木姜叶柯Lithocarpus litseifolius(Hance)Chun.又名多穗石柯Lithocarpus polystachyus Rehd.,俗称甜茶,属于药食同源中药,集药、茶、食、糖多种用途于一体.木姜叶柯富含三叶苷、根皮苷、根皮素等二氢查尔酮类成分.本文综述了木姜叶柯及其主要成分三叶苷在调节糖脂代谢、抗炎、抗衰老与抗氧化应激、神经保护和保肝等药理作用方面的国内外研究进展,以期为甜茶木姜叶柯的后续研究与综合开发利用提供依据.

目的 克隆多穗柯的查耳酮异构酶(chalcone isomerase,CHI)基因,并了解其表达情况.方法 根据转录组测序结果,利用PCR扩增技术获取多穗柯CHI基因的cDNA全长,并对其进行生物信息学分析,采用qRT-PCR法检测CHI基因在多穗柯不同器官的表达量.结果 多穗柯CHI基因的cDNA全长为772 bp,开放阅读框长为696bp,编码231个氨基酸的蛋白.该蛋白不存在跨膜区域,定位于细胞质中.多穗柯CHI基因在不同部位均有表达,叶片的表达量最高,是根部最低量的9.75倍.结论 首次克隆获得多穗柯的CHI基因,明确该基因属于CHIⅡ型.且多穗柯CHI基因在各器官中的表达量具有显著差异.

目的 克隆多穗柯Lithocarpus polystachyus黄酮3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase,F3H)基因,了解其基因特征并初步探明其在各器官中的表达情况.方法 分别提取多穗柯叶片的总RNA及基因组DNA,根据转录组测序结果,设计特异性引物,PCR扩增得到多穗柯F3H基因的cDNA及DNA序列,测序后进行生物信息学分析,通过qRT-PCR法检测多穗柯F3H基因在不同器官中的表达情况.结果 多穗柯F3H基因cDNA全长1 340 bp,包含长1 092bp的开放阅读框,编码363个氨基酸的蛋白质,定位于细胞质中.qRT-PCR结果表明F3H基因在多穗柯各器官中均有表达,但表达量具有显著性差异(P＜0.05).结论 首次对多穗柯F3H基因进行了克隆和生物信息学分析,证实F3H基因在多穗柯不同器官中表达量差异显著,为多穗柯中黄酮类的次生代谢研究奠定了基础.

多穗石柯为Lithocarpus Polystachys (Wall.) Rehd壳斗科石柯属植物,以根、叶及果实入药,含黄酮类、三萜类、多酚类化合物等化学成分.味甘性平,功效为清热解毒、化痰、祛风、降压,主要用于湿热泻痢、肺热咳嗽、痈疽疮疡、皮肤瘙痒等.现代研究表明,多穗石柯具有抗氧化、降血糖、降血脂、抗菌、抗炎、抗过敏等药理作用.但总体上讲,目前对多稳石柯的研究不多.为进一步研究和开发多稳石柯,本文结合国内外研究进展对多穗石柯的化学成分及药理作用方面进行综述.

为探讨不同种源多穗柯叶表型性状变异规律,提高优异多穗柯资源的利用率,以11个不同种源30个多穗柯无性系为研究对象,分析6个叶表型特征和3个叶脉特征.结果表明:除叶长外,8个性状指标变异系数皆达到10％ 以上,且无性系间皆达到差异极显著,可见多穗柯叶表型特征和叶脉结构变异极丰富;性状指标与地理因子相关性分析表明,叶面积和叶宽由北向南逐渐减小,叶脉密度较稀,由东北向西南叶形逐渐狭长.平均气温越高,降水量越低,叶面积越小,叶脉密度越大.叶形偏长椭圆形;采用聚类分析可将30个无性系分为4类,其中ZJ5的叶面积和叶宽最大,长宽比和叶片厚度最小,且与其他无性系差异较大,在系统聚类分析中单独分为1类.TL3,TL5,JYS7和DB6的叶长较长,长宽比皆在4.00以上,为第2类.YJ3,YJ4,TL6和TL8叶面积较小,长宽比皆在4.00以上,为第3类.其余21个无性系为第4类.

