目的 基于AMPK/ULK1信号通路观察归芪益元膏联合顺铂对Lewis肺癌荷瘤小鼠的抑瘤作用及作用机制.方法 小鼠右侧腋下接种Lewis肺癌细胞建立皮下肿瘤模型.将小鼠随机分为空白组、模型组、顺铂组和中药高、中、低剂量+顺铂组,每组10只,顺铂组腹腔注射顺铂5 mg/kg(每7 d一次),中药高、中、低剂量+顺铂组在顺铂组基础上分别予归芪益元膏7.0、3.5、1.75 g/kg灌胃,每日1次,连续14 d.HE染色观察小鼠肿瘤组织形态,免疫组化测定肿瘤组织p-AMPK、p-ULK1蛋白表达,透射电镜观测肿瘤组织自噬小体数量,RT-PCR测定小鼠肿瘤组织p62、Beclin-l、Atg5、LC3 mRNA表达,Western blot检测肿瘤组织Beclin-1、p62、Atg5、LC3和AMPK/ULK1信号通路蛋白表达.结果 与模型组比较,各给药组小鼠瘤质量明显降低(P<0.05);肿瘤组织出现片状坏死区域且自噬小体数量增加,Beclin-l、Atg5、LC3 mRNA表达升高,Beclin-1、Atg5、LC3Ⅱ/Ⅰ、AMPK、p-AMPK、ULK1、p-ULK1蛋白表达升高,p62 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05).与顺铂组比较,中药高、中剂量+顺铂组小鼠瘤质量降低(P<0.05),抑瘤率增加;中药高、中、低剂量+顺铂组小鼠肿瘤组织ULK1蛋白和Atg5 mRNA表达明显升高(P<0.05);中药高、中剂量+顺铂组Beclin-1、LC3 mRNA表达明显升高(P<0.05),Atg5、LC3Ⅱ/Ⅰ、AMPK、p-AMPK、p-ULK1蛋白表达明显升高(P<0.05),p62蛋白表达明显降低(P<0.05);中药高剂量+顺铂组p62 mRNA表达明显降低(P<0.05),Beclin-1蛋白表达明显升高(P<0.05).结论 归芪益元膏联合顺铂可能通过激活AMPK/ULK1信号通路促进肿瘤细胞自噬,进而抑制Lewis肺癌荷瘤小鼠皮下肿瘤生长.

目的 基于lncRNA H19/miR-19b3p/FTH1轴探讨归芪益元膏联合顺铂对Lewis肺癌小鼠的抑瘤作用及机制.方法 60只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机取10只作为空白组,其余50只皮下接种Lewis肺癌细胞复制肺癌小鼠模型.将成模小鼠随机分为模型组、顺铂组和中药低、中、高剂量联合顺铂组,每组10只,顺铂组予顺铂5 mg/kg腹腔注射,中药低、中、高剂量联合顺铂组予归芪益元膏1.75、3.5、7.0 g/kg灌胃联合顺铂5 mg/kg腹腔注射,空白组和模型组予等体积生理盐水灌胃,连续14 d.观察小鼠一般状况,测量小鼠瘤质量并计算抑瘤率、脾脏指数和胸腺指数,HE染色观察肿瘤组织病理形态,检测肿瘤组织丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢(H2O2)、亚铁离子(Fe2+)含量,免疫组化和Western blot检测肿瘤组织核因子E2相关因子2(Nrf2)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、铁蛋白重链1(FTH1)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)蛋白表达,实时荧光定量PCR检测肿瘤组织lncRNA H19、miR-19b3p mRNA表达.结果 与空白组比较,模型组小鼠体质量、脾脏指数和胸腺指数均降低(P<0.05).与模型组比较,各给药组小鼠一般状况不同程度改善,瘤质量减少(P<0.05),脾脏指数及胸腺指数升高(P<0.05),肿瘤细胞溶解、破裂、数量减少,肿瘤组织MDA、H2O2、Fe2+含量升高(P<0.05),GSH含量降低(P<0.05),Nrf2、GPX4、FTH1、SLC7A11蛋白表达降低(P<0.05),lncRNA H19 mRNA表达降低(P<0.05),miR-19b3p mRNA表达升高(P<0.05);与顺铂组比较,中药高剂量联合顺铂组小鼠瘤质量减少(P<0.05),体质量、脾脏指数和胸腺指数升高(P<0.05),肿瘤组织MDA、H2O2、Fe2+含量升高(P<0.05),GSH含量降低(P<0.05),Nrf2、FTH1、SLC7A11、GPX4蛋白表达降低(P<0.05),lncRNA H19 mRNA表达降低(P<0.05),miR-19b3p mRNA表达升高(P<0.05).结论 归芪益元膏联合顺铂对Lewis肺癌小鼠具有明显抑瘤作用,其作用机制可能与调节lncRNA H19/miR-19b3p/FTH1轴相关铁死亡分子表达有关.

