目的:探讨微小RNA(miR)-6791-5p对人结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭功能的影响及其分子机制。方法:采集培养人结直肠癌细胞系RKO、SW480、DLD1、HCT116以及人正常结肠上皮细胞NCM460。通过反转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-6791-5p在各细胞系中的表达水平(表达倍数为0.52±0.04、0.83±0.06、0.60±0.12、0.68±0.07)，并构建miR-6791-5p模拟物(miR-6791-5p mimic)及其阴性对照Negative control，并将其转染至RKO细胞。使用RT-qPCR检测miR-6791-5p和PACS2 mRNA的表达水平(表达倍数为0.468±0.032)。利用蛋白质印迹法(Western blot)检测PACS2蛋白的表达水平[RKO：(51.590±6.018)%]。使用两样本 t检验进行统计分析，结果以均数±标准差( ± s)表示，以 P<0.05为差异有统计学意义。 结果:miR-6791-5p在人结直肠癌细胞系表达水平显著低于人结肠上皮细胞，其中RKO和DLD1下调最明显(RKO组低于460组：0.52±0.04比1.00、DLD1组低于460组0.60±0.12比1.00)，差异有统计学意义(RKO： t＝17.811， P<0.0001；DLD1： t＝5.372， P<0.01)。RKO转染后，mimic组miR-6791-5p表达水平高于mimic NC组(3.28±0.44比1.00)，差异有统计学意义(RKO： t＝8.764， P<0.01)。细胞计数试剂(CCK-8)检测表明mimic组24、48、72、96 h细胞吸光度值显著低于mimic NC组(24 h吸光度值为0.185±0.004比0.250±0.030，48 h吸光度值为0.275±0.040比0.376±0.020，72 h吸光度值为0.497±0.120比0.657±0.010，96 h吸光度值为0.691±0.004比0.905±0.019)，差异有统计学意义(RKO： t＝10.821， P<0.01)。平板克隆实验表明mimic组集落形成数低于mimic NC组(115.70±12.51比176.00±19.18)，差异有统计学意义(RKO： t＝4.581， P<0.05)。划痕愈合实验显示miR-6791-5p mimic组划痕愈合率低于NC组[(14.960±0.848)%比(36.480±1.340)%]，差异有统计学意义( t＝23.491， P<0.0001)。Transwell迁徙和侵袭实验显示穿透微孔膜的细胞数mimic组低于mimic NC组(迁移数目miR-6791-5p mimic组比NC组42.330±3.512比125.700±7.760，侵袭数目分别为54.33±4.16比159.30±7.76)，差异有统计学意义(Transwell迁移 t＝16.931， P<0.01)、(Transwell侵袭 t＝20.641， P<0.01)。在线靶预测软件(miRWalk、mirtarbase、targetscan)预测miR-6791-5p可能的靶基因，并通过qRT-PCR及Western blot验证，mimic组PACS2的mRNA及蛋白表达水平低于mimic NC组[比例为(51.590±6.018)%比1.00]，差异有统计学意义[mRNA(RKO： t＝27.951， P<0.0001)；Western blot(RKO： t＝13.931， P<0.001)]。 结论:miR-6791-5p在结直肠癌细胞中低表达，过表达miR-6791-5p能抑制结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭能力，并且明显下调PACS2的mRNA和蛋白表达水平，说明miR-6791-5p可能通过PACS2调控结直肠癌增殖、迁移及侵袭能力。

