[目的]为探究捕食线虫真菌少孢节丛孢菌几丁质诱导过程中分泌蛋白AO-492 的生物学功能.[方法]对少孢节丛孢菌几丁质酶AO-492 主要结构域编码区进行基因克隆及分子特征分析,并在毕赤酵母中进行表达.利用镍柱亲和层析法纯化重组蛋白ReAO-Z492,采用NAG检测法分析了该重组蛋白在不同温度、pH及金属离子条件下的酶学活性,并将其作用于秀丽隐杆线虫及虫卵分析其生物学功能.[结果]几丁质酶AO-492 有信号肽,无跨膜结构域,含有两个几丁质结合结构域和一个糖苷水解酶18 家族结构域,并含有糖苷水解酶 18 家族几丁质酶高度保守的底物结合位点-SVGGWT-和水解酶活性位点-FDGGDLDWE-,含有典型的TIM桶形分子结构.系统进化分析显示,该蛋白与坚粘孢单顶孢几丁质酶(EPS35099.1)的亲缘关系相对最近.SDS-PAGE和Western Blot分析表明,ReAO-Z492 分子量约为 59 kD,可与小鼠抗少孢节丛孢菌多克隆抗体发生特异性反应.ReAO-Z492 最适温度为 40℃,最适pH为 7.0;Mg2+对其酶活有促进作用,而Ag+、Cu2+、Fe3+和Zn2+有抑制作用.ReAO-Z492 对秀丽隐杆线虫体壁及其虫卵卵壳有较强的降解活性.[结论]少孢节丛孢菌几丁质酶 AO-492对秀丽隐杆线虫及虫卵具有较强的降解作用.

背景:随着我国人口的老龄化,老年人的健康保健备受关注.目的:探讨增龄对肠道菌群结构的影响,以期通过调节肠道微生态提升老年人健康水平.方法:收集30例健康老年人(60～80岁)和10例健康青年人(18～40岁)的粪便样本,采用高通量测序技术测定所有粪便细菌的16S rRNA基因V3、V4区序列,使用MiSeq 16S宏基因组APP和Qimme软件分析菌群物种分类、物种多样性指数、样本组间显著性差异和各组生物学标志物.结果:老年健康组与青年健康组肠道菌群OTU均数接近,物种多样性相似(P>0.05).Metastats分析显示,在菌门水平上,两组间优势菌门拟杆菌门(Bacteroidetes)、厚壁菌门(Firmicutes)和变形菌门(Proteobacteria)差异均无统计学意义(P>0.05).在菌属水平上,两组间共有20余种菌属差异有统计学意义(P<0.05).老年健康组八叠球菌属(Sarcina)、厌氧支原体属(Anaeroplasma)、甲基杆菌属(Methylobacterium)、丛毛单胞菌属(Comamonas)、Olsenella、Rheinheimera、Terrisporobacter、 食酸菌属(Acidovorax)、 红蝽菌科(Coriobacteriaceae_UCG-003)、 粪芽孢菌属(Coprobacillus)、Gelria、Aquabacterium、氨基酸球菌属(Acidaminococcus)、Caldicoprobacter、肠杆菌属(Enterorhabdus)、Turicibacter丰度显著增高,青年健康组厌氧乙酸属(Acetanaerobacterium)、漫游球菌属(Vagococcus)、瘤胃菌科(Ruminococcaceae_UCG-009)、草酸杆菌属(Oxalobacter)、粪球菌属_2(Coprococcus_2)丰度显著增高.LEfSe分析显示,老年健康组生物学标志物富集于食酸菌属、缠结优杆菌(Eubacterium_nodatum_group)、梭菌科_1(Clostridiaceae_1)、丛毛单胞菌科(Comamonadaceae),青年健康组则富集于普氏菌属_2(Prevotella_2)、罗氏菌属(Roseburia)、厌氧乙酸属.结论:随着年龄的增长,肠道菌群结构和功能发生一定程度的改变.老年人产丁酸盐细菌明显减少,同时机会致病菌增多.

