目的 研究土茯苓多糖对秀丽隐杆线虫脂代谢的影响.方法 以秀丽隐杆线虫为模式生物,分为对照组、奥利司他组(6 μg/mL)及土茯苓多糖低、中、高剂量组(0.25、0.5、1 mg/mL).通过苏丹黑B和和油红O染色观察线虫肠道内脂质沉积情况,荧光探针法检测线虫体内ROS水平,ELISA法检测线虫MDA、TG水平及SOD活性,RT-qPCR法检测线虫fat-2、nhr-80、sbp-1 mRNA表达,检测突变型线虫TG水平.结果 与对照组比较,奥利司他组和土茯苓多糖各剂量组线虫肠道内苏丹黑B和油红O染色变浅,脂滴密度降低,线虫体内TG水平降低(P＜0.01),且土茯苓多糖呈剂量依赖性,奥利司他组和土茯苓多糖中、高剂量组线虫体内MDA水平降低(P＜0.01),SOD活性升高(P＜0.01).土茯苓多糖高剂量组线虫体内fat-2、nhr-80、sbp-1 mRNA表达降低(P＜0.05,P＜0.01),土茯苓多糖对nhr-80(BX165)突变型线虫体内 TG 水平的影响无差异(P＞0.05).结论 土茯苓多糖可通过降低 fat-2、nhr-80 mRNA表达来减少不饱和脂肪酸的形成和氧化,缓解氧化应激,减少氧化产物产生,且能升高SOD活性,降低MDA、ROS水平,并通过降低sbp-1 mRNA表达来减少脂质的生成和积累.

目的:基于网络药理学与分子对接探讨运脾化湿清肺汤治疗特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)的作用机制.方法:运用中药网络药理学分析系统(TCM network pharmacology analysis system,TCMNPAS)v1.0 获取运脾化湿清肺汤(陈皮、枳壳、桑叶、菊花、金银花、黄芩、土茯苓、白鲜皮、白术、甘草)的活性成分和作用靶点.运用GeneCards数据库、DrugBank数据库检索相关文献获取AD疾病靶点,并借助jvenn平台得到运脾化湿清肺汤与AD的交集靶点.将交集靶点上传至STRING数据库,构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络.通过Cytoscape 3.8.0 软件进行拓扑分析,从而筛选核心靶点.采用Metascape数据库进行基因本体(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and ge-nomes,KEGG)富集分析.利用Cytoscape 3.8.0 软件构建"药物-活性成分-作用靶点"网络、"药物-靶点-通路"网络.最后,通过TCMNPAS数据库进行分子对接验证.结果:运脾化湿清肺汤活性成分 243 个、作用靶点 344 个.AD疾病靶点 145个,两者的交集靶点15 个.针对PPI网络进行拓扑分析,筛选得到4 个核心靶点,即白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)、CXC基序趋化因子配体8(C-X-C motif chemokine ligand 8,CXCL8)、丝裂原活化蛋白激酶1(mitogen-activated protein kinase 1,MAPK1).GO功能分析主要涉及对病毒、细菌、脂多糖的应答及细胞因子受体结合、转录因子结合等.KEGG通路55 条,主要涉及TNF信号通路、叉头框蛋白O(forkhead box protein O,FoxO)信号通路、低氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)信号通路等.分子对接表明核心成分与活性靶点具有较好的亲和性和结合能力.结论:运脾化湿清肺汤可能通过三甲氧基黄酮、陈皮素、孕烷醇酮等活性成分作用于IL-6、TNF、CXCL8、MAPK1 等靶点,调控TNF、FoxO、HIF-1 等信号通路从而达到治疗AD的目的.

