目的 探讨夹竹桃麻素(APO)对糖尿病白内障大鼠的改善作用并分析其可能机制.方法 实验研究.SPF级SD大鼠60 只,随机分为对照组、模型组、APO低剂量组(10 mg/kg)、APO中剂量组(20 mg/kg)、APO高剂量组(40 mg/kg)和阳性组(100 mg/kg二甲双胍).用一次性注射链脲菌素(STZ)法构建糖尿病白内障大鼠模型,建模成功后按组别给予不同药物处理.检测大鼠血糖值并测评晶状体混浊程度;HE染色观察晶状体病理学变化;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1 β(IL-1 β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)指标;Western Blot检测高迁移率族蛋白 1(HMGB1)、Toll样受体4(TLR4)和核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达水平.结果 模型组大鼠晶状体混浊,细胞肿胀、破裂、出现空泡,血糖值、MDA、IL-6、IL-1 β、TNF-α、HGMB1、TLR4、NF-κB蛋白表达水平升高,SOD和GSH-Px水平降低;与模型组相比,APO各组及阳性组大鼠晶状体混浊程度降低,晶状体病理症状改善,血糖值、MDA、IL-6、IL-1 β、TNF-α、HGMB1、TLR4、NF-κB蛋白表达水平有所下降,而SOD和GSH-Px水平则上升.结论 APO可能通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路的激活,改善糖尿病白内障大鼠氧化应激损伤和炎症水平.

目的:探讨青蒿琥酯诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的机制及活性氧簇(ROS)在青蒿琥酯诱导HepG2细胞凋亡中的作用.方法:采用MTT法观查青蒿琥酯对人肝癌HepG2细胞存活的影响,Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡形态的变化,流式细胞术检测HepG2细胞的凋亡率,DCFH-DA检测细胞凋亡过程中ROS的变化.Western blot检测细胞内凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3和细胞色素C(Cyt C)蛋白水平的变化.采用NADPH氧化酶抑制剂夹竹桃麻素(apocynin)预处理HepG2细胞,Western blot检测NADPH氧化酶亚基p47phox和p22phox蛋白表达水平,流式细胞术检测ROS变化.结果:与对照组相比,青蒿琥酯作用于HepG2细胞24 h后,细胞存活率明显减少(P<0.05);细胞核呈致密浓染色,细胞凋亡比例升高(P<0.05);ROS明显升高(P<0.05);Western blot结果显示,青蒿琥酯作用后细胞内Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调,Bax/Bcl-2蛋白表达比例升高,cleaved caspase-3和Cyt C蛋白水平升高.Apocynin预处理能降低青蒿琥酯给药组细胞内p47phox和p22phox蛋白表达及ROS的生成.结论:青蒿琥酯能诱导HepG2细胞凋亡,其凋亡过程可能与ROS的生成增加相关.

目的 探讨NADPH氧化酶抑制剂Apocynin对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)心肌纤维化的预防作用.方法 40只小鼠随机分成4组:对照组(CON)、Apocynin组、LPS组和LPS+ Apocynin组,每组10只.LPS组和LPS+ Apocynin组给予LPS 10 mg/kg,每周1次,连续4周;Apocynin组和LPS+ Apocynin组给予Apocynin 10 mg/kg,1次/d,连续4周.采用天狼星红染色评估心肌纤维化程度,RT-PCR检测Col Ⅰ al、ColⅢal、MMP2、MMP9 mRNA的表达,Western blot检测心肌gp91 phox和p67 phox的表达,DHE检测心肌活性氧生成.结果 小鼠LPS注射4周后出现心肌纤维化.与对照组比较,LPS组心肌间质内弥漫性纤维组织显著增多,胶原容积分数增加,心肌组织中胶原相关因子Col Ⅰ a1、ColⅢa1、MMP2、MMP9 mRNA表达明显增加,心肌gp91 phox和p67 phox的表达增加,ROS生成增加(P＜0.05).与LPS组比较,Apocynin干预可抑制上述指标的增加(P＜0.05).结论 Apocynin能预防LPS诱导小鼠心肌纤维化,其效应可能与抑制心肌gp91phox和p67phox过表达有关.

