目的:了解复旦大学附属儿科医院儿童重症监护病房(PICU)2016至2020年儿童细菌感染及耐药监测的特点、变迁情况。方法:菌株来源于2016年1月1日至2020年12月31日复旦大学附属儿科医院PICU。细菌抗生素敏感性试验按照CHINET统一监测方案进行，采用自动化仪器法或KB纸片扩散法，结果判读按照2020年美国临床实验室标准化委员会(CLSI)标准判读。结果:(1)菌株分布：2016至2020年本中心共监测细菌2 551株，分布前3位均为革兰阴性菌，其中洋葱霍尔德菌呈现曲折下降趋势(13.45%降至1.18%)，而肺炎克雷伯菌呈现上升趋势(6.05%升至10.61%)。感染部位以呼吸系统最常见，但分布菌株数量逐年递减，血液系统分布菌株数量逐年递增。呼吸系统感染以鲍曼不动杆菌；血液系统感染2016及2017年最常见细菌为表皮葡萄球菌，2018至2020年为木糖氧化无色杆菌最为常见；泌尿系统感染最常见细菌为屎肠球菌。(2)耐药情况：鲍曼不动杆菌对阿米卡星、庆大霉素、头孢吡肟、头孢他啶具有较高耐药率，历年变化不明显，对头孢哌酮舒巴坦耐药率逐步降低，对亚胺培南及美罗培南耐药率呈现曲折上升趋势。鲍曼不动杆菌及铜绿假单胞菌对左氧氟沙星的耐药率一直处于较低水平，在2020年均出现了高耐药率。大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌对于β-内酰胺类抗生素仍有较高的耐药率，两者对左氧氟沙星的耐药率呈下降趋势。大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌对亚胺培南耐药率呈下降趋势，对美罗培南耐药率呈上升趋势。屎肠球菌对左氧氟沙星的耐药率呈下降趋势，对多肽类抗生素一直具有较高敏感率。表皮葡萄球菌及金黄色葡萄球菌对四环素类抗生素目前均无耐药性，对氨基糖苷类抗生素，如庆大霉素的耐药率不断下降。结论:PICU细菌感染分布上呈现呼吸道感染、革兰阴性菌感染为主的特点。碳青霉烯耐药肠杆菌、肠球菌以及葡萄球菌的耐药问题日趋严重。

为研究檀香NDH脱氢酶基因的功能和调控机制,该文以檀香心材为材料,利用RACE技术克隆SaNDH6基因的全长序列,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术分析其组织和激素处理后的表达模式,在拟南芥原生质体观测其亚细胞定位,利用PlantCARE分析SaNDH6起始密码子ATG上游2 kb的启动子序列,同时运用PlantRegMap预测可能与其结合的转录因子.结果表明:(1)SaNDH6编码303个氨基酸,为疏水蛋白,亚细胞定位于叶绿体.(2)进化树分析表明,檀香SaNDH6与木本植物NDH6进化关系较近.(3)PlantCARE分析发现,SaNDH6启动子中除含有ACE、AE-box、Box 4、G-Box和GT 1-motif等大量光响应元件外,同时还有茉莉酸甲酯(MeJA)反应元件CGTCA-motif和TGACG-motif,赤霉素(GA3)响应元件P-box,以及防御和胁迫响应元件TC-rich repeats等.(4)PlantRegMap分析发现,有76个转录因子可能与SaNDH6启动子结合,其中ERF家族最多,达40个.(5)SaNDH6在檀香的根、心材、叶片和愈伤组织中均有表达,其中在叶片中的表达量较高;用1×10-4 mol·L-1的MeJA和GA3分别处理檀香愈伤组织后,与处理前(0 h)相比,SaNDH6的表达均在3 h后显著升高.综上结果表明,檀香SaNDH6为核基因编码的蛋白,受光和激素等诱导表达,SaNDH6可能参与檀香逆境胁迫反应的过程.