目的:探索定向排列的三维多孔网状（A型）结构和蜂窝煤状垂直贯穿的三维多孔网状（B型）结构对人工真皮血管化速率的影响。方法:采用实验研究方法。本研究中的人工真皮为硅胶层和支架层双层结构，根据支架层结构不同，分为含A型结构和B型结构的人工真皮（以下分别简称A型真皮、B型真皮），其中的A型结构和B型结构分别采用梯度冷冻干燥技术和物理制孔技术制得。采用扫描电镜观测2种真皮支架的微观形貌。采用比重瓶法测定2种真皮支架的孔隙率。参照国家医药行业标准中的方法，于降解4、8、13、24 h测定2种真皮降解液及残留物中羟脯氨酸的含量，反映2种真皮降解率。取L929细胞，按照随机数字表法分为A型真皮组、B型真皮组、阴性对照组、阳性对照组，阳性对照组加入含体积分数5%二甲基亚砜的MEM培养基，阴性对照组加入高密度聚乙烯浸提液，其余2组加入相应的浸提液培养24 h，采用噻唑蓝试剂测定细胞增殖率，并对细胞毒性进行定级。取L929细胞和人脐静脉内皮细胞（HUVEC），接种于预先置有2种真皮的孔板。接种后1、4、7、14 d，采用免疫荧光法检测L929细胞在2种真皮支架表面的黏附生长状况。接种后7 d，采用免疫荧光法和苏木精-伊红（HE）染色法检测前述2种细胞长入2种真皮支架的情况。在3只6个月龄雄性巴马小型猪背部两侧各制作3个5.0 cm×5.0 cm的全层皮肤缺损创面，6列创面按照随机数字表法分为A型真皮两步法组、B型真皮两步法组和B型支架一步法组。A型真皮两步法组和B型真皮两步法组的创面分别先行A型真皮或B型真皮移植后，再行自体刃厚皮片的移植，B型支架一步法组的创面行B型真皮（揭除硅胶层）+自体刃厚皮片一步法移植。大体观察Ⅱ期术后7 d A型真皮两步法组和B型真皮两步法组及Ⅰ期术后14 d B型支架一步法组的猪背创面出血、渗液和感染情况。同时，采用透明胶片网格法测定自体皮移植面积并计算其存活率。Ⅰ期术后4、7、14 d，HE染色法检测3组猪背创面中支架的炎症细胞、成纤维细胞（Fb）和毛细血管浸润情况。Ⅰ期术后7 d，免疫组织化学法进一步检测3组猪背创面中支架的血管化情况。Ⅰ期术后28 d、3个月，HE染色法检测A型真皮两步法组和B型支架一步法组猪背创面中支架的降解情况。对数据行单因素方差分析、独立样本 t检验、Bonferroni校正。 结果:A型真皮支架表面均匀分布着大量圆形和椭圆形的微孔，纵切面可观察到柱状孔壁大体呈平行定向排列；B型真皮支架表面的蜂窝煤状贯穿大孔呈矩阵有序排列，纵切面蜂窝煤状贯穿孔的孔壁由微孔相互连通成网络结构。A型真皮支架的孔隙率为（93.2±0.7）%，与B型的（95.9±1.0）%相近（ t=4.653， P>0.05）。A型真皮在4、8、13、24 h的降解率与B型真皮对应时间点的降解率相近（ t=0.232、0.856、0.258、7.716， P>0.05）。培养24 h，A型真皮组、B型真皮组、阴性对照组L929细胞的增殖率显著高于阳性对照组（ t=2 393.460、2 538.270、1 077.770， P<0.01）；阳性对照组细胞毒性评级为4级，其余3组为0级。接种后1、4、7、14 d，L929细胞和HUVEC在2种真皮支架中均呈时间依赖性增殖；且2种细胞在B型真皮上的黏附生长、增殖速率高于A型真皮。接种后7 d，L929细胞和HUVEC均已长满B型真皮支架层且至硅胶层一侧；而前述2种细胞向A型真皮内部迁移速度较慢，硅胶层一侧仅见少量细胞。Ⅱ期术后7 d A型真皮两步法组和B型真皮两步法组及Ⅰ期术后14 d B型支架一步法组创面均未出现出血、渗液、感染等情况；3组各6个创面的自体皮植皮存活率均为100%。Ⅰ期术后4、7、14 d，炎症细胞、Fb、毛细血管等逐渐向创面的支架层浸润，且细胞浸润速率从高到低依次为B型支架一步法组、B型真皮两步法组、A型真皮两步法组。Ⅰ期术后7 d 3组创面中支架的血管化速率从高到低依次为B型支架一步法组、B型真皮两步法组、A型真皮两步法组。B型支架一步法组猪背创面中的支架在术后28 d逐渐溃散，术后3个月完全降解；A型真皮两步法组猪背创面中的支架降解情况与前述相似。 结论:与A型结构相比，B型结构可加速人工真皮支架血管化进程，利于联合自体刃厚皮一步法移植修复猪全层皮肤缺损创面。一步法移植的效果与分次移植人工真皮与自体刃厚皮的两步法一致，可为创面治疗提供更优选择。

目的:探讨微小RNA-519d-3p(miR-519d-3p)在结直肠癌(CRC)中的表达及对增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法:体外培养人结直肠癌细胞系和人正常结肠上皮细胞。将miR-519d-3p模拟物(mimic)分别转染于RKO及SW620，同时设置mimic阴性对照(mimic NC)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-519d-3p表达及DCAF4L2 mRNA表达水平。细胞计数试剂盒(CCK-8)和平板克隆实验检测细胞增殖活性。划痕愈合实验、Transwell迁移和侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力。