[背景]丝氨酸蛋白酶在木霉菌生物防治过程中发挥重要作用.[目的]研究绿木霉丝氨酸蛋白酶S8/S53超家族基因信息及其生物学功能,进而为该蛋白酶生防制剂的开发及基因改造提供理论支持.[方法]通过生物信息学分析方法,从绿木霉Gv29-8基因组中鉴定出23个丝氨酸蛋白酶基因,以少孢节丛孢菌ATCC 24927基因组中鉴定的4个丝氨酸蛋白酶基因作为对照,对这27个丝氨酸蛋白酶基因的特性、蛋白结构、进化地位、功能等进行预测分析.[结果]27个基因结构差异较大,编码的蛋白具有典型的丝氨酸蛋白酶催化三联体结构,属于S8/S53超家族,分为6个亚家族,同一亚家族的蛋白酶保守区长度相近,相似性较高,催化残基附近序列比较保守.系统进化分析显示,同一亚家族丝氨酸蛋白酶聚为一类.[结论]绿木霉和少孢节丛孢菌的部分丝氨酸蛋白酶基因在结构和蛋白性质上相似性强,亲缘关系较近,均属于S8 PCSK9_ProteinaseK like亚家族,推测绿木霉与少孢节丛孢菌该亚家族的丝氨酸蛋白酶具有相似的功能,可抑制植物病原真菌和降解线虫体壁.

以捕食线虫真菌少孢节丛孢Arthrobotrys oligospora YMF 1.03170为研究材料,通过优化sgRNA表达驱动体系tRNAGly,构建CRISPR/Cas9基因编辑系统,成功获得基因定点编辑菌株.将该CRISPR/Cas9系统与同源重组相结合,可精确地对两个目的 氨基酸编码基因同时进行定点置换.结合代谢图谱及前体化合物饲喂实验,发现6-甲基水杨酸合酶编码蛋白新的活性位点Arg17、Arg18、His33和His34.本研究将CRISPR/Cas9基因编辑系统应用在少孢节丛孢中,并成功建立基因编辑精细体系,为快速构建少孢节丛孢的遗传转化体系和研究该菌的基因功能提供有效方法.

双孢蘑菇'福蘑58'是W2000单孢分离筛选的新品种.菌落形态为贴生型,菌丝在10-32℃下均能生长,最适生长温度24-28℃.结菇温度10-22℃,最适结菇温度14-20℃.子实体单生为主,丛生少,较结实,不易开伞,菌盖扁半球形,表面光滑,颜色较白,直径3.5-5.0cm,高度2.4-2.8cm.在适宜栽培条件下,平均单产比亲本菌株W2000提高10％-15％,鲜菇质量与W2000相当,比W192提升明显,成品菇比例较高,品质优良,适合鲜销市场及罐头加工.该品种可用于周年工厂化、设施化及季节性农法栽培.

捕食线虫真菌少孢节丛孢Arthrobotrys oligospora是子囊菌中的一个食肉性丝状真菌,其菌丝体可变态为各种结构精巧的捕食器官用于捕食线虫,在生物防治和进化上极具研究潜力.线粒体基因细胞色素c氧化酶亚基Ⅰ基因(COX1)在真菌物种鉴定中的效果饱受争议.本研究对A.oligospora的不同单孢培养的菌株进行了COX1基因的扩增和比较研究,力求探究各代菌株的异质性变化程度和范围,了解其产生的原因.结果表明,SNPs在不同单孢代系和家系之间、同一代系和家系内部均稳定存在,但代系间的遗传变异大于家系间的遗传变异,各代系未呈现独特的遗传结构.随着代数的增加,核酸多态性的变化与F1代趋于一致,大部分独特的等位基因型出现在F3代,说明该种COX1基因可能还有大量潜在的新基因型有待发现.重组分析显示,多个SNP位点间发生了频繁的重组事件,说明线粒体异质性在群体内稳定存在,进一步分析发现基因重组和CQX1基因多拷贝可能是造成异质性的原因.本研究为进一步揭示CQX1基因在捕食线虫丝孢菌进化上的作用,以及评估线粒体基因在该类真菌分子鉴定中的效果提供了科学依据.