土壤微生物组是土壤健康的关键性评价指标,前期的研究表明中药渣有机肥能够提高栽培中药材的产量和质量,但是中药渣有机肥对于土壤微生物组的影响相关的报道很少.基于此该研究在评价中药渣有机肥对栽培丹参产量和质量影响的基础上,采用宏基因组测序技术研究中药渣有机肥对栽培丹参根际微生物组群落以及功能的影响.实验结果表明①施用中药渣有机肥促进了丹参生长以及有效成分的积累,其中丹参地上干重、地下干重、地上鲜重、地下鲜重的提高幅度为371.4％、288.3％、313.4％、151.9％;迷迭香酸和丹酚酸B的提高幅度为887.0％、183.0％.②施用中药渣有机肥显著改变了栽培丹参根际细菌和真菌群落结构,微生物的群落组成具有显著性的区别.③施用中药渣有机肥能够显著提高多亚硝化螺菌 Nitrosospira multiformis、枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis、产酶溶杆菌 Lysobacter enzymogenes 以及木霉菌 Trichoderma 等土壤有益菌的相对丰度.④KEGG功能预测分析表明,施加有机肥后的土壤环境中更容易富集与代谢相关的微生物;施加中药渣有机肥后还可增加与硝化作用、反硝化作用相关的功能基因的丰度.该研究结果为今后中药渣有机肥在中药材栽培中的应用提供指导,丰富了中药材绿色栽培技术的内容.

纤维素是由 β-1,4 糖苷键链接而成的葡萄糖单体聚合物,广泛分布于自然界,是一类易获取且廉价的可再生资源.自然界含纤维素材料的利用和处理是目前亟待解决的问题,筛选产纤维素酶的优良菌株并实现纤维素的有效利用具有重要意义.利用纤维素酶降解纤维素是绿色、高效和可持续的利用方式,广泛应用于工业和农业领域(养殖、能源、纺织等).因此,实现高效低成本的纤维素酶生产成为研究和发展的目标.木霉属真菌是重要的纤维素酶产生菌,具有产酶量大、酶系全和酶活性高等优点,分泌的胞外酶易于工业生产中的分离提纯.本研究以课题组前期积累和保存的25种木霉150个菌株为材料,通过刚果红平板法筛选、滤纸酶活测定和天然纤维素降解等测试,筛选出 14 株产纤维素酶能力较强的菌株(优于对照菌株里氏木霉QM9414),从中选取 3 株进行最佳产酶条件探索,如接种量、吐温80添加量、发酵培养基pH值等.初步测试结果表明,贵州木霉菌株8705在20℃条件下、摇瓶发酵9 d、在优化后的发酵培养基中产酶效果最佳,其上清液酶活可达到6.63 IU/mL.通过优化发酵温度、发酵时间和培养基成分配比等发酵条件,为资源利用打下物质基础并提供理论依据.

目的:探究内生菌深绿木霉对宿主植物朝鲜淫羊藿生长及药效成分含量的影响.方法:以朝鲜淫羊藿为试验材料,采用大田试验,设置对照组、商品菌组和S6 菌组,商品菌组和S6 菌组分别浇灌 200 mL浓度 1.0×108个/mL的菌悬液,对照组浇灌等量PDB培养基,15 d浇灌一次并测定植物生物量、光合作用参数、抗氧化酶活性、黄酮类化合物合成关键酶活性、总黄酮及总黄酮醇苷含量.结果:S6 菌组与对照组相比,在45、60 d时,鲜重分别显著高出 20.36%、15.38%;15、30、60 d时,Pn 分别显著高出 49.20%、44.79%、345.33%;45、60 d时,Gs 分别显著高出26.83%、33.47%;15 d时,Ci 显著高出 12.79%;15、30、60 d时,WUE分别显著高出 49.27%、77.39%、514.03%;45、60 d时,SOD活性分别显著高出 93.64%、155.03%;15～60 d 期间,POD 活性分别显著高出 23.12%、110.79%、141.98%、174.84%;15、60 d时,PAL 活性分别显著高出 106.85%、35.21%;30、45 d 时,F3H 含量分别显著高出25.17%、66.67%;15 d时,FNS含量显著高出 21.18%;15～60 d 期间,总黄酮醇苷含量分别显著高出 28.96%、28.37%、30.90%、66.56%.结论:深绿木霉能够促进朝鲜淫羊藿的生长及药效成分累积.

