目的:探究脓毒症对血脑屏障通透性的影响。方法:采用盲肠结扎穿孔术建立脓毒症大鼠模型。根据干预时间随机（随机数字法）分组：假手术组、脓毒症1 d组、脓毒症4 d组、脓毒症7 d组。采用荧光素钠检测血脑屏障的通透性变化；采用Western blot和免疫荧光方法检测脑微血管内皮细胞紧密连接蛋白的表达变化。结果:和假手术组大鼠相比较，脓毒症组的大鼠呼吸急促，精神萎靡、反应迟钝，活动量少、进食饮水少，腹胀明显，排稀便。腹腔解剖可见肠系膜黏连，近端肠管扩张，盲肠结扎部位颜色暗红且表面有脓液渗出，整个腹腔可见血性渗出液。和假手术组大鼠相比较，脓毒症组的大鼠体质量下降，随着脓毒症的病程发展，大鼠体质量持续降低，脓毒症7 d组的大鼠体质量最低，且明显低于脓毒症4 d（ P < 0.05）、脓毒症1 d（ P < 0.05）以及假手术组（ P < 0.05）的大鼠。和假手术组大鼠相比较，盲肠结扎穿孔1 d后大鼠脑组织中的荧光素钠的渗漏显著增加（ P < 0.05）。随着脓毒症的病程发展，荧光素钠渗漏含量持续增加。脓毒症7 d的大鼠脑组织中的荧光素钠含量最高，并且明显高于脓毒症4 d、脓毒症1 d以及假手术组的大鼠（均 P < 0.05）。和假手术组大鼠相比较，盲肠结扎穿孔1 d后大鼠脑组织的脑微血管内皮细胞紧密连接蛋白Claudin-5、Occludin和ZO-1的蛋白表达量明显降低（均 P < 0.05）。随着脓毒症的病程发展，紧密连接蛋白的表达量持续降低。脓毒症7 d的大鼠脑组织中的紧密连接蛋白Claudin-5、Occludin、ZO-1的表达量最低，并且明显低于脓毒症4 d、脓毒症1 d以及假手术组的大鼠（均 P < 0.05）。 结论:脓毒症可诱导大鼠的血脑屏障通透性增加，并且脓毒症持续的时间越久，血脑屏障的通透性越高。

目的 观察体外冲击波疗法(ESWT)调节内皮细胞磷酸酶张力蛋白同源物(PTEN)的表达对糖尿病大鼠下肢血管病变的影响及其可能的机制.方法 将24只2月龄健康雄性SD大鼠随机分为3组:对照组(A组)、糖尿病血管病变组(B组)、糖尿病血管病变+ESWT治疗组(C组).B组和C组采用高脂高糖喂养+腹腔注射链脲佐菌素60 mg/kg建立糖尿病血管病变大鼠模型,C组在建模成功后1周(T1)、2周(T2)、3周(T3)、4周(T4)接受ESWT治疗.T4时通过超声测量大鼠股动脉血管病变区血流速度和血管内径.ESWT治疗结束后即刻处死大鼠取下肢股动脉及腓肠肌,在电镜下观察各组股动脉结构.Western blot检测股动脉PTEN、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3 K)和蛋白激酶B(Akt)的表达水平,实时荧光定量逆转录-PCR(qRT-PCR)检测PTEN mRNA的表达水平;免疫荧光检测腓肠肌CD31表达水平.结果 B、C组T4时股动脉收缩期峰值流速及舒张末期血流速度均明显低于A组(P<0.05),但C组高于B组(P<0.05).3组大鼠股动脉内径差异无统计学意义(P>0.05).B、C组PTEN表达水平明显低于A组(P<0.05),但C组高于B组(P<0.05).B组的PI3K、Akt表达水平均明显高于A组(P<0.05),C组低于B组(P<0.05).B、C组PTEN mRNA表达水平明显低于A组(P<0.05),但C组高于B组(P<0.05).电镜下观察到,ESWT治疗后,C组血管内皮细胞损伤较B组明显;B、C组CD31表达水平明显低于A组(P<0.05),但C组高于B组(P<0.05).结论 ESWT可通过上调糖尿病大鼠下肢动脉PTEN,下调PI3K和Akt,改善血管功能,提高糖尿病大鼠股动脉收缩期峰值流速,改善腓肠肌微血管密度.