目的 研究螺环内酯型对映-贝壳杉烷型二萜rabdosin B(RB)诱导HL-60向成熟粒细胞分化的特征及机制.方法 采用台盼蓝染色、吉姆萨染色、硝基四氮唑蓝(NBT)还原力测定及流式细胞术检测RB对HL-60细胞增殖、细胞周期、NBT还原力、细胞吞噬及细胞表面抗原CD11b表达的影响.结果 RB在1.0、3.0、5.0 μmol/L下抑制HL-60细胞增殖,引起HL-60细胞Go/G1期阻滞,增加HL-60细胞肾形核和分叶核细胞比率,并伴随细胞NBT还原力和吞噬能力显著增强以及CD11b阳性细胞率明显上升.进一步检测显示,活性氧(ROS)清除剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC,300 μmol/L)及NADPH氧化酶抑制剂夹竹桃麻素(APO,100 μmol/L)和二联苯碘锚(DPI,0.1 μmol/L)不仅可显著抑制RB诱导的细胞内ROS升高,并且可显著抑制RB诱导的HL-60细胞分化的各项特征指标的改变.结论 RB可通过上调HL-60细胞NADPH氧化酶活性,升高胞内ROS浓度,诱导HL-60细胞向成熟粒细胞分化.

[目的]进一步探索醛固酮对循环中内皮祖细胞(EPC)功能的影响及其分子机制有待.[方法]抽取健康志愿者外周血分离培养EPC,研究浓度梯度醛固酮干预(0,10,100,1000 nmol/L)对EPC体外迁移、黏附功能的影响.建立裸鼠颈动脉内皮拉脱损伤模型,在体研究醛固酮干预对EPC介导的血管内皮修复作用的影响.应用二氯二氢荧光素二醋酸酯(DCF)荧光探针研究醛固酮干预对EPC内活性氧簇(ROS)生成的影响.分别采用盐皮质激素受体(MR)拮抗剂—螺内酯、NADPH氧化酶阻断剂—夹竹桃麻素阻断EPC的MR和NADPH氧化酶,研究醛固酮诱导氧化应激损伤EPC血管内皮修复功能的分子信号通路.[结果]醛固酮干预明显抑制EPC体外迁移、黏附功能,损伤其介导的在体血管内皮修复能力.醛固酮干预导致EPC的ROS生成明显升高.螺内酯、夹竹桃麻素干预可以减少醛固酮诱导的ROS生成,并且可以对抗醛固酮损伤EPC功能.[结论]醛固酮通过MR激活NADPH氧化酶诱导氧化应激损伤EPC介导的血管内皮修复功能.

目的:分析多榔菊挥发油的化学成分,并初步考察多榔菊挥发油对DNA氧化损伤的保护作用.方法:采用水蒸气蒸馏法提取多榔菊挥发油,基于GC-MS法分析挥发油的化学成分,通过·OH诱导DNA氧化损伤并运用紫外-可见分光光度法测定多榔菊挥发油对DNA氧化损伤的保护作用.结果:检测到多榔菊挥发油中的20种化学成分,初步鉴定了12种化合物,占总挥发性成分97.29％,其化学成分主要为2′-羟基-4′-甲氧基苯乙酮异丙醚(70.26％)、4-(2-羟乙氧基)苯甲酸烯丙酯(18.23％)、油酸(1.98％)、棕榈酸乙酯(1.67％)、肉豆蔻酸(1.42％)、棕榈酸(1.11％)、癸酸(0.55％)和夹竹桃麻素(0.38％)等;体外抗DNA氧化损伤试验表明,多榔菊挥发油具有抑制DNA氧化损伤作用,当浓度达到8μg·ml-1时具有最佳保护作用.结论:结果表明多榔菊挥发油中主要含酮类,酯类和酸类成分,并具有较好的体外抑制DNA氧化损伤的能力.

