JF305细胞中,敲降MSX2则MRP2表达降低(0.69±0.17);在PANC-1细胞中,过表达MSX2则MRP2表达升高(2.1±0.31).结论 成功建立了2株稳定的耐药胰腺癌细胞株JF305/CDDP和PANC-1/GEM.发现了新的耐药相关基因MSX2,MSX2可能通过上调MRP2的表达促进胰腺癌细胞耐药.

目的:研究微小RNA-27a-3p(miR-27a-3p)对糖尿病患者创面愈合的影响及作用机制.方法:采用qPCR和Western blot检测糖尿病患者创面愈合组织中miR-27a-3p、同源异型盒基因A5(HOXA5)mRNA和HOXA5蛋白的表达.使用高糖处理人微血管内皮细胞(HMECs),模拟糖尿病HMECs的损伤.在HMECs中转染miR-27a-3p mimic或HOXA5 siRNA,并进行高糖处理,MTT法测定细胞活力,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot法测定HOXA5、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)和β-连环蛋白(β-catenin)蛋白的表达.StarBase预测结合双萤光素酶活性检测分析miR-27a-3p和HOXA5的靶向关系.在HMECs中共转染miR-27a-3p mimic和pcDNA-HOXA5,并使用高糖处理,观察其对细胞活力、迁移和侵袭能力的影响.结果:糖尿病患者创面愈合组织中miR-27a-3p的表达量明显减少,HOXA5的mRNA和蛋白表达量显著增加(P<0.05).高糖诱导的HMECs中miR-27a-3p的表达量、细胞活力、细胞迁移和侵袭数量及cyclin D1、MMP2和MMP9的蛋白水平均显著降低(P<0.05).高表达miR-27a-3p或低表达HOXA5明显增加高糖处理HMECs的细胞活力、迁移和侵袭能力及cyclin D1、MMP2和MMP9的蛋白表达量(P<0.05).miR-27a-3p靶向调控HOXA5表达.高表达HOXA5可以部分消除miR-27a-3p mimic对高糖处理的HMECs活力、迁移和侵袭能力以及cy?clin D1、MMP2、MMP9和β-catenin蛋白表达的影响.结论:miR-27a-3p靶向HOXA5基因,并通过Wnt/β-catenin信号通路促进高糖诱导的微血管内皮细胞生长、迁移和侵袭,从而促进糖尿病患者的创面愈合.