目的 对比分析常山碱盐(DAS)iv给药和水溶液暴露给药毒性的区别.方法 ①将受精后2d(2 dpf)发育良好的斑马鱼幼鱼随机分为正常对照组(无任何处理)、溶剂对照组(生理盐水,iv)和DAS组(0.125,0.25,0.50,1.00和2.00 mg·kg-1,iv),给药后连续观察3d,以斑马鱼心率为0确定死亡,计算死亡率、最大非致死剂量(MNLD)和10%致死剂量(LD10).给药后4h,体视显微镜观察0.50和2.00 mg·kg-1组斑马鱼静脉窦淤血、心包水肿及心率和血流变慢情况,并计算其发生率.斑马鱼iv给予DAS 0.041,0.136,0.412和0.452 mg·kg-1,给药后连续3d体视显微镜观察并计算斑马鱼幼鱼发育畸形表型,包括心包水肿、心率异常、血流变慢、循环缺失、眼睛异常、脑部畸形、下颌异常、肝缺失/变性、卵黄囊吸收延迟、肠腔异常、身体着色异常、身体水肿、躯干/尾/脊索弯曲和肌肉变性等发生率.② 斑马鱼幼鱼随机分为正常对照组和DAS水溶液暴露(2.5,5.0,10.0,25.0,50.0,75.0和100.0 mg·L-1)组,连续暴露并观察3d,计算死亡率、LD10和MNLD.斑马鱼暴露于DAS 0.32,1.06,3.20和11.00 mg·L-1水溶液,连续暴露3d,体视显微镜观察斑马鱼幼鱼发育畸形表型,并计算其发生率.结果 ①斑马鱼幼鱼iv给予DAS的MNLD和LD10分别为0.412和0.452 mg·kg-1.与溶剂对照组相比,iv给予DAS4h后0.50和2.00 mg·kg-1组斑马鱼静脉窦淤血、心率减慢和心包水肿发生率均显著增加(P<0.05,P<0.01),2.00 mg·kg-1 组血流变慢发生率亦显著增加(P<0.01);DAS 0.041,0.136,0.412和0.452 mg·kg-1组斑马鱼卵黄囊吸收延迟率显著增加(P<0.05,P<0.01),0.452 mg·kg-1组斑马鱼死亡率显著增加(P<0.05),且死亡斑马鱼具有心包水肿现象.②斑马鱼DAS水溶液暴露的MNLD和LD10分别为3.20和11.00 mg·L-1.与正常对照组相比,3.20和11.00 mg·L-1组斑马鱼心率减慢和血流变慢发生率均明显增加(P<0.01),1.06,3.20和11.00 mg·L-1组斑马鱼肠道明显变黑且发生率显著增加(P<0.01),0.32,1.06,3.20和11.00 mg·L-1组斑马鱼卵黄囊吸收延迟发生率显著增加(P<0.05,P<0.01),11.00 mg·L-1组斑马鱼还出现躯干弯曲和下颌畸形且发生率显著增加(P<0.01).结论 斑马鱼幼鱼DAS iv给药和水溶液暴露给药的毒性表型不同.DAS水溶液暴露不仅导致幼鱼心率、血流变慢及卵黄囊吸收延迟和肠道变黑现象,同时还可诱导神经发育毒性;但iv给药则可有效避免明显的胃肠道损伤和神经发育毒性.

