目的 探究同源异形盒(HOX)D10 在子宫内膜癌(EC)组织中的表达和基因甲基化状态,分析其与临床病理特征及生存预后的关系.方法 采用基因表达谱动态分析(GEPIA)工具分析美国公共癌症基因数据库(TCGA)中HOXD10 mRNA在EC组织和正常组织中的表达差异及预后信息.选取 2016 年 5 至 2018 年 4 月在我院治疗的EC患者 148例,另选同期 30 例子宫内膜增生症患者作为良性病变组,收集患者临床资料及新鲜组织标本.采用实时荧光定量 PCR(qPCR)、甲基化定量 PCR、免疫组织化学染色法检测组织HOXD10 mRNA、基因启动子甲基化状态、蛋白表达.结果 TCGA数据集中,174 例EC组织中 HOXD10 mRNA 表达量显著低于 91 例正常子宫内膜组织中的表达量(P＜0.05),但未得出HOXD10 mRNA表达与患者中位总生存期(OS)和无进展生存时间(PFS)之间的关系(P＞0.05).临床研究中,EC组织中的HOXD10 mRNA表达均显著低于良性病变组织(0.229±0.237 vs.1.018±0.265),但HOXD10 mRNA启动子甲基化水平(0.166±0.237 vs.0.041±0.033)和甲基化率(50.0%vs.10.0%)均显著高于良性病变组织(P＜0.05).且HOXD10 mRNA启动子高甲基化的癌组织样本中HOXD10 mRNA及蛋白阳性表达率显著降低(P＜0.05).HOXD10 mRNA甲基化与国际妇产科联合会(FIGO)分期、组织学分级、淋巴结转移、肌层浸润程度相关(P＜0.05),HOXD10 蛋白阳性表达率在不同FIGO分期、微卫星不稳定的EC患者间存在有统计学意义的差异(P＜0.05).Cox比例风险回归模型分析显示,微卫星不稳定、肌层浸润≥1/2 肌层、HOXD10 mRNA启动子高甲基化是影响EC患者OS的独立危险因素(P＜0.05).HOXD10 mRNA启动子高甲基化预示着EC患者更短的OS(P＜0.05).结论 EC组织中HOXD10mRNA启动子甲基化水平明显升高,这可能是导致HOXD10 蛋白低表达的部分原因.且其高甲基化状态与EC患者临床病理特征及生存结局相关,可作为EC恶性程度和预后的潜在生物学标志物.

目的:研究同源异形盒基因D10 (homeobox D10, HOXD10)在人胆管癌组织中的启动子甲基化状态,并探讨HOXD10基因启动子甲基化与胆管癌患者预后的关系.方法:采用甲基化特异性PCR法检测87例人胆管癌组织与30例癌旁组织中HOXD10基因启动子的甲基化情况,并进一步采用重亚硫酸盐测序法检测HOXD10基因启动子中27个胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸(cytosine-phosphate-guanosine, CpG)位点的甲基化程度.然后,应用Spearman相关检验分析HOXD10基因启动子甲基化与其蛋白表达的相关性,用cut-point生存分析和Kaplan-Meier法检验HOXD10基因启动子区CpG位点甲基化数目与胆管癌患者预后的关系.结果:胆管癌组织中HOXD10基因启动子甲基化率明显高于癌旁组织 (P＜ 0.05),而且癌旁组织中HOXD10启动子区域的CpG位点数目少于胆管癌组织.HOXD10蛋白表达和HOXD10基因启动子甲基化在胆管癌中呈显著负相关性(r=-0.82,P＜ 0.000 1). HOXD10基因启动子区有7个CpG位点甲基化是胆管癌患者生存分析的最佳"截点"(P＜ 0.001), CpG位点数目为0～6个的胆管癌患者生存时间明显长于CpG位点数目≥ 7个的患者(P＜ 0.01).结论:基因启动子甲基化与HOXD10蛋白的表达失活密切相关,HOXD10基因启动子区存在≥ 7个CpG位点甲基化可作为胆管癌患者预后不良的预测指标之一.

