目的:探讨荧光定量法与G6PD/6PGD比值法在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）缺乏症诊断的临床价值及基因突变类型分析。方法:选择2018年6月至2021年3月就诊于上海市儿童医院疑似G6PD缺乏症的1 201例（男711例，女490例）患儿，采用荧光定量法、G6PD/6PGD比值法和多色熔解曲线分析法对酶活性、比值和基因突变类型进行检测。分析酶活性、比值与基因突变类型的关系，将荧光定量法和G6PD/6PGD比值法的结果与基因突变结果对比分析，采用受试者工作特征（ROC）曲线评价其诊断效能。结果:1 201份可疑标本中，检出163份（男135份，女28份），其中荧光定量法检出156例，检出率95.71%，G6PD/6PGD比值法检出140例，检出率85.89%。男性患儿酶活性及比值明显低于女性患儿，差异均具有统计学意义（ U=642.5、734.5， P均<0.001）。112例接受基因检测，检出92例，其中半合子突变74例，纯合突变1例，杂合突变15例，复合杂合突变2例。15例杂合突变中，荧光定量法检出11例，检出率73.33%，G6PD/6PGD比值法检出4例，检出率26.67%。基因共检出7个突变位点，所占比例分别为c.1388G>A型32.22%、c.1376G>T型30.00%、c.871G>A型13.33%、c.1024C>T型11.11%、c.95A>G型7.78%、c.487G>A型4.44%、c.392G>T型1.11%。c.1376G>T和c.1024C>T、c.487G>A酶活性差异有统计学意义（ P<0.001、0.015）；c.1024C>T和c.1388G>A、c.1376G>T、c.871G>A、c.95A>G比值差异均有统计学意义（ P=0.017、0.002、0.011、0.013）。ROC曲线分析荧光定量法敏感度100%，特异度95.65%，曲线下面积（AUC）0.972。G6PD/6PGD比值法敏感度100%，特异度94.57%，AUC 0.979。荧光定量法和G6PD/6PGD比值法联合检测时敏感度最高96.7%，特异度最高100%，AUC 0.992。 结论:与荧光定量法相比，G6PD/6PGD比值法可能无法有效检出女性杂合子；G6PD荧光定量法结合G6PD/6PGD比值法检测有利于减少漏诊，结合基因突变分析，可能提高G6PD患儿诊断率。

目的:分析昆明地区婴幼儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）缺乏症的基因突变特点。方法:选取2018年1月1日至2020年12月31日在昆明市出生的15 533例（男7 994例，女7 539例）婴幼儿，年龄5（4，9）d，采用荧光定量法、多色熔解曲线分析法（MMCA）和Sanger测序对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性和基因突变类型进行检测。采用微滴式数字PCR技术（ddPCR）对一例新发变异家系进行定量分析，确定家系成员体细胞突变嵌合比例，同时对新发变异进行蛋白结构模型分析和致病性预测。采用SPSS 26.0统计软件进行数据分析，不同性别间G6PD酶活性和基因突变阳性检出率采用χ 2检验，G6PD基因突变组间酶活性的比较采用单因素方差分析。 结果:15 533例婴幼儿中G6PD酶活性检出阳性143例（男129例，女14例），检出率为0.92%（143/15 533），男女检出率差异具有统计学意义（χ 2=96.76， P<0.001）。89例酶活性阳性患儿（男83例，女6例）接受了基因检测，MMCA法检出77例（男72例，女5例），12份阴性样本进一步行Sanger测序，检出突变6份，均为男性。83例基因突变者中半合子突变78例，纯合突变1例，杂合突变4例。共检出12种突变类型，以G6PD c.487G>A、c.1024C>T、c.1388G>A和c.1376G>T 4种突变类型最为常见，占全部突变类型的74.70%（62/83）。c.1376G>T的平均酶活性最低，与另外3种突变的平均酶活性相比，差异均有统计学意义（ P均<0.05）。检出一例G6PD c.242G>C新发变异男性患儿，预测为致病性变异。ddPCR证明患儿母亲为c.242G>C变异嵌合体，嵌合比例为6.66%。 结论:昆明地区G6PD缺乏症基因突变以c.487G>A为主，检出一例G6PD c.242G>C新发变异。ddPCR技术可辅助用于突变嵌合体比例检测。