目的 观察归芪益元膏对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长的抑制作用,探讨归芪益元膏联合顺铂通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路抗肿瘤的分子机制.方法 将60只C57BL/6小鼠随机分为6组,每组10只,除空白组(0.9％NaCl)外,其余均建立Lewis肺癌荷瘤小鼠模型,将荷瘤小鼠随机分为模型组(0.9％NaCl)、对照组(0.9％NaCl,顺铂5 mg·kg-1)和低、中、高剂量实验组(归芪益元膏1.6、3.3、6.6 g·kg-1,顺铂5 mg·kg-1).以流式细胞术检测小鼠骨髓髓源性抑制细胞(MDSCs)水平;以蛋白质印迹法检测肿瘤组织中相关蛋白的表达.结果 对照组和低、中、高剂量实验组的抑瘤率分别为(39.87±4.45)％、(45.74±14.97)％、(57.78±4.70)％和(69.82±11.05)％.空白组、模型组、对照组及低、中、高剂量实验组的骨髓中MDSCs占比分别为(36.13±1.08)％、(68.63±2.94)％、(58.93±2.02)％、(58.00±1.50)％、(50.93±5.06)％和(43.07±2.41)％.模型组、对照组和低、中、高剂量实验组p-PI3K/PI3K蛋白表达分别为0.97±0.03、0.77±0.02、0.72±0.01、0.68±0.03 和 0.53±0.02,PTEN 分别为0.21±0.07、0.65±0.07、0.74±0.06、0.99±0.13 和 1.11±0.13,p-Akt/Akt 分别为 1.01±0.02 和 0.82±0.02、0.77±0.00、0.72±0.03 和 0.52±0.04,p-mTOR/mTOR分别为 1.01±0.01、0.76±0.05、0.69±0.07、0.59±0.06 和0.47±0.06;低、中、高剂量实验组与对照组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 归芪益元膏联合顺铂能明显改善小鼠生存质量及抑制肿瘤生长,其机制可能是抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路,增强肿瘤细胞凋亡及自噬.

目的:探讨归芪益元膏对重离子辐射旁效应损伤大鼠Bax、Bcl-2及外周血象的影响.方法:Wistar雄性大鼠随机分为3组,正常对照组、辐射组和中药组.中药组预先给予归芪益元膏灌胃2周(3.28g·kg-1·d-1)后辐射组和中药组大鼠右肺予2Gy12C6+离子束单次照射,正常对照组不予照射.照射后24h处死各组大鼠,Western Blot及Q-PCR检测大鼠肺肾组织中Bax、Bcl-2蛋白及mRNA表达,检测外周血象.结果:与正常对照组比较,辐射组大鼠肺肾组织中Bax蛋白及mRNA表达上调(P＜0.05),Bel-2蛋白及mRNA表达下调(P＜0.05),白细胞、红细胞、血小板、血红蛋白含量均下降(P＜0.05).与辐射组比较,中药组大鼠肺、肾组织中Bax蛋白及mRNA表达下调(P＜0.05),Bcl-2蛋白及mRNA表达上调(P＜0.05),白细胞、红细胞、血小板、血红蛋白含量均升高(P＜0.05).结论:归芪益元膏可以减轻重离子辐射旁效应诱导的肺、肾细胞凋亡,保护外周血象,从而发挥其对重离子辐射旁效应损伤的防护作用.

目的 探讨归芪益元膏对重离子(12C6+)辐射旁效应损伤大鼠肺肾组织中caspase-3及caspase-9表达的影响.方法 42只雄性Wistar大鼠随机分为7组,即正常对照组(NC组)、单纯辐射组(RO组)、中药组(CM组),后两组按照射后处死时间分为6、12、24h亚组,每组6只.CM组预先用归芪益元膏灌胃2周,NC组和RO组用等量生理盐水灌胃;2周后RO组和CM组大鼠右肺给予2Gy 12C6+离子束单次照射,NC组不照射.于照射后6、12、24h处死各组大鼠,RT-qPCR及免疫组化检测大鼠右肺、左肺、左肾组织中caspase-3、caspase-9mRNA及蛋白的表达.结果 与NC组比较,RO组大鼠右肺、左肺、左肾caspase-3、caspase-9mRNA表达在照射后6、12、24h均明显升高,而蛋白表达仅在照射后24h明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01).CM组大鼠右肺、左肺、左肾caspase-3、caspase-9mRNA及蛋白表达较同时间点的RO组明显下调,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 归芪益元膏可抑制大鼠肺肾组织caspase-3、caspase-9表达的上调,从而减轻重离子辐射诱导的体内旁效应损伤.