为筛选出山白兰(Michelia baillonii)苗木培育过程中适宜的光环境,该研究以一年生山白兰幼苗为试验材料,设置 12、16 h·d-1 两个光周期,配合使用红蓝复合光(8R1B、6R1B)、红蓝紫绿复合光(8R1B1P1G、6R1B1P1G)4 种光质和白光(W)对照,采用双因素随机区组试验设计和隶属函数法,探讨了山白兰苗木生长、光合色素、内源激素含量对不同光质和光周期处理的响应规律.结果表明:(1)光质、光周期及其交互作用对山白兰苗高增长量、叶面积、叶绿素a、玉米素(ZR)、脱落酸(ABA)的含量、内源激素比值[IAA/ABA、(IAA+GA3+ZR)/ABA]等均有显著影响(P<0.05).(2)16 h·d-1光周期有利于苗高增长量、叶面积、苗木质量指数、生物量、叶绿素a、生长素(IAA)、ZR的含量、内源激素比值的提高.(3)当光周期为16 h·d-1时,8R1B处理下的苗高增长量、叶面积和苗木质量指数均最大,分别为 21.84 cm、158.39 cm2 和2.43;8R1B处理下的叶绿素a/b比值、ZR含量高于 6R1B处理,8R1B1P1G处理下的叶绿素a、类胡萝卜素、IAA、赤霉素(GA3)的含量、叶绿素a/b、内源激素的比值较 6R1B1P1G处理大.综上所述,较高比例红光的红蓝复合光质、适当延长光周期有利于提高山白兰苗木质量,而紫绿光的添加未对生长有促进效果,16 h·d-1×8R1B处理是最适宜山白兰苗木生长的光照条件.

目的:研究绿原酸(CRA)联合伏立康唑(VRC)对侵袭性肺曲霉病的体内干预效果及免疫机制.方法:将大鼠分为正常对照组、模型组、CRA组、VRC组、联合治疗组(CRA+VRC组),成功建立侵袭性肺曲霉病大鼠模型后,正常对照组和模型组给予生理盐水,其余各组分别给予CRA单药、VRC单药及CRA+VRC联合干预7d.观察大鼠一般情况以评估全身感染的严重程度;测定大鼠肺组织真菌负荷、肺泡灌洗液中半乳甘露聚糖(GM)含量;采用苏木精—伊红(HE)以及六胺银(PASM)染色观察肺部感染灶病理结构变化;免疫组化法检测CD68、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶-1(Arg-1)蛋白表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺组织匀浆中巨噬细胞的M1 表型细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)以及M2 表型细胞因子白细胞介素-10(IL-10)水平.结果:与模型组比较,CRA+VRC组大鼠一般状况最佳,且体重下降趋势明显减缓(P＜0.05),真菌负荷及肺泡灌洗液中GM浓度显著降低(P＜0.01).模型组大鼠肺组织血管、支气管明显受真菌侵袭,大量菌丝、孢子生长,且有广泛炎症、出血,而CRA+VRC组大鼠肺组织则菌丝明显减少,损伤较轻.与模型组比较,CRA+VRC组大鼠肺组织CD68、Arg-1 蛋白表达水平显著降低(P＜0.01),而iNOS蛋白表达水平显著升高(P＜0.05),肺组织TNF-α、IL-6 水平均明显升高(P＜0.05,P＜0.01).结论:CRA联合VRC对侵袭性肺曲霉病模型大鼠具有协同治疗作用,其作用机制可能与CRA促进巨噬细胞M1表型极化有关.

[背景]木霉是自然界中常见的纤维素和半纤维素降解菌,在农业废弃物降解中具有重要应用潜力.[目的]筛选可在低温环境降解玉米秸秆的木霉菌株.[方法]测定 31 种木霉 111 个菌株在低温下的生长状况、水解纤维素和木聚糖产生的透明圈直径及部分菌株对玉米秸秆的相对降解率(relative degradation rate,RDR);利用DNS法测定不同RDR代表菌株的纤维素滤纸酶(filter paper cellulase,FPase)、羧甲基纤维素酶(carboxymethyl cellulase,CMCase)和木聚糖酶(xylanase)活性,并分析它们在不同发酵阶段的酶活与秸秆降解率的关系.[结果]在 10℃和 5℃培养分别有100 株和 42株供试菌株能够生长,在 15℃均能生长,其中 19个菌株培养 6 d产生的水解纤维素和木聚糖产生的透明圈直径大于 60 mm、培养 10 d对玉米秸秆的RDR为 0.45%-8.09%;菌株 9145、TC425、TC505 和 8987 的FPase、CMCase和xylanase活性随着培养时间呈现动态变化,其中前两者的活性变化趋势基本一致,与 RDR 的关系密切.[结论]钩状木霉、西蒙斯木霉、深绿木霉和深褐木霉菌株在低温条件下对玉米秸秆具有较高的降解能力,将为后续玉米秸秆腐熟剂开发、降解机理研究及秸秆资源化利用提供种质资源.

