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序列相似性家族134成员B介导的内质网自噬对内毒素/脂多糖诱导的小鼠树突状细胞凋亡的影响
编辑人员丨5天前
目的:探讨序列相似性家族134成员B(FAM134B)介导的内质网自噬对内毒素/脂多糖(LPS)诱导的小鼠树突状细胞(DC)凋亡的影响,为改善创面感染等引起的脓毒症免疫抑制提供依据。方法:采用实验研究方法。取第3~10代对数生长期的小鼠DC系DC2.4进行实验。将DC分为LPS刺激0 h(不刺激)组、LPS刺激6 h组、LPS刺激12 h组、LPS刺激24 h组和LPS刺激72 h组,采用1 μg/mL LPS(浓度下同)培养相应时间后,采用蛋白质印迹法检测FAM134B、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)以及转运蛋白SEC61B蛋白表达,并计算LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值(样本数为3)。将DC分为进行相应处理的磷酸盐缓冲液(PBS)组与LPS组,培养24 h,采用免疫荧光法检测FAM134B表达情况及其分别与溶酶体探针、LC3B共定位情况,通过透射电子显微镜观察细胞内自噬溶酶体数量。将DC分为转染含 FAM134B基因小干扰RNA序列的慢病毒的敲减FAM134B组与转染空载慢病毒的空载体组,转染后72 h,于倒置荧光相差显微镜下观察细胞荧光表达情况,另将仅常规培养的DC设为空白对照组并于相应时间点行相同观察。将DC分为单纯PBS组、单纯LPS组,将成功转染含 FAM134B基因小干扰RNA序列的慢病毒的DC分为敲减FAM134B+PBS组、敲减FAM134B+LPS组,将成功转染空载慢病毒的DC分为空载体+PBS组、空载体+LPS组,给予相应刺激并培养24 h,采用蛋白质印迹法检测FAM134B蛋白表达(样本数为3),通过流式细胞术检测细胞凋亡率(样本数为3),行Hoechst染色观测细胞凋亡情况并计算凋亡率(样本数为5),采用蛋白质印迹法检测剪切型胱天蛋白酶3(caspase-3)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达并计算Bax/Bcl-2比值(样本数为5)。对数据行单因素方差分析、LSD检验、析因设计方差分析。 结果:与LPS刺激0 h组相比,LPS刺激12 h组和LPS刺激24 h组细胞中FAM134B蛋白表达均明显升高( P<0.05),LPS刺激6 h组、LPS刺激12 h组、LPS刺激24 h组和LPS刺激72 h组细胞中SEC61B蛋白表达均明显降低( P<0.05),LPS刺激24 h组和LPS刺激72 h组细胞中LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值均明显升高( P<0.05),其中LPS刺激24 h组细胞中3个蛋白的变化最显著,将24 h作为后续LPS刺激时长。培养24 h,与PBS组相比,LPS组细胞中FAM134B的表达及其与LC3B及溶酶体探针的共定位均显著增强,自噬溶酶体数量明显增多。空载体组与敲减FAM134B组细胞转染后72 h均表现出高强度荧光,而空白对照组细胞在相应时间点无荧光表现。培养24 h,敲减FAM134B+PBS组细胞中FAM134B蛋白表达较单纯PBS组和空载体+PBS组明显降低( P值均<0.05),敲减FAM134B+LPS组细胞中FAM134B蛋白表达较单纯LPS组和空载体+LPS组显著降低( P值均<0.05),单纯LPS组细胞中FAM134B蛋白表达较单纯PBS组明显升高( P<0.05),空载体+LPS组细胞中FAM134B蛋白表达较空载体+PBS组明显升高( P<0.05)。培养24 h,流式细胞术检测显示,单纯PBS组、单纯LPS组、空载体+PBS组、空载体+LPS组、敲减FAM134B+PBS组与敲减FAM134B+LPS组细胞凋亡率分别为(13.3±0.8)%、(32.6±4.3)%、(17.0±1.5)%、(51.7±3.3)%、(52.4±3.1)%与(62.3±2.6)%。培养24 h,与单纯LPS组和空载体+LPS组相比,敲减FAM134B+LPS组经流式细胞术与Hoechst染色检测的细胞凋亡率以及细胞中剪切型caspase-3蛋白表达、Bax/Bcl-2比值均明显升高( P<0.05);与对应的PBS处理组即单纯PBS组、空载体+PBS组、敲减FAM134B+PBS组相比,单纯LPS组、空载体+LPS组、敲减FAM134B+LPS组经流式细胞术与Hoechst染色检测的细胞凋亡率以及细胞中剪切型caspase-3蛋白表达、Bax/Bcl-2比值均明显升高( P<0.05)。 结论:小鼠DC中FAM134B介导的内质网自噬在LPS刺激下活化增强并于24 h达活化高峰,且活化的内质网自噬对细胞凋亡具有显著抑制效应。
