目的:探讨血小板(PLT)对肝癌血管生成的影响以及华蟾素的干预作用.方法:先筛选PLT与肝癌细胞的适宜共孵育比例,制备条件培养基,确定华蟾素(CBG)的半数抑制浓度;然后,设对照组[人脐静脉内皮细胞(EC)+常规培养基]、串扰组[EC+CM_HP(HUH7与PLT串扰制备的条培)]、干预组(EC+CM_HP+CBG),采用划痕实验、小管形成实验、出芽实验和ELISA实验分别评估EC的迁移力、成管力、出芽能力以及共培养上清中血管内皮生长因子(VEGF)水平;运用West-ern blot检测VEGFR2、p-VEGFR2的表达,并采用抑制剂进行了反向验证.建立肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,设 Model 组、Model+CBG 组和 Model+Apa组,通过Masson染色观察移植瘤的胶原表达情况,免疫荧光检测血管内皮标志物CD31和CD34的表达水平.结果:PLT:HUH7=200时HUH7活力最强,HUH7与PLT串扰明显促进EC的增殖力(P＜0.01).与对照组相比,串扰组的迁移、成管、生芽能力增强,干预组的低于串扰组(P＜0.01).串扰组上清中VEGF的表达水平高于对照组,而干预组的低于串扰组(P＜0.01).串扰组p-VEGFR2蛋白的表达量较对照组显著增多,而干预组的表达量较串扰组少(P＜0.01).Model组可见大片胶原纤维沉积,CBG干预显著降低移植瘤组织胶原纤维沉积.Model组的肝癌移植瘤组织存在CD31和CD34表达,CBG干预显著降低肝癌移植瘤组织CD31和CD34的表达(P＜0.01).结论:PLT能增强肝癌的血管生成,CBG可能经由VEGF/VEGFR2通路抑制其成管能力.

目的 研究华蟾素通过调控肝细胞癌(HCC)上皮间质转化(EMT)抑制HCC转移的作用和机制.方法 将36只6周龄雄性BALB/c裸鼠尾静脉注射MHCC97H细胞建立肝癌肺转移瘤模型,随机分为华蟾素高、低剂量组和对照组.建模当日起分别腹腔注射华蟾素120 μL/kg、60 μL/kg或生理盐水,每周2次.8周后取肺组织行HE染色检测肝癌肺转移率.MHCC97H细胞用华蟾素高、低剂量(2.5 μL/mL、5 μL/mL)干预,通过划痕实验、RT-PCR以及Western Blot检测细胞迁移能力和EMT相关分子的表达.用CoCl2孵育模拟低氧环境诱导MHCC97H细胞,同时加入高、低剂量华蟾素干预,通过划痕实验和Western Blot检测华蟾素对低氧诱导的细胞迁移能力和EMT的影响.使用转录组学分析华蟾素对MHCC97H细胞的效应机制.用Western Blot检验华蟾素干预对MHCC97H细胞的蛋白激酶B(AKT)、磷酸化AKT(P-AKT)表达水平的影响.计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验,两组间比较采用成组t检验.结果 华蟾素干预组裸鼠较对照组肝癌肺转移率下降.与对照组相比,华蟾素干预使MHCC97H细胞划痕愈合率减小、上皮型分子表达上调(t=2.860,P<0.05),并使EMT转录因子和基质型分子下调(t值分别为3.545、2.022、2.852、2.341,P值均<0.05).低氧诱导上调MHCC97H细胞划痕愈合率和基质型分子、EMT转录因子表达水平(P值均<0.05),华蟾素干预逆转EMT变化并抑制划痕愈合(P值均<0.05).肝癌细胞转录组学分析显示,华蟾素组与对照组存在显著的基因差异,华蟾素主要影响了肿瘤、代谢、免疫和信号传导相关基因表达,其中AKT信号转导通路中的差异基因数量最多.进一步检测发现华蟾素干预可下调HCC 细胞AKT、P-AKT和P-AKT/AKT的水平(t值分别为2.434、3.401、2.258,P值均<0.05).结论 华蟾素可抑制肝癌转移,尤其对于低氧环境诱导的肝癌转移具有显著抑制作用,调控AKT信号转导通路介导的HCC细胞EMT可能是其部分作用机制.