土壤微生物是森林生态系统的重要组成部分,毛竹(Phyllostachys edulis)扩张使植被类型发生改变,进而对土壤微生物群落产生影响.为揭示毛竹向杉木(Cunninghamia lanceolata)林扩张过程中对土壤细菌群落的影响.本文在浙江省杭州市临安区於潜镇南山村,以杉木纯林(s)为对照,选取毛竹杉木混交林(h)、毛竹纯林(m)两种林型,通过高通量测序技术探究毛竹扩张对杉木林土壤细菌群落的影响.结果表明:毛竹扩张导致杉木林土壤细菌群落a多样性降低,与杉木林相比,混交林地细菌多样性及丰富度分别降低了2.4％、8.6％,但无显著差异;毛竹林分别降低了5.9％、16％,且差异显著(P＜0.05).毛竹扩张杉木林后,改变了土壤细菌菌群的相对多度;杉木林中变形菌门、Unassigned和疣微菌门的相对多度最高,分别占32.39％、3.7％、3.2％;毛竹林中酸杆菌门和拟杆菌门的相对多度最高,分别占45.05％、5.19％;混交林中浮霉状菌门、放线菌门和绿弯菌门的相对多度最高,分别占7.51％、6.79％、5.12％.毛竹扩张形成混交林后,浮霉状菌门、放线菌门的相对多度显著上升(P＜0.05),分别增加了3.12％、2.71％,而迷踪菌门和芽单胞菌门的相对多度显著下降(P＜0.05),分别减少了0.43％、0.36％;奇古菌门相对多度显著下降(P＜0.05).β多样性分析结果显示,毛竹扩张对杉木林土壤细菌群落结构产生显著影响(P＜0.05),毛竹林与竹杉混交林的土壤细菌结构较为接近,两者与杉木林细菌群落集聚距离较远.LEfSe分析显示硝化螺菌属(Nitrospira)、芽单胞菌科和分枝杆菌属(Mycobacterium)的相对多度变化显著,可作为毛竹扩张杉木林土壤细菌群落结构变化的指示种.土壤NH4+可能是引起细菌群落变化的主要土壤环境因子.这些结果说明毛竹向杉木林扩张可引起林地土壤细菌群落发生改变,这为了解毛竹扩张对土壤碳氮等元素循环、扩张机制及扩张调控提供了基础数据.

目的 调查佳木斯大学附属第一医院耐碳青霉烯类革兰阴性杆菌临床分布特点,及对常用抗菌药物的敏感性和耐药性.方法 分析2015年1月-2017年1月医院临床分离的耐碳青霉烯类革兰阴性杆菌分布特点和药敏结果.药敏试验采用自动化仪器法或K-B纸片扩散法.结果 310株耐碳青霉烯类革兰阴性杆菌中,居首位的是鲍曼不动杆菌,占67.4％.药敏试验结果显示分离菌株耐药率高,仅对多黏菌素B的敏感率均＞90％,全部鲍曼不动杆菌和肺炎克雷伯菌以及87％铜绿假单胞菌为多药耐药菌株,鲍曼不动杆菌耐药性最强,对环丙沙星、头孢菌素类、加酶抑制剂青霉素类和头孢替坦的耐药率＞90％,对多黏菌素以外的药物敏感率＜20％.结论 本地区耐碳青酶烯类革兰阴性杆菌临床分布比较集中,对常用抗菌药物呈高度耐药,提示临床应加强细菌耐药性监测,合理有效使用抗菌药物.