目的:探讨贵阳地区新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症发病情况和基因突变特点。方法:选择2020年9月1日至2022年6月30日在贵阳市所有助产机构出生，并进行G6PD筛查的89 715例活产新生儿为研究对象。采集其足跟血滤纸干血斑标本(DBS)，采用荧光分析法定量初筛G6PD活性。对于G6PD≤27 U/dL的G6PD缺乏症初筛呈阳性新生儿，召回至贵阳市新生儿疾病筛查中心，采集空腹肘静脉血1～2 mL，采用G6PD/6-磷酸葡萄糖脱氢酶(6PGD)比值法与多色探针荧光熔解曲线(MMCA)法基因突变检测，进行新生儿G6PD缺乏症诊断。本研究经贵阳市妇幼保健院伦理委员会批准(科研伦理审查批件2021-56号)，并与新生儿监护人签订临床研究知情同意书。结果:本研究89 715例新生儿中，G6PD缺乏症初筛阳性率为1.40%(1 254/89 715)，其中男性新生儿的初筛阳性率为1.85%(888/47 983)，女性为0.88%(366/41 732)，男性新生儿G6PD缺乏症初筛阳性率显著高于女性，并且差异有统计学意义(χ2＝153.52，P<0.001)。这1 254例G6PD缺乏症初筛阳性新生儿的召回复查率为74.96%(940/1 254)。940例被召回复查新生儿中，被确诊为G6PD缺乏症者为895例，召回确诊率为95.21%(895/940)，其中男性确诊率为98.10%(673/686)，女性为87.40%(222/254)；经G6PD/6PGD比值法被确诊为G6PD缺乏症者为694例，召回确诊率为73.83%(694/940)，其中男性确诊率为82.51%(566/686)，显著高于女性的50.39%(128/254)，并且差异有统计学意义(χ2＝98.94，P<0.001)；经MMCA法基因突变检测被确诊为G6PD缺乏症者为846例，召回确诊率为90.00%(846/940)，其中男性确诊率为95.48%(655/686)，显著高于女性的75.20%(191/254)，差异有统计学意义(χ2＝84.74，P<0.001)。846例经基因突变检测确诊为G6PD缺乏症新生儿中，G6PD基因单一突变型为13种和复合杂合突变为6种，排名前4位G6PD基因热点突变类型依次为c.1024C>T(235例，占27.78%)，c.1388G>A(205例，占24.23%)，c.95A>G(163例，占19.27%)，c.1376G>T(152例，占17.97%)。结论:贵阳地区新生儿G6PD缺乏症初筛阳性者中，召回复查率较低。该地区G6PD缺乏症新生儿排名前4位的G6PD基因突变类型以c.1024C>T、c.1388G>A、c.95A>G、c.1376G>T为主。开展G6PD活性筛查及相关诊断检测，有利于新生儿G6PD缺乏症的早诊断、早治疗。

目的 为两对双方分别携带β珠蛋白基因CD41-42(—TCTT)和CD43(G→T)杂合突变的夫妇提供产前诊断,明确其胎儿的基因型.方法 应用反向斑点杂交法(两种试剂盒)、多色探针熔解曲线法和DNA序列分析法同时检测β珠蛋白基因的突变.结果 家系1胎儿3种方法的检测结果均显示其为CD43(G→T)突变杂合子;家系2胎儿多色探针熔解曲线结果和DNA序列分析结果均提示为CD41-42(—TCTT)和CD43(G→T)突变双重杂合子,而反向斑点杂交法两种试剂盒产生了不一致的结果,一种为CD41-42(—TCTT)和CD43(G→T)突变双重杂合子,而另一种为CD41-42(—TCTT)突变纯合子.结论 对携带β珠蛋白基因CD41-42(—TCTT)和CD43(G→T)突变的夫妇进行产前诊断应采用其他可避免误诊的手段,如直接测序等.

目的 应用多色探针熔解曲线法(multicolor melting curve analysis,MMCA),建立一种快速筛查葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD) 缺乏症杂合子的临床方法.方法 收集重庆地区2015年1月至2016年7月共429例(男性342例,女性87例) 疑似G6PD缺乏症的患者外周血,采用G6PD/6PGD定量比值法和MMCA法分别检测男性和女性G6PD酶活性和基因突变,以金标准Sanger测序来评价两种方法.同时收集重庆地区进行G6PD缺乏症新生儿疾病筛查的1 754份女性末梢血滤纸片,采用MMCA法筛查G6PD基因突变.结果 429例疑似病例中,G6PD/6PGD定量比值法诊断男性的灵敏度96. 8％、特异性100％,与Sanger测序法一致性好(Kappa = 0. 917,P＜0. 05);但女性的灵敏度仅10％,特异性100％,与Sanger测序法一致性差(Kappa = 0. 127,P＜0. 05) .MMCA法诊断男性的灵敏度95. 7％,特异性100％,与Sanger测序法一致性较好(Kappa = 0. 891,P＜0. 05);女性的灵敏度100％,特异性100％,与Sanger测序法结果完全吻合(Kappa = 1. 000,P＜0. 05) .1 754例女性中杂合子占1. 14％(20 /1 754), G6PD酶活性均正常.结论与传统的G6PD/6PGD定量比值法比较,MMCA法检测杂合子灵敏度更高,可用于G6PD缺乏症杂合子筛查,为一种简便、准确的诊断新方法.