目的 考察多穗石柯叶水提物及其主要成分对PC12细胞的增殖影响.方法 将对数生长期的PC12细胞接种于96孔板,多穗石柯叶水提物(0、25、50、75、100、200tμg/L)、根皮苷(0、25、50、75、100、200μM)、三叶苷(0、25、50、75、100、200μM)及茶多酚(0、25、50、75、100、200tμM)分别作用PC12细胞72 h后采用BrdU ELISA试剂盒检测PC12细胞的BrdU相对含量以反映其促增殖的作用.结果 75～ 200 μg/L的多穗石柯叶水提物和75～200 μM的三叶苷可显著增加PC12细胞的BrdU相对含量,而不同浓度的根皮苷及茶多酚对PC12细胞的增殖无影响.同时经75 ～ 200 μg/L的多穗石柯叶水提物作用的PC12细胞BrdU相对含量相比于经75～200μM的三叶苷作用的PC12细胞BrdU相对含量高.结论 多穗石柯叶水提物和三叶苷均可显著促进PC12细胞增殖,而根皮苷及茶多酚则无促增殖作用.说明多穗石柯叶水提物的促增殖作用可能与三叶苷有关,但其作用机制有待于进一步研究.

根皮苷是民间中药多穗石柯的主要活性成分之一.大量研究表明,根皮苷具有抗氧化、降血糖、抗炎、抗肿瘤、抗脑缺血等多种药理作用.该文结合国内外研究报道,综述近年来根皮苷药理作用及其可能的作用机制研究进展,以期为进一步研究根皮苷提供参考.

目的:以贵州罗甸野生多穗柯为原料,研究超声波辅助法对多穗柯根皮苷提取率的影响.方法:在单因素试验基础上采用正交试验研究提取时间、提取温度、料液比、超声波功率对根皮苷得率的影响.结果:较佳提取工艺条件为提取时间50 min、提取温度50℃、提取功率720 W、料液比1∶30,此提取工艺提取率为1.386％,RSD为0.726％.结论:该工艺稳定性好、重复性高,是一种高效提根皮苷的方法.

目的 克隆多穗柯Lithocarpus polystachyus的无色花青素还原酶(leucoanthocyanidin reductase,LAR)基因,并对其表达量与根皮苷含量的关系进行分析.方法 根据多穗柯转录组测序的结果(Unigene号:DN3071 1_c0_g1_j1),利用PCR法扩增获得多穗柯LAR基因的全长cDNA序列,进行生物信息学分析,采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)法检测LAR基因的表达量,使用UPLC法测定根皮苷的含量,应用SPSS 18.0软件分析LAR基因表达量与根皮苷含量间的相关关系.结果 多穗柯LAR基因的cDNA全长1053bp,包含一个完整的开放阅读框,编码350个氨基酸.该蛋白不存在跨膜区域,定位于细胞质中.多穗柯LAR蛋白属于PCBER_SDR_a家族,与栓皮栎LAR蛋白具有较高的相似性(95％),且亲缘关系最近.多穗柯的根皮苷含量与LAR基因的表达量呈正相关(P＜0.05)关系.结论 首次克隆得到多穗柯LAR基因,并证实多穗柯根皮苷含量与LAR基因的表达量呈正相关,为揭示多穗柯中根皮苷的生物合成机制奠定理论和技术基础.

目的 探讨多穗柯总黄酮(TFL)对四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤的保护作用及其机制.方法 小鼠随机均分为6组,正常对照组、模型对照组(6％ CCl4橄榄油溶液)、水飞蓟素组(水飞蓟素120 mg · kg-1)、TFL低、中、高剂量组(50,100,150 mg · kg-1).正常对照组、模型对照组灌胃等剂量0.9％氯化纳溶液,其余各组按剂量连续灌胃7 d,末次用药2 h后,按剂量5 mL · kg-1腹腔注射6％ CCl4橄榄油溶液建立急性肝损伤模型,造模6 h后收集血清和肝脏组织.测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平以及肝组织白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)水平,苏木精-伊红(HE)染色进行常规组织学观察,Western blotting法检测肝组织中含NLR家族Pyrin域蛋白3( NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、Caspase-1水平.结果 与模型对照组比较,多穗柯总黄酮可降低肝质量、肝指数(P＜0.05),下调ALT、AST活力(P＜0.05),降低肝组织IL-1β、IL-6、TNF-α 水平(P＜0.05),增加肝组织 SOD、GSH-Px 水平,降低 MDA 水平(P＜0.05),下调 NLRP3、ASC、Caspase-1 蛋白水平(P＜0.05),镜下观察显示肝组织损伤得到不同程度改善.结论 多穗柯总黄酮对CCl4诱导的急性肝细胞损伤的保护作用,与减轻氧化应激水平,降低炎症因子水平,调控ROS/NLRP3/IL-1β信号通路有关.