目的 探讨同源异形盒基因D10(HOXD10)在胶质母细胞瘤中的启动子甲基化状态,并分析其基因启动子甲基化与患者预后的关系.方法 选取49例人脑胶质母细胞瘤和30例正常脑组织,采用甲基化特异性PCR技术检测HOXD10基因启动子甲基化状态,免疫组织化学法分别检测HOXD10蛋白表达,分析HOXD10基因启动子甲基化状态与患者临床病理特征的关系.Kaplan-Meier法分析HOXD10基因启动子甲基化状态与患者预后关系,Cox回归模型分析影响患者预后因素,Spearman相关性分析HOXD10基因启动子甲基化与其蛋白表达相关性.结果 与正常脑组织相比,胶质母细胞瘤HOXD10启动子甲基化阳性率升高(P<0.05).HOXD10启动子甲基化状态与患者性别、年龄、KPS无关(P>0.05),肿瘤直径>5 cm患者的HOXD10启动子甲基化阳性率高于肿瘤直径≤5 cm患者(P<0.05),病理分级为高级别(Ⅲ～ Ⅳ级)患者HOXD10启动子甲基化阳性率高于病理分级为低级别患者(P<0.05).胶质母细胞瘤HOXD10启动子甲基化阳性患者PFS和OS均低于阴性患者(P<0.05).病理分级和HOXD10基因启动子甲基化状态是影响患者预后的独立危险因素(P<0.05).胶质母细胞瘤HOXD10基因启动子甲基化阳性患者HOXD10蛋白阳性率低于阴性患者(P<0.05).Spearman相关性分析结果显示,胶质母细胞瘤中HOXD10基因启动子甲基化与其蛋白表达呈负相关(r=-0.731,P<0.05).结论 胶质母细胞瘤中HOXD10基因启动子甲基化阳性率升高,阳性表达患者预后较差,可作为患者预后评估的重要参考指标.

目的:检测数种乳腺癌细胞系中长链非编码RNA(long noncoding RNA,LncRNA)HOX转录反义RNA(HOX transcript antisense RNA,HOTAIR)和多梳抑制复合物2(poly-comb repressive complex 2,PRC2)的表达及相互影响.方法:在美国国立癌症研究所(national cancer institute,NCI)60细胞库,检测HOTAIR表达情况,选择高表达、低表达的乳腺癌细胞系及对照细胞系.蛋白印迹法检测这些细胞系中PRC2组件的表达,组蛋白3(histone3,H3)甲基化情况,用实时聚合酶联反应(real time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测HOTAIR与PRC2的相互影响.构建高表达HOTAIR细胞系,RT-PCR检测相关致癌、凋亡基因,用microRNA200c(miR200c)逆转.结果:通过正向、负向干预HOTAIR表达,高表达HOTAIR的乳腺癌细胞中HOTAIR与PRC2有协同作用,低表达HOTAIR的乳腺癌细胞中HOTAIR对PRC2有拮抗作用.PRC2复合物中,zeste基因增强子的人类同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)作为活性亚基表达更稳定.组蛋白3第27位赖氨酸的三甲基化(trimethyl-ation of lysine 27 on histone 3,H3K27Me3)并未在正负向干预HOTAIR后发生明显蛋白水平变化.在MDA-MB-231细胞系中,过表达HOTAIR和EZH2会使同源异形盒基因(ho-meobox D10,HOXD10)表达增高,而B细胞迁移基因2(B-cell translocation gene 2,BTG2),磷酸酶和张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homologue,PTEN)基因的表达降低.过表达鼠肉瘤(rat sarcoma,RAS)基因组乳腺细胞系,HOTAIR基因表达亦增高,而BTG2基因降低.共转miR200c RAS基因的乳腺细胞系中,HOTAIR表达下调,BTG2表达上调.结论:在不同HOTAIR表达水平的乳腺癌细胞中,HOTAIR与PRC2的作用不相同,沉默彼此,对H3K27Me3无明显影响.HOTAIR和PRC2复合物会促进HOXD10基因表达,并抑制BTG2、PTEN表达.而RAS可影响HOTAIR表达,但对下游调控的作用能被miR200C逆转.