目的 观察补阳还五汤对糖尿病下肢动脉硬化闭塞症大鼠腓肠肌的血管生成作用.方法 构建糖尿病下肢动脉硬化闭塞症大鼠模型,随机将大鼠分为空白对照组、模型组、模型+中药干预组(中药干预组),中药干预组以补阳还五汤灌胃,观察大鼠的一般情况和体质量变化,每周处死部分大鼠观察腓肠肌重量、腓肠肌血管生成情况和内皮祖细胞(EPCs)的数量.结果 与空白对照组比较,模型组精神状态、行动活跃性、体质量、腓肠肌重量、血小板内皮细胞黏附因子(CD31)、α平滑肌肌动蛋白(actin)荧光表达量、EPC细胞数量均显著下降(P<0.05,P<0.01S).与模型组比较,中药干预组随着治疗时间的增加,大鼠精神状态稍好,行动较活跃,血糖下降,体质量增加,腓肠肌的重量增加,CD31、α-actin荧光表达量均增加,微血管数目明显增多,管腔结构也相对完整,EPC细胞数量逐渐增加(P<0.05,P<0.01).结论 补阳还五汤能增加缺血下肢的EPC细胞的生成,促进缺血下肢的血管生成,从而改善糖尿病下肢动脉硬化闭塞症大鼠的症状.

目的 探讨富氢盐水对高压电烧伤大鼠肠系膜微血管白细胞流变行为的影响.方法 将180只SD大鼠随机分为高压电烧伤实验组、高压力烧伤富氢盐水治疗组、假高压电烧伤组,高压电烧伤罂粟碱治疗组.在伤后不同时间点,各组大鼠腹腔分别注射0.9%氯化钠注射液、富氢盐水、0.9%氯化钠注射液、罂粟碱.比较伤前及伤后各时相大鼠肠系膜微血管白细胞流变行为变化情况.结果 假高压电烧伤组于观察的各个时相的肠系膜微血管白细胞流变行为均无明显变化,比较差异无统计学意义(P>0.05).高压电烧伤实验组大鼠伤后各时相滚动白细胞数、白细胞黏附数、白细胞-内皮细胞接触时长均高于伤前15 min,比较差异有统计学意义(P<0.05);白细胞滚动速度则低于伤前,比较差异有统计学意义(P<0.05).高压力烧伤富氢盐水治疗组与高压电烧伤罂粟碱治疗组伤后各时相滚动白细胞数、白细胞黏附数、白细胞-内皮细胞接触时长均高于伤前15 m in,比较差异有统计学意义(P<0.05),但与高压电烧伤实验组相比,增长幅度较低;白细胞滚动速度则低于伤前,比较差异有统计学意义(P<0.05),与高压电烧伤实验组相比,降低幅度较低.结论 富氢盐水可有效减轻由于高压电烧伤造成的大鼠肠系膜微血管白细胞流变行为的改变,对大鼠肠系膜具有一定保护作用.

目的:探讨枸杞多糖 (LBP) 对小鼠结直肠癌肿瘤生长及血管形成机制的影响.方法:建立小鼠CT26结直肠癌肿瘤模型, LBP给药观察对模型小鼠肿瘤生长的抑制作用, 绘制肿瘤生长曲线;肿瘤组织切片, 免疫组织化学方法检测CD31表达, 观察肿瘤间质血管密度;大鼠动脉环实验观察LBP对血管形成的影响.体外实验QPCR检测LBP对脑组织特异性血管生成抑制因子1 (BAI1) 表达的影响, 同时检测LBP对结直肠癌细胞株 (CT26) 及人真皮微血管内皮细胞株 (HDMEC) 增殖的影响.结果:LBP用药组CT26结直肠癌小鼠肿瘤重量为 (0.31±0.04) g小于对照组 (0.63±0.06) g (P＜0.05);绘制肿瘤生长体积曲线, 发现LBP可抑制小鼠肿瘤的生长 (P＜0.05) .CD31染色显示LBP用药组小鼠肿瘤间质血管密度小于模型组 (P＜0.05) .LBP对大鼠动脉环血管形成具有明显抑制作用, 且与浓度有关.体外实验发现, 与对照组比较, LBP 500μg/m L及1 000μg/m L处理HDMEC后, BAI1表达上调 (P＜0.01);LBP药物浓度设定在0～1000μg/m L之间, 随着浓度的增加, LBP对小鼠结直肠癌CT26细胞及HDMEC细胞增殖均无明显的影响.结论:LBP对小鼠结直肠癌生长的抑制作用可能与抑制血管形成、上调BAI1表达有关, 但具体的作用机制有待进一步阐明.