目的:探讨归芪益元膏对123C6+束辐射损伤大鼠旁效应的防护机制.方法:采用12C6+束照射大鼠右侧肺部构建辐射损伤动物模型,分层随机分为单纯辐射组、归芪益元膏组,同时设立正常对照组,取大鼠的左肺、左肾组织以提取总RNA,IlluminaHiSeq平台测序,检测各组大鼠所有基因转录本的差异表达,筛选出与旁效应保护相关的基因及代谢途径.结果:给予归芪益元膏能改善12C6+束辐射损伤大鼠旁效应,转录数据分析显示其作用机制主要涉及肿瘤坏死因子、细胞外基质、细胞-细胞黏附连接、钙离子、白细胞介素-1、4、8等蛋白基因表达上调/下调.结论:归芪益元膏对12C6+束辐射损伤大鼠旁效应具有一定的防护作用,其机制可能与抑制电离辐射响应及癌症信号转导通路有关.

目的 探讨归芪益元膏对12C6+束辐射旁效应(RIBE)肺损伤大鼠的作用及可能机制.方法 70只Wistar雄性大鼠随机分为空白对照组、辐射24 h组、归芪益元膏+辐射24 h组、归芪益元膏24 h组、辐射7 d组、归芪益元膏+辐射7 d组、归芪益元膏7 d组,每组10只.各归芪益元膏组和归芪益元膏+辐射组照射前14d给予归芪益元膏灌胃,空白对照组和各辐射组灌胃等量生理盐水.14 d后,各辐射组及归芪益元膏+辐射组大鼠右肺予4 Gy 12C6+束单次照射(仅暴露右肺部位),空白对照组与各归芪益元膏组不照射,照射后持续灌胃给药至24 h、7 d时间点处死大鼠,收集双肺组织,HE染色观察左右肺组织病理学变化,Q-PCR检测左右肺组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、p-Smad3 mRNA表达水平,Western blotting检测左右肺组织中TGF-β1、p-Smad3、Smad6蛋白表达水平.结果 HE染色结果显示,空白对照组及各归芪益元膏组双肺肺泡结构正常.辐射24 h组双肺肺泡间隔增大,炎性细胞浸润.归芪益元膏+辐射24 h组双肺部分肺泡间隔断裂,部分炎性细胞浸润.辐射7 d组肺泡间隔断裂明显,肺泡腔不规则扩大,炎性细胞浸润,左肺浸润程度较右肺轻.归芪益元膏+辐射7 d组无纤维增生,肺泡腔内无充血,左肺损伤程度较右肺轻.Q-PCR和Western blotting检测结果显示,与空白对照组比较,辐射24 h组和辐射7 d组大鼠左右肺组织中TGF-β1 mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.05),p-Smad3蛋白表达水平升高(P<0.05),右肺Smad6 mRNA表达水平降低(P<0.05),左肺Smad6 mRNA表达水平升高(P<0.05),左右肺组织中Smad6蛋白表达水平降低(P<0.05),且辐射7 d组大鼠左右肺组织中TGF-β1 mRNA和蛋白表达水平高于辐射24 h组(P<0.05),存在时间效应.与相同时间点辐射组比较,各归芪益元膏+辐射组大鼠左右肺组织中TGF-β1 mRNA和蛋白、p-Smad3蛋白表达水平降低,Smad6 mRNA和蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 归芪益元膏对辐射旁效应肺损伤大鼠具有防护作用,其机制可能与下调肺组织中TGF-β1、p-Smad3 mRNA和蛋白的表达,上调Smad6 mRNA和蛋白的表达有关.

目的 探究归芪益元膏对重离子(12C6+)束辐射大鼠旁效应损伤的保护机制.方法 40只Wistar大鼠随机分为空白组、单纯辐射组、辐射加中药组、单纯中药组,每组10只.灌胃给药2周后,用4 Gy 12C6+束照射各组大鼠右肺,7 d后处死,HE染色观察大鼠肺、肾组织病理变化,RT-qPCR、Western blot法检测肺组织和肾组织TGF-β1、p-Smad2、Smad7mRNA和蛋白表达.结果 单纯辐射组大鼠双肺部分肺泡间隔断裂、肺泡腔不规则扩大;左肾肾小球基底膜增厚,肾小管上皮细胞水肿.辐射加中药组大鼠双肺部分肺泡腔缩小,无纤维增生;肾小管上皮轻微水肿,未见增生与纤维化.单纯中药组大鼠双肺肺泡结构整齐,未见增生;肾小球基底膜与肾小球结构均正常.与空白组比较,单纯辐射组大鼠双肺及左肾TGF-β1 mRNA和蛋白,p-Smad2蛋白表达均升高(P＜0.05),Smad7 mRNA和蛋白表达降低(P＜0.05);与单纯辐射组比较,辐射加中药组及单纯中药组双肺及左肾TGF-β1 mRNA和蛋白,p-Smad2蛋白表达均降低(P＜0.05),Smad7mRNA和蛋白表达升高(P＜0.05).结论 归芪益元膏通过抑制TGF-β1与p-Smad2表达,并升高Smad7表达,有效防治重离子辐射及旁效应损伤.