目的 了解海南省黎族自治县地区葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)缺乏症发病情况和基因突变特点.方法 收集该地区2017年1-12月出生的新生儿干血片,采用荧光分析法进行G6PD酶活性筛查,对初筛阳性的干血片样本采用多色探针荧光PCR熔解曲线法(MMCA)进行基因突变分析.结果 共收集14 130例新生儿干血片,G6PD酶活性筛查共筛出1 059例阳性,初筛阳性率为7.49％,其中男性682例,女性377例,男性新生儿G6PD初筛阳性率9.13％,女性5.66％,男女初筛阳性率差异有统计学意义(P＜0.01).黎族新生儿初筛阳性率8.33％,汉族6.25％,不同民族比较差异有统计学意义(P＜0.01).通过MMCA法对1 059例初筛阳性干血片进行基因检测分析,共检出864例样本发生突变,突变率81.59％;男性突变率86.07％,女性73.47％,男女间差异有统计学意义(P＜0.01);黎族突变率83.26％,汉族77.71％,突变率差异有统计学意义(P=0.033).本次共检出11种G6PD基因单一突变型(c.1376 G＞T、c.1388 G＞A、c.95 A＞G、c.871 G＞A、c.519 C＞T、c.1024 G＞T、c.392G＞T、c.1360C＞T、c.517T＞C、c.592C＞T和c.86C＞T)和5种复合突变型,其中c.1376 G＞T复合c.871 G＞A突变、c.1376 G＞T复合c.517 T＞C突变和c.392 G＞T复合c.871G＞A突变在海南省尚属首次报道.结论 海南省黎族自治县地区是G6PD缺乏症高发区,黎族为高发人群,基因突变类型复杂多样,突变以c.1376G＞T、c.1388G＞A、c.95 A＞G和c.871 G＞A四种最为普遍.在G6PD缺乏症高发地区开展G6PD的活性筛查和基因检测,有利于G6PD缺乏症的确诊和防治,提高出生人口素质.

目的 探讨多色探针熔解曲线分析(MMCA)法检测湘潭地区葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症基因突变的性能,为临床诊断提供参考.方法 纳入2017年1月至2020年9月于该院进行G6PD缺乏症筛查的90221例新生儿,以其中454例同时进行G6PD酶活性法检测和基因检测[MMCA法、外显子基因测序(Sanger测序)法]的G6PD缺乏症初筛阳性新生儿作为研究对象,以Sanger测序法的检测结果为"金标准",对酶活性法和MMCA法进行方法学比较.结果 酶活性法诊断男性新生儿G6PD缺乏症的灵敏度为97.6％,特异度为100.0％;诊断女性新生儿G6PD缺乏症的灵敏度为59.5％,特异度为100.0％.酶活性法与Sanger测序法诊断男性新生儿G6PD缺乏症的结果一致性较好(Kappa=0.974,P<0.05),诊断女性新生儿G6PD缺乏症的结果一致性一般(Kappa=0.676,P<0.05).MMCA法诊断男性新生儿G6PD缺乏症的灵敏度为97.0％,特异度为100.0％;诊断女性新生儿G6PD缺乏症的灵敏度、特异度均为100.0％.MMCA法与San-ger测序法诊断男性新生儿G6PD缺乏症的结果一致性较好(Kappa=0.967,P<0.05),诊断女性新生儿G6PD缺乏症的结果完全吻合(Kappa=1.000,P<0.05).结论 与传统的酶活性法比较,MMCA法具有灵敏度、特异度高的优点,是一种快速、准确、适用于临床诊断G6PD缺乏症的方法.

目的 探讨多色探针熔解曲线分析法(multicolor melting curve analysis,MMCA)对5种抗结核药物的耐药性诊断效果,明确MMCA检测结核分枝杆菌耐药性的临床应用价值.方法 2021年4月-2022年5月选择在本院住院诊治的结核分枝杆菌阳性患者200例作为研究对象,取患者的痰液标本,分别给予传统结核分枝杆菌药敏实验(改良罗氏培养基法)和MMCA检测利福平、乙胺丁醇、链霉素、异烟肼、左氧氟沙星等5种抗结核药物的耐药性,对两种诊断方法结果不一致的样本进行基因测序验证,对比MMCA对5种抗结核药物的诊断效能.结果 以结核分枝杆菌改良罗氏培养基法作为耐药诊断的金标准,MMCA检测利福平、乙胺丁醇、链霉素、异烟肼、左氧氟沙星耐药的灵敏度分别为95.83％(46/48)、93.75％(15/16)、100.00％(15/15)、100.00％(20/20)、70.00％(7/10),组间比较具有统计学差异(P＜0.05),MMCA检测5种抗结核药物的特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确度组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).对MMCA与改良罗氏培养基法结果8例不一致的样本进行基因测序,与基因测序结果进行比较后发现,MMCA与基因测序结果符合率为75.00％(6/8).结论 MMCA在结核病患者耐药突变的检测中,对一线抗结核药物具有很高的诊断效能,对于二线抗结核药物左氧氟沙星的敏感度不足,因此在一线抗结核药物的检测上,MMCA技术具有良好的临床应用前景.