目的 NOD样受体可促发炎症反应,夹竹桃麻素(apocynin)和二苯基碘鎓(DPI)均为氧化酶抑制剂.本研究观察在缺血性急性肾损伤中抑制氧化应激产生是否能通过NOD1信号通路减轻肾间质炎症反应与细胞凋亡.方法 将雄性Wistar大鼠随机分为4组:假手术(Sham)组、肾脏缺血再灌注(I/R)组、I/R+夹竹桃麻素(apocynin)组、I/R+二苯基碘鎓(DPI)组.通过Western印记法分别对肾组织核苷酸结合寡聚域样受体1(NOD1)、半胱天冬酶(caspase-1)及细胞核因子-κB(NF-κB)蛋白的表达进行检测;实时定量PCR法对NOD1 mRNA的表达进行检测;HE染色法观察肾脏组织学改变;免疫组织化学法检测肾组织肿瘤坏死因子(TNF-α)的表达;TUNEL法检测肾组织细胞凋亡.采用SPSS 22.0统计软包对实验数据进行统计学处理.结果 与Sham组比较,I/R组大鼠肾组织NOD1、caspase-1、NF-κB、TNF-α蛋白表达增加(t=16.81,t=7.28,t=11.08,t=10.11;P＜0.05);NOD1 mRNA表达增加(t=-7.93,P＜0.05);HE染色表现为急性肾小管坏死,肾小管损伤评分明显增加(t=-11.0,P＜0.05);TUNEL染色显示缺血区凋亡细胞数目增加(t=-18.38,P＜0.05).与I/R组比较,I/R+apocynin组的NOD1、caspase-1、NF-κB、TNF-α蛋白表达减少(t=-10.9,t=-7.6,t=-4.9,t=-9.7;P＜0.05);NOD1 mRNA表达减少(t=8.49,P＜0.05);HE染色后者较前者急性肾小管坏死减轻,肾小管损伤评分减低(t=-12,P＜0.05);TUNEL染色显示缺血区凋亡细胞数目减少(t=-11.3,P＜0.05).与I/R组比较,I/R+ DPI组的NOD1、caspase-1、NF-κB、TNF-α蛋白表达减少(t=-11.4,t=-6.8,t=-5.4,t=-10.6,P＜0.05);NOD1 mRNA表达减少(t=7.5,P＜ 0.05);HE染色后者较前者急性肾小管坏死减轻,肾小管损伤评分减低(t=-11,P＜0.05);TUNEL染色显示缺血区凋亡细胞数目减少(t=-10.8,P＜0.05).结论 抑制氧化应激可阻断NOD1样受体依赖的炎症途径与细胞凋亡,从而减轻肾缺血再灌注损伤.

目的 研究白细胞介素-1受体相关激酶M(interleukin-1 receptor-associated kinase M, IRAK-M)是否调控p22phox介导脂多糖(lipopolysaccharides, LPS)诱导的巨噬细胞呼吸爆发. 方法 分离、培养小鼠腹腔巨噬细胞,细胞贴壁后分为内毒素耐受(endotoxin tolerance, ET)组和对照组(NC组). ET组预先10 μg/L LPS刺激2 h后,予100 μg/L LPS再刺激,NC组不作预先处理,直接100 μg/L LPS刺激,3 h后收集上清液,ELISA法检测TNF-α和IL-6水平,试剂盒检测过氧化氢(H2O2)、超氧阴离子(O2-)水平;细胞裂解后提取蛋白,Western blot法检测IRAK-M和p22phox蛋白表达.采用IRAK-M 小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)干扰IRAK-M,分组为:LPS刺激组(NC-control组)、干扰IRAK-M+LPS刺激组(NC-si-IRAK-M组)、内毒素耐受组(ET-control组)和干扰IRAK-M+内毒素耐受组(ET-si-IRAK-M组),PCR检测干扰效率并再次检测IRAK-M和p22phox的蛋白表达.IRAK-M干扰成功后,分组为:二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide, DMSO)+内毒素耐受组(control-placebo组)、夹竹桃麻素(apocynin)+内毒素耐受组(control-apocynin组)、DMSO+干扰IRAK-M+内毒素耐受组(si-IRAK-M-placebo组)和干扰IRAK-M+apocynin+内毒素耐受组(si-IRAK-M-apocynin组),采用apocynin抑制p22phox,再次取上清液检测TNF-α、IL-6以及H2O2、O2-水平. 结果 与NC组比较,ET组TNF-α、IL-6水平和H2O2、O2-水平均降低,p22phox表达水平降低,而IRAK-M表达水平升高(P<0.05);干扰IRAK-M后,与ET-control组比较,ET-si-IRAK-M组蛋白水平明显降低,p22phox的蛋白水平明显升高(P<0.05);干扰IRAK-M并抑制p22phox后,与si-IRAK-M-placebo组比较,si-IRAK-M-apocynin组TNF-α、IL-6和H2O2、O2-的水平明显降低(P<0.05). 结论 IRAK-M通过抑制p22phox对内毒素诱导的小鼠巨噬细胞呼吸爆发产生负向调控作用.