目的:研究常山碱盐(dichroa alkali salt,DAS)抗疟药效及急性毒性作用,了解DAS作为抗疟药的成药性.方法:采用腹腔接种伯氏疟原虫制备鼠疟感染模型,进行体内抗疟药效评价(灌胃给药,每天1次,连续4d),动态采集尾静脉血,涂片并吉姆萨染色,镜下观察疟疾小鼠疟原虫的转阴及复燃情况,计算转阴率和复燃率,并计算半数有效剂量(50％effective dose,ED50).采用ICR小鼠对DAS进行急性毒性实验,观察小鼠一般状态,腹泻及死亡情况,计算半数腹泻剂量(50％ diarrhea dose,DD50)和半数致死剂量(50％ lethal dose,LD50),苏木精-伊红(HE)染色观察主要脏器的组织病理学变化.结果:鼠疟体内实验发现,DAS在较低剂量即可使感染小鼠全部转阴,但不能有效抗复燃,ED50为0.6 mg·kg-1,95％置信区间为0.5～0.7 mg·kg-1.小鼠急性毒性研究发现,给予DAS后,动物活动减少、行为倦怠,毛色无光、畏冷、进食、饮水欠佳,轻者腹泻、重者便血甚至死亡;DD50为7.9 mg·kg-1,95％置信区间为6.3～10.0 mg·kg-1,LD50为10.8 mg·kg-1,95％置信区间为8.5 ～ 13.8 mg·kg-1;大体解剖发现,给药组小鼠胃明显膨大,脾脏、盲肠萎缩,肠道内容物呈泔水样变化;HE染色发现不同剂量组肝脏、脾脏、胃和盲肠出现了不同程度的病理组织学损伤.以DD50和LD50为指标,计算DAS的治疗指数(therapeuticindex,TI)分别为13.17,18.00.结论:DAS在较低剂量即可使感染疟原虫的模型小鼠全部转阴,但是毒性大,安全窗窄.

目的:研究盐酸常山碱的理化性质并考察其脂质体包封率的测定方法.方法:采用HPLC测定盐酸常山碱的含量,流动相乙睛-水-三乙胺-冰乙酸(9∶91∶0.35∶0.75),检测波长265 nm;通过摇瓶法测定其在不同pH范围内的油水分配系数,并考察在125℃,30 min灭菌后盐酸常山碱在不同pH磷酸盐缓冲液中的稳定性,利用硫酸铵梯度法制备盐酸常山碱脂质体,分别用葡聚糖凝胶和阳离子交换树脂制备微柱,采用离心法使游离药物和脂质体分离,测定药物含量,计算包封率.运用SPSS 20.0软件进行t检验,比较上述2种方法测定结果的差异.结果:在pH 6 ～9时,盐酸常山碱的油水分配系数随着pH的升高而增大,油水分配系数处于0.016～1.44,盐酸常山碱灭菌后回收率在37.16％ ～57.91％,葡聚糖凝胶微柱离心法和阳离子交换树脂微柱离心法测得脂质体的包封率结果无显著性差异.结论:盐酸常山碱适合制成脂质体,但其稳定性并不理想,故在制备工艺中应严格控制实验温度.葡聚糖凝胶微柱离心法和阳离子交换树脂微柱离心法均可以较好地测定盐酸常山碱脂质体的包封率,但比较后建议选择阳离子交换树脂微柱离心法.

目的:探究常山碱盐(dichroa alkali salt,DAS)诱导呕吐的可能机制.方法:采用小鼠异食癖模型,分别观察3种不同机制的镇吐药,多巴胺受体拮抗剂甲氧氯普胺,5-羟色胺3 (5-hydroxytryptamine 3,5-HT3)受体拮抗剂昂丹司琼,神经激肽-1受体拮抗剂阿瑞匹坦,对DAS所致小鼠体质量、正常饲料摄食量、高岭土摄食量及腹泻和死亡情况的影响,明确DAS可能的致吐途径;然后采用酶联免疫法针对性的检测DAS干预后不同时间点小鼠回肠和延髓中5-HT和P物质(substance P,SP)的表达情况,以确认DAS是否可影响这2种神经递质的变化.结果:配伍昂丹司琼和阿瑞匹坦后,连续给药第4天和药后第1天均可显著改善DAS诱导的小鼠摄食量降低现象(P＜0.01),自连续给药第3天起均可显著改善DAS诱导的小鼠体质量降低现象(P＜0.01),降低DAS诱导的小鼠腹泻率和死亡率,同时可有效拮抗DAS诱导的小鼠异食行为,但是甲氧氯普胺对上述指标则无明显改善作用;进一步检测呕吐相关神经递质,发现与空白组比较,给予DAS后4,12h回肠和延髓中5-HT含量显著增加,48 h时回肠和延髓中SP含量显著升高.结论:小鼠异食模型可有效表征DAS诱导的呕吐现象,其诱导的呕吐行为可能与回肠和延髓中5-HT和SP含量升高有关,配伍昂丹司琼和阿瑞匹坦可有效拮抗DAS诱导的小鼠异食现象.