蟾酥是一种具活性的蟾蜍提取物,其炮制方法是将中华大蟾蜍皮肤腺和耳后腺分泌的毒液进行酒制或高温干燥而得.作为一种在中国被用来治疗疾病已有上千年历史的天然产物,蟾酥具有强心、镇痛、抗心肌缺血、抗内毒素休克、抗癌等多种药理作用.沙蟾毒精(arenobufagin,ARE)是蟾酥的主要化学成分之一,其抗癌机制也在近十年来被越来越多地阐明.ARE可通过多种途径发挥抗癌作用,如诱导癌细胞凋亡和/或自噬、坏死、细胞周期阻滞,抑制癌细胞迁移和侵袭,抑制血管生成等.目前有关ARE的研究主要关注在其癌细胞选择性毒性和抗癌分子机制方面,多为细胞和动物水平.受限于ARE毒副作用较大、靶点不明确和药代动力特性不清楚等,ARE尚未进入西医临床应用阶段.该文梳理了ARE的抗癌活性、抗癌分子机制以及与其他抗癌药物联合使用的相关研究成果,以期为完善ARE的抗癌机制研究提供新的方向.

蟾酥是蟾蜍科动物中华大蟾蜍或黑眶蟾蜍的耳后腺或皮肤腺体的干燥分泌物.蟾酥作为一种传统的中药,化学成分复杂,临床用途较广,具有抗肿瘤、强心、抗炎、局麻、镇痛等多种药理活性.本文从蟾酥的本草考证、质量影响因素和质量标准现状等方面总结了蟾酥质量研究现状,以期从现行标准出发,为蟾酥药材的进一步质量控制提供参考.

目的 建立冻干蟾皮凝胶剂质量标准和初步药效学研究.方法 采用薄层色谱(TLC)法对制剂中的华蟾酥毒基和酯蟾毒配基进行定性鉴别,高效液相色谱(HPLC)法测定华蟾酥毒基和酯蟾毒配基含量,色谱柱kromasilC18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:乙腈(A)-水(B)(48∶52);流速:1 mL/min;检测波长:296 nm;柱温:30℃;进样量:10μL.采用S180腹水型实体瘤小鼠进行初步抑瘤药效学研究.结果 硅胶G薄层板上,在与对照品色谱对应的位置上,显示相同颜色的荧光斑点,且斑点大小适中,分离度良好.华蟾酥毒基和酯蟾毒配基分别在0.056～4.48 μg/mL,0.256～10.24 μg/mL范围内,峰面积与浓度存在良好的线性关系(r=0.9987、0.9996).加样回收率(n=6)为100.27％、101.68％,相对标准偏差为1.56％、1.67％.初步药效学结果显示冻干蟾皮凝胶剂不同剂量组均有显著抗肿瘤作用,且高剂量组效果最佳,抑瘤率为48.03％.结论 建立了冻干蟾皮凝胶剂质量标准,初步药效学表明冻干蟾皮凝胶剂具有显著抗肿瘤作用.

宫颈癌是一种常见的,严重危害妇女健康的恶性肿瘤,目前宫颈癌已超过乳腺癌居女性恶性肿瘤第一位[1].华蟾素是从中华大蟾蜍干皮中提取得到的有效成分,主要含有吲哚生物 碱、多肽、蟾蜍内脂及色素等[2,3].实验研究和临床试验结果均证明其有抗肿瘤作用,而目前国内外关于华蟾素对宫颈癌的作用机制尚不清楚[4-6].本研究通过观察华蟾素对HeLa细 胞生长增殖的影响,从诱导细胞凋亡方向探讨华蟾素抑制HeLa生长增殖作用的机制.