目的 运用网络药理学方法筛选"土茯苓-金银花"药对治疗类风湿关节炎(RA)的有效成分和作用靶点,探究其主要成分-核心靶点-疾病的复杂网络关系.方法 通过中药系统药理学平台(TCMSP)收集"土茯苓-金银花"药对的活性成分及作用靶点;通过GeneCards及OMIM、Drugbank数据库收集RA的疾病相关基因,构建"核心成分-核心靶点-核心通路"网络并筛选出"土茯苓-金银花"药对治疗RA的核心靶点,然后进一步行蛋白互作网络分析(PPI)、GO生物功能注释、KEGG通路富集分析.结果 ①在TCMSP数据库初步提取土茯苓化学成分75种,金银花化学成分240种,经ADME筛选后共获得土茯苓15种,金银花23种活性成分,包括紫杉酚、槲皮素、山萘酚、香茅醇、豆甾醇等.土茯苓主要成分作用靶点基因252个,金银花主要成分作用靶点基因352个.②在GeneCards数据库、OMIM的两个数据库、Drugbank数据库检索得到671个RA靶点.③土茯苓、金银花与RA的共同靶点基因55个.PPI网络分析发现JUN、AKT1、IL-10、VEGFA、TNF等可能是"土茯苓-金银花"药对治疗RA的关键靶点.④在DAVID数据库提交基因序列,得到富集分析结果KEGG Pathway 96条信号通路,"土茯苓-金银花"药对治疗RA主要参与的信号通路包括TNF信号通路、Toll样受体信号通路、HIF-1信号通路、NOD样受体信号通路、破骨细胞分化、雌激素信号通路、T细胞受体信号通路等.GO富集分析包括生物过程(BP)355条结果,涉及RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控、一氧化氮生物合成过程的正调控、炎症反应、对脂多糖的反应、脂多糖介导的信号通路、平滑肌细胞增殖的正调控、血管生成、细胞对脂多糖的反应、血管新生的正调控、以DNA为模板的转录正调控等;细胞成分(CC)27条结果,分子功能(MF)50条结果,主要涉及酶结合、细胞因子活性、转录因子结合、相同的蛋白质结合、蛋白质结合、序列特异性DNA结合、类固醇激素受体活性、蛋白磷酸酶2A结合、转录激活子活性,RNA聚合酶Ⅱ核心启动子近端区域序列特异性结合、肿瘤坏死因子受体结合等.结论 "土茯苓-金银花"药对的主要活性成分通过TNF信号通路、Toll样受体信号通路、HIF-1信号通路、NOD样受体信号通路、破骨细胞分化、雌激素信号通路、T细胞受体信号通路等信号通过参与RA发病的炎症反应,从而发挥了缓解RA病情的临床作用.本研究初步探究了"土茯苓-金银花"药对治疗RA的作用靶点和作用通路,为进一步更深入地挖掘其治疗RA的作用机制奠定了基础.

基于生物信息大数据联合网络药理学分析方法及分子对接技术探究白花蛇舌草-土茯苓治疗肺腺癌的作用机制.从中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)中获得白花蛇舌草-土茯苓的化学成分和潜在治疗靶点,基于癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)、治疗靶标数据库(Therapeutic Target Database,TTD)、药物遗传学与药物基因组学知识库(Pharmacogenetics and Pharmacogenomics Knowledge Base,PharmGKB)、在线孟德尔人类遗传数据库(Online Mendelian Inheritance in Man,OMIM)、DrugBank、GeneCards获取肺腺癌相关基因.利用Cytoscape构建"药物成分-靶标"网络,筛选关键化合物.利用STRING建立蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,并通过Cytoscape-CytoNCA拓扑分析筛选核心靶点.通过R-clusterProfiler对靶基因进行基因本体(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)分析.最后,利用AutoDock对关键化合物与核心靶基因进行对接验证.结果 显示,从白花蛇舌草-土茯苓中共获得22个活性化合物和499个潜在的治疗靶点.通过6个数据平台共筛选出14332个肺腺癌相关靶点,其中,交叉靶点的数量为182个.从PPI核心网络中筛选出15个核心靶点.GO和KEGG分析结果显示相关靶基因在各种生物学反应过程、细胞功能方面富集显著(如对脂多糖的反应、核受体活性、配体激活的转录因子活性等),靶基因与非小细胞肺癌信号通路关系密切.根据分子对接验证的结果,薯蓣皂苷元、槲皮素、柚皮素、紫杉叶素、2-甲氧基-3-甲基-9,10-蒽醌、豆甾醇、β-谷甾醇能够与核心靶点紧密结合.白花蛇舌草-土茯苓可以通过多个靶点和信号通路干预肺腺癌,如非小细胞肺癌信号通路.中药相关活性成分与关键靶点的结合可能是产生治疗效果的机制之一.

目的 通过降低提取温度改善土茯苓Smilacis Glabrae Rhizoma提取物及其配方颗粒的溶化性.方法 分别采用回流提取、煮开后80℃水浴浸提、直接80℃水浴浸提、煮开后70℃水浴浸提、直接70℃水浴浸提5种方法制备土茯苓提取物并对各提取物的溶化性进行分析,同时考察5种提取方法对土茯苓提取物的特征图谱、多糖与淀粉含量、出膏率、落新妇苷含量及转移率的影响.结果 上述5种方法制备的提取物中不溶物含量分别为34.93％、26.67％、24.48％、29.65％、4.03％,与回流提取相比其余4种提取方法均能改善土茯苓提取物的溶化性,其中直接70℃水浴浸提对溶化性改善最明显.不同提取方法制备的土茯苓提取物的特征图谱无明显差异,表明其质量稳定.相比于回流提取,直接70℃水浴浸提的土茯苓提取物的淀粉含量降低了 11.74％;落新妇苷含量(38.6mg/g)及其转移率最高(60.95％).结论 采用70℃水浴浸提法可显著改善土茯苓配方颗粒的溶化性.