目的:观察从肺论治法和从肠论治法对溃疡性结肠炎(UC)大鼠肺与结肠血管内皮细胞生长因子-A(VEGF-A)含量的影响.方法:采用家兔结肠黏膜组织致敏与三硝基苯磺酸-乙醇模型相结合的免疫复合法复制UC大鼠模型.从造模成功的40只大鼠及正常组大鼠中随机选出8只作为干预前(0周时间点)的模型组及正常组.剩余造模成功的32只大鼠随机分为模型组、西药组(柳氮磺胺吡啶)、黄芪桔梗汤组、黄芪黄连汤组,每组8只,另取8只正常大鼠为正常组,连续干预4周后,分别于0、4周时间点采用Western blot和Real time-PCR法测定肺与结肠组织VEGF-A蛋白及mRNA表达.结果:0周模型组大鼠肺和结肠组织中VEGF-A mRNA与正常组无差异,肺和结肠组织VEGF-A蛋白表达较正常组显著升高(P＜0.05).4周模型组大鼠肺组织中VEGF-A mRNA和蛋白表达与正常组比较,显著升高(P＜0.01),西药组和黄芪黄连汤组肺组织中VEGF-A mRNA和蛋白表达较之模型组显著下调(P＜0.01,P＜0.05);模型组和西药组大鼠结肠组织中VEGF-A mRNA及蛋白表达与正常组相比,显著升高(P＜0.01),黄芪桔梗汤组、黄芪黄连汤组VEGF-A mRNA及蛋白表达较模型组和西药组显著下调(P＜0.05,P＜0.01).结论:微血管内皮是启动及维持炎症的一种重要细胞成分,UC肺损伤的机制可能与异常的血管生成有关,从肺论治法和从肠论治法均能通过下调UC肺及结肠组织中过度表达的VEGF-A,减轻肺及结肠组织的炎性损伤.

目的 探讨大鼠肠微血管内皮细胞miRNAs对脂多糖(LPS)诱导的水通道蛋白1(AQP1)表达的影响.方法 用机械吹打法及胰蛋白酶消化法从大鼠空肠分离微血管内皮细胞,用免疫荧光染色鉴定细胞;用荧光实时定量PCR(RT-qPCR)检测AQP1和miRNAs的表达;miRNAs芯片分析结合在线软件筛选调控AQP1表达的miRNAs,瞬时转染miRNAs模拟体及对照序列进行进一步验证.结果 肠微血管内皮细胞vWF免疫荧光染色为阳性.用LPS(0、0.1、1和10 mg/L)处理细胞后,AQP1 mRNA表达水平随LPS浓度增加呈下降趋势,其中1和10 mg/L LPS处理细胞后AQP1 mRNA表达水平与对照组相比有明显差异(P<0.05和P<0.001);与对照组相比,LPS处理组有22个表达上调2倍以上的miRNAs及9个下调2倍以上的miRNAs;软件预测显示芯片结果中的miR-423-5p、miR-874-5p、miR-361-3p、miR-219a-5p、miR-27b-3p、miR-133b和miR-666可与AQP1启动子区互补配对;miR-874-5p、miR-361-3p、miR-133b和miR-666在LPS处理后的肠微血管内皮细胞中表达上调;转染miR-133b和miR-666模拟体后可使AQP1 mRNA表达水平下调.结论 LPS可通过上调miR-133b和miR-666表达水平,间接抑制AQP1的表达,继而影响肠黏膜通透性.