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编辑人员丨5天前
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关于《序列相似性家族134 成员B 介导的内质网自噬对内毒素/脂多糖诱导的小鼠树突状细胞凋亡的影响》一文的更正
编辑人员丨5天前
《中华烧伤与创面修复杂志》2023年9期刊登的《序列相似性家族134成员B介导的内质网自噬对内毒素/脂多糖诱导的小鼠树突状细胞凋亡的影响》一文第一作者单位应为南方医科大学第一临床医学院(The First School of Clinical Medicine, Southern Medical University),该错误因作者疏忽所致,特此更正。
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编辑人员丨5天前
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脓毒症相关肺损伤中内质网应激诱导的铁死亡机制研究
编辑人员丨2024/7/6
目的 探讨急性呼吸窘迫综合征(ARDS)中内质网应激(ERs)诱导的铁死亡机制.方法 为了确定LPS对小鼠毛细血管肺泡上皮细胞(MLE12 细胞)氧化应激和Fe2+水平的影响,用 LPS(0、1、2、5 μg/ml)处理细胞 24 h.将MLE12 细胞分为对照(Con)组、脱铁抑制剂(Fer-1)组、LPS组和LPS+Fer-1 组以验证铁死亡在脂多糖(LPS)诱导的细胞死亡中的作用.LPS+Fer-1 组用10 μmol/L Fer-1 预处理6h,随后将细胞暴露于5 μg/ml LPS 24 h;Con组用融媒DM-SO处理24 h,Fer-1 组用10 μmol/L Fer-1 预处理6h,随后用DMSO处理24 h;LPS组将细胞暴露于5 μg/ml LPS 24 h.将MLE12 细胞分为Con+载体(Vector)组、Con+序列相似性家族 134 成员 B(FAM134B)组、LPS+Vector 组、LPS+FAM134B组,细胞用Vector或FAM134B过表达质粒转染48 h后,暴露或不暴露于 5 μg/ml LPS 24 h.使用CCK-8 法测定细胞活力;测量不同组的丙二醛(MDA)、谷胱甘肽和铁的水平,以及铁死亡标志物[环加氧酶 2(PTGS2)、谷胱甘肽过氧化物酶 4(GPX4)]和 ERs 标志物[葡萄糖调节蛋白 78(GRP78)、活化转录因子 4(ATF4)和 C/EBP 同源蛋白(CHOP)]的蛋白水平;为了进一步证实体外细胞实验结果,将40 只小鼠随机分成Con+Vector组、Con+FAM134B组、LPS+Vector 组、LPS+FAM134B 组,每组 10 只,在 LPS+Vector组、LPS+FAM134B组小鼠中建立LPS诱导的脓毒症模型,并通过免疫荧光染色和蛋白质印迹评估肺组织中GPX4 和 ERs 水平.结果 LPS 处理的 MLE12 细胞中PTGS2 和MDA水平以剂量依赖性增加,GPX4 和谷胱甘肽(GSH)水平剂量依赖性降低;与LPS组相比,LPS+Fer-1 组细胞活力、GPX4 和GSH水平增加(P<0.05),PTGS2 蛋白水平和MDA水平降低(P<0.05);与LPS+Vector组相比,LPS+FAM134B 组细胞活力增加(P<0.05),MDA 水平和PTGS2 蛋白水平降低(P<0.05),GPX4 和GSH水平增加(P<0.05);动物实验中,与 LPS+Vector 组相比,LPS+FAM134B组小鼠肺组织中4-HNE、ATF4 和CHOP表达水平降低(P<0.05),GPX4、FAM134B表达水平增加(P<0.05).结论 LPS 以剂量依赖的方式诱导 MLE12 细胞铁死亡和ERs通过激活内质网自噬相关 FAM134B 受体有助于抑制ERs,并减轻细胞铁死亡.