目的:探讨华蟾素对骨癌痛大鼠的镇痛效应及对脊髓胶质细胞活化的影响.方法:选用雌性SD大鼠48只,随机分为正常对照组、假手术组(胫骨内注射20 μL PBS)、模型组和华蟾素干预组,每组12只.模型组与华蟾素干预组大鼠胫骨内注射20 μLWalker 256乳腺癌细胞构建骨癌痛模型.华蟾素干预组于造模第7天开始腹腔注射华蟾素注射液,其余各组每天予以等量生理盐水,各组于造模前以及造模后第2、5、7、9、13、15天分别测定热缩足阈值和机械缩足阈值,造模第7天行胫骨X线摄片观察骨质破坏程度,末次行为学检测后处死大鼠,取外周血、L4～L6节段脊髓,利用免疫组化检测星形胶质细胞标记物(GFAP)和小胶质细胞标记物(Iba-1)的表达情况,ELISA检测外周血及脊髓中相关炎性因子(TNF-α和IL-1β)的表达.结果:X线显示模型组大鼠胫骨骨皮质破坏明显、骨质连续性缺乏、骨组织肿胀明显,正常对照组、假手术组未见明显骨组织肿胀、骨连续性较好,提示造模成功.行为学检测结果表明与模型组比较,华蟾素干预可明显缓解骨癌所诱发的机械痛敏、热痛敏(P＜0.01).免疫组化结果提示与假手术组相比,模型组大鼠脊髓胶质细胞活化明显增强(P＜0.05);与模型组相比,华蟾素能显著抑制脊髓胶质细胞活化(P＜0.05).ELISA检测结果显示与假手术组相比,模型组大鼠脊髓及血清中TNF-α和IL-1β表达增强(P＜0.05);与模型组相比,华蟾素能降低TNF-α和IL-1β表达(P＜0.05).结论:华蟾素对骨癌痛大鼠有较好的镇痛效应,其镇痛作用可能是通过抑制脊髓星形胶质细胞及小胶质细胞活化发挥作用的.

蟾酥为蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizans或黑眶蟾蜍B.melanostictus耳后腺及皮肤腺的干燥分泌物.目前商品蟾酥质量问题突出,混伪、掺假现象普遍存在.亟需构建科学完善的质量控制方法,以提升蟾酥药材、饮片及其中成药制剂的质量控制水平,保障临床用药安全有效.该研究采用高效液相色谱法建立蟾酥药材的特征图谱,采用一测多评法(QAMS)测定5种主要蟾毒配基的含量.通过不同批次市售蟾酥样品的分析,建立了以五羟色胺、日蟾毒它灵、沙蟾毒精、嚏根草配基、远华蟾毒精、蟾毒它灵、华蟾毒它灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基和脂蟾毒配基为特征峰的对照特征图谱;建立了以华蟾酥毒基为内参物,同步测定蟾酥药材中5种蟾毒配基含量的一测多评法,并对相对校正因子(RCF)的耐用性和系统适用性进行了系统研究.华蟾酥毒基对日蟾毒它灵、蟾毒它灵、蟾毒灵和脂蟾毒配基的RCF分别为1.05,0.895,1.09,0.913.建立的特征图谱和QAMS法,可以有效控制蟾酥药材的质量,为2020年版《中国药典》蟾酥药材质量标准的完善与提高提供参考.

骨癌痛是由原发骨肿瘤或晚期肿瘤骨转移引起的中度至重度的难治性疼痛,严重影响患者生活质量. 蟾酥由蟾蜍表皮腺体的分泌物经干燥而成,具有解毒、消肿、醒神和止痛等作用,外用治疗癌性疼痛效果明显,作用持久[1]. 伤害性刺激由外周神经经脊髓向大脑传递,鞘内注射蟾蜍对骨癌痛的影响尚有待研究. 胆碱能系统激活可能产生镇痛效应[2].背根神经节M 型胆碱能受体激活后可产生明显的镇痛作用[3] ,本研究拟评价鞘内注射蟾酥对大鼠骨癌痛的影响及背根神经节M型胆碱能受体在其中的作用.

王某,男,74岁.初诊日期:2002年6月.患者1995年7月于上海某专科医院行左肺全切除术.术后病理示:低分化腺鳞癌,纵隔淋巴结转移,侵及脏层胸膜,P-T3N2M0ⅢA期.术后未行放化疗.2002年4月复查CT、骨ECT发现双侧肾上腺转移,全身多发骨转移.患者拒绝化疗,遂求治于徐教授.初诊症见:乏力,双膝酸软;口干不欲饮,胃纳欠佳,小便调,大便干结,夜寐安;舌淡红、苔少白腻,脉细数.辨证为肺肾两亏、邪毒内结,治以益气健脾、补肾填精、解毒散结.拟方:党参15 g,白术9 g,茯苓15 g,生薏苡仁30 g,八月札15 g,石见穿30 g,重楼15 g,露蜂房9 g,干蟾皮9 g,黄精30 g,生黄芪40 g,七叶胆15 g,淫羊藿15 g,火麻仁30 g,枳实15 g,杜仲30 g,怀牛膝15 g,鸡内金12 g,山楂15 g.14剂.每日1剂,水煎服.