目的 探讨局部应用外源性热休克蛋白90α(以下简称HSP90α)功能基因“F-5”,对大鼠静脉淤血型皮瓣缺血再灌注损伤模型皮瓣成活率的影响.方法 通过携带pet15b-F-5重组质粒的构建、大肠杆菌细胞培养扩增,以及HSP90 α“F-5”基因表达蛋白的纯化,获得外源性HSP90α;以大鼠腹壁浅血管束为蒂设计轴型皮瓣.将大鼠随机分为3组(每组20只):A组为空白对照组;B组为HSP90α预处理组;C组为HSP90α治疗组.每组又分为2个亚组,根据再灌注时间点分为缺血6h亚组和缺血8h亚组.模型建立过程中采用激光多普勒血流仪检测皮瓣血流灌注量,术后每天观察皮瓣的颜色、皮纹、质地、毛发生长、毛细血管充盈试验、针刺出血情况等;比较3组皮瓣的成活率、病理组织学变化以及微血管密度等指标.结果 B组在静脉阻断过程中和再灌注后,皮瓣的血流灌注量较其他2组高;术后7d,A组皮瓣成活率为(19.3±3.8)％,B组为(85.6±17.6)％,C组为(78.9±20.5)％;B组皮瓣的成活率最高(P＜0.05).术后1、3、7、10、14 d观察,B组及C组皮瓣的炎性细胞浸润较A组明显减少,血管内较少有血栓形成,成纤维细胞及血管内皮细胞增殖显著,新生血管密度增加明显;且缺血6h亚组的参数均优于8h亚组.结论 建立轴型皮瓣静脉淤血型缺血再灌注损伤大鼠模型,将阻断静脉的时间控制在6h为宜;外源性HSP90α“F-5”表达蛋白可增加皮瓣血流再灌注量,降低细胞渗透,促进新血管形成,从而对静脉淤血型皮瓣缺血再灌注损伤有较好的治疗作用,而且提前干预的效果更优.

目的 探讨右美托咪定对脓毒症大鼠血管内皮屏障功能的保护作用.方法 采用盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)诱导大鼠脓毒症模型,将SD大鼠分成4组:假手术(Sham)组、脓毒症(sepsis,Sep)组、常规治疗(conventional treatment,CT)组、右美托咪定(Dex)组,观察肠系膜微血管静脉通透性、肺血管通透性的变化及存活率、存活时间的变化;离体取原代肺静脉内皮细胞,观察右美托咪定对内毒素刺激血管内皮细胞后的闭锁小带蛋白1(zonula occludes-1,ZO-1)表达和细胞跨膜电阻(transmembrane electrical resistance,TER)的影响.结果 与假手术组比较,脓毒症后大鼠肠系膜微血管和肺血管的通透性明显增加,存活率与存活时间明显降低(P＜0.01);常规治疗能够轻微降低脓毒症大鼠的血管通透性;右美托咪定可显著降低脓毒症大鼠肠系膜微血管和肺血管通透性(P＜0.01),提高脓毒症大鼠的存活率与存活时间(P＜0.05).LPS孵育可导致肺静脉内皮细胞间连接断裂、消失,ZO-1表达明显降低,TER明显降低(P＜0.01).结论 右美托咪定可明显改善脓毒症大鼠的血管内皮屏障功能,并进一步发挥对脓毒症大鼠的保护作用.

本文旨在观察线粒体通透性转换孔 (mitochondrial permeability transition pore,MPTP)抑制剂环孢素A(cyclosporinA,CsA)对脓毒症大鼠血管通透性的保护作用.通过在体采用盲肠结扎穿孔模拟脓毒症模型,观察CsA(1和5 mg·kg-1)对脓毒症大鼠肺脏、肾脏和肠道的血管通透性,肾脏、肠道的线粒体呼吸控制率(respiratory control ratio,RCR),以及存活时间的影响;通过离体采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激血管内皮细胞实验,观察CsA 对微血管渗漏、闭锁小带蛋白l (zonula occludes-1,ZO-1)免疫荧光和跨膜电阻(transendothelial electrical resistance,TER)的影响.动物福利和实验过程均遵循陆军军医大学动物伦理委员会的规定并已获批准.与假手术组比较,脓毒症大鼠肺脏、肾脏血管和肠道组织的通透性明显增加(P＜0.05);与常规治疗组比较,CsA可明显降低脓毒症大鼠肺脏、肾脏血管和肠道组织的通透性(P＜0.05或P＜0.01),延长动物存活时间,微循环实验结果也显示CsA可显著降低脓毒症大鼠肠系膜微静脉的通透性(P＜0.01).细胞水平研究发现,LPS刺激可显著增加血管内皮细胞通透性,包括跨膜电阻降低和ZO-1蛋白表达减弱(P＜0.05),而CsA可明显降低LPS刺激所引起的血管内皮细胞通透性的增加(P＜0.01).脓毒症大鼠肾、肠线粒体功能出现明显障碍,线粒体呼吸控制率降低;LPS刺激血管内皮细胞后使得MPTP开放明显增多,而CsA能显著抑制MPTP开放,改善线粒体功能.本研究发现CsA可能通过抑制MPTP的开放,从而保护线粒体功能并发挥了其对脓毒症大鼠血管通透性的保护作用,将为脓毒症血管渗漏治疗提供参考.