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编辑人员丨2024/7/6
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FAM134B介导的内质网自噬及其与疾病的关系
编辑人员丨2024/2/3
自噬能够降解损伤衰老的细胞器以及异常的蛋白质,能够给机体的生命活动提供部分所需的能量及原料.自噬主要分为4个阶段,包括自噬前体、自噬小体、自噬溶酶体的形成以及溶酶体水解酶降解自噬体内所包裹的大分子物质的过程,依赖溶酶体降解系统进行.在细胞内,内质网是最大的细胞器,蛋白质在内质网合成和加工,钙离子贮存在内质网中;蛋白质折叠错误、钙离子平衡失调会导致内质网功能紊乱,激活内质网自噬.自噬能够维持细胞稳态,选择性自噬和非选择性自噬是根据降解底物特异性的有无分成的2种自噬类型.内质网自噬是选择性自噬众多类型中的一种,是由内质网受体介导的自噬.序列相似性家族134成员B(FAM134B)是最先在哺乳动物中发现的且已被鉴定的内质网自噬受体,其介导的内质网自噬参与了众多疾病的发展进程.FAM134B通过LC3相互作用域和网状同源结构域诱导内质网膜弯曲碎片化,便于运输到溶酶体,促进内质网降解.适度的内质网自噬肃清破损的内质网,恢复内质网内稳态;而当内质网自噬过度时就会诱导细胞启动凋亡程序.一般情况下,机体低水平的自噬对于细胞的存活是有益的,而应激状态下的过度自噬或自噬功能障碍则对机体有害.本文介绍了自噬、内质网结构及其功能、内质网自噬以及FAM134B如何介导内质网自噬,并通过梳理相关文献,阐述了 FAM134B介导的内质网自噬与神经系统疾病、消化系统疾病、心血管疾病、感染性疾病之间的联系,表明通过调控FAM134B的表达在一定程度上能够控制内质网自噬,从而影响疾病的进展.
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编辑人员丨2024/2/3
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二硫苏糖醇抑制序列相似性家族134成员B(FAM134B)介导的内质网自噬促进大鼠肝细胞凋亡
编辑人员丨2023/8/5
目的 探讨序列相似性家族134成员B(FAM134B)介导的内质网自噬在内质网应激(ERS)诱导的肝细胞凋亡中的作用及分子机制.方法 采用(0、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0)mmo1/L的二硫苏糖醇(DTT)处理BRL-3A大鼠肝细胞48 h,实时无标记细胞动态分析(RTCA)检测肝细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测ERS及内质网自噬相关蛋白、内质网-线粒体接触位点相关蛋白及线粒体凋亡途经相关蛋白表达的影响.内质网及溶酶体的荧光探针检测DTT处理细胞后二者的荧光共定位;线粒体钙离子荧光探针罗丹明2乙酰氧基甲酯(Rhod-2 AM)检测DTT对线粒体中钙离子水平的影响.结果 DTT可显著抑制肝细胞的增殖并促进细胞凋亡.DTT处理肝细胞后ERS及内质网自噬相关蛋白、内质网-线粒体接触位点相关蛋白及线粒体凋亡途经相关蛋白的表达均显著上调.DTT处理细胞后内质网和溶酶体的荧光共定位显著减弱,同时,线粒体内钙离子荧光强度明显增强.结论 DTT通过抑制FAM134B介导的内质网自噬,进而增加线粒体内Ca2+的水平,促进肝细胞凋亡.
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编辑人员丨2023/8/5