目的 探讨还原型辅酶Ⅱ氧化酶(NADPH oxidase,NOX2)抑制剂夹竹桃麻素(Apocynin)对急性坏死性胰腺炎(acute necrotic pancreatitis,ANP)模型大鼠肾损伤的保护作用.方法 30只Wistar大鼠随机分为3组:假手术组(SO组)、急性坏死性胰腺炎组(ANP组)、Apocynin治疗组(APO组),每组各10只大鼠.ANP组采用逆行胆胰管注射牛磺胆酸钠溶液1 ml/kg(STC)制备ANP模型.APO组在造模前30 min股静脉注射Apocynin(50 mg/kg),其余同ANP组.SO组开腹后仅翻动十二指肠和胰腺.造模后12 h处死大鼠,下腔静脉采血,留取各组大鼠肾组织以4％多聚甲醛固定.全自动生化仪检测血清淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LIPA)、肌酐(Cr)、尿素(BUN)水平,肾脏组织固定行HE染色,光学显微镜下观察肾脏病理改变,免疫组化及免疫荧光法检测肾脏组织半胱天冬酶-3(Caspase-3)、核转录因子-KB(NF-KB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、肠黏膜髓过氧化酶(MPO)水平.结果 ①ANP组大鼠血清AMY、LIP、Cr、BUN水平及组织病理改变较SO组明显升高(P＜0.05),应用Apocynin后降低(P＜0.05).②ANP组大鼠Caspase-3、NF-KB、TNF-α表达水平较SO组升高(P＜0.05),应用Apocynin后有所降低(P＜0.05).③ANP组大鼠髓过氧化酶(MPO)表达水平较SO组升高(P＜0.05),应用Apocynin后有所降低(P＜0.05).结论 NOX2抑制剂Apocynin可减轻ANP模型大鼠肾脏损伤.

目的 探讨夹竹桃麻素(APO)对兔左心房肌细胞内向整流钾电流(IK1)的保护作用.方法 运用低浓度(50 μmol/L)的过氧化氢(H2O2)建立氧化应激模型.应用膜片钳全细胞技术,探讨APO(100 μmol/L)对兔左心房肌细胞IK1及动作电位时程(APD)氧化应激损伤的保护作用.Western blot检测各组兔左心房中Kir2.1蛋白的表达.反转录聚合酶联反应(RT-PCR)检测兔左心房中的KCNJ2 mRNA表达.结果 与对照组比较,低浓度H2 O2(50μmol/L)组IK1峰值从(-182.2±15.6)pA/pF下降到(-119.3 ±8.9)pA/pF(P ＜0.05),APO(100 μmol/L)组IK1峰值为(-175.3±15.2)pA/pF无差异;与H2O2组比较,H2O2(50 μmol/L)+APO(100 μmol/L)组IK1峰值恢复到(-160.5±13.5)pA/pF(P ＜0.05);APO使由于H2O2处理后减小的静息膜电位(RMP)绝对值及缩短的90％的APD(APD90)得以恢复;与对照组相比,H2O2组Kir2.1蛋白表达下降(P＜0.05);与H2 O2组相比,H2O2+ APO组Kir2.1蛋白表达明显恢复(P＜0.05);与对照组相比,H2O2组KCNJ2 mRNA表达下降(P＜0.05);与H2O2组相比APO+ H2O2组KCNJ2 mRNA表达恢复(P＜0.05).结论 APO对兔左心房肌细胞IK1具有保护作用.