蛋白质印迹法(Western blot)检测DCAF4L2蛋白表达水平。符合正态分布的计量资料以均数±标准差( ± s)表示，采用两样本 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:miR-519d-3p在人结直肠癌细胞系中显著下降，其中RKO和SW620表达倍数明显低于NCM460[RKO：(0.311±0.165)倍比1.000倍， t＝7.783， P<0.05；SW620：(0.354±0.079)倍比1.000倍， t＝15.72， P<0.01]，差异有统计学意义。成功转染mimic过表达miR-519d-3p，过表达组表达倍数高于对照组 [RKO：(2.913±0.602)倍比1.000倍， t＝5.409， P<0.01；SW620：(3.194±0.427)倍比1.000倍， t＝8.765， P<0.001]，差异有统计学意义。通过生物学功能实验证实miR-519d-3p表达升高能显著抑制CRC细胞的增殖、迁移和侵袭能力。CCK-8检测结果示，过表达组24、48、72、96 h细胞吸光度值低于对照组(RKO：0.248±0.018比0.184±0.012、0.388±0.007比0.277±0.010、0.658±0.033比0.496±0.008、0.877±0.020比0.681±0.021， t＝3.064， P<0.01；SW620：0.213±0.018比0.181±0.050、0.375±0.008比0.274±0.014、0.720±0.009比0.482±0.006、0.978±0.115比0.721±0.032， t＝2.432， P<0.01)，差异有统计学意义。过表达组平板克隆集落形成个数显著低于对照组[RKO：(262.300±11.320)个比(181.700±2.333)个， t＝7.127， P<0.05；SW620：(448.000±33.260)个比(190.300±7.446)个， t＝9.387， P<0.05]，差异有统计学意义。过表达组划痕愈合率低于对照组[RKO：(39.040±0.812)%比(8.979±0.846)%， t＝394.900， P<0.01；SW620：(28.840±0.848)%比(5.576±1.435)%， t＝21.350， P<0.01]，差异有统计学意义。Transwell迁移和侵袭实验中过表达组穿透微孔膜的细胞个数明显低于对照组，迁移实验[RKO：(196.700±6.360)个比(93.330±4.096)个， t＝44.290， P<0.01；SW620：(198.300±4.485)个比(101.300±1.764)个， t＝16.090， P<0.01]，差异有统计学意义；侵袭实验[RKO：(274.700±3.844)个比(85.670±2.728)个， t＝33.950， P<0.01；SW620：(263.300±6.566)个比(70.330±4.256)个， t＝50.980， P<0.01]，差异有统计学意义。在线预测软件(miRWalk、StarBase 2.0和TCGA)预测，并通过qRT-PCR及Western blot验证结果显示，DCAF4L2作为miR-519d-3p靶基因调控CRC，过表达组DCAF4L2的mRNA表达及蛋白表达倍数明显低于对照组，mRNA表达倍数[RKO：(0.170±0.050)倍比1.000倍， t＝18.400， P<0.01; SW620：(0.256±0.069)倍比1.000倍， t＝26.800， P<0.01]，差异有统计学意义；蛋白倍数[RKO：(45.504±6.076)%比100.000%， t＝15.540， P<0.01；SW620：(43.567±3.760)%比100.000%， t＝26.000， P<0.01]，差异有统计学意义。 结论:结直肠癌细胞中miR-519d-3p表达显著下降，并通过调控DCAF4L2表达抑制结直肠癌增殖、迁移及侵袭能力。

目的:探讨不同产膜能力白色念珠菌入侵后诱导人气道上皮细胞的免疫损伤机制。方法:选择2019年6至12月宁夏医科大学总医院分离培养的25株白色念珠菌，质控菌株SC5314为标准菌株。建立白色念珠菌生物膜体外模型，利用结晶紫染色和酶标板法检测不同白色念珠菌的生物膜形成能力；采用酶标板法测定570 nm处的吸光度值（ A570）： A570≥0.5为强产膜菌（SBF），0.25< A570<0.5为中产膜菌（DRF）， A570≤0.25为不产膜菌（WBF）。在体外分离培养并建立人气道上皮细胞的气液相培养模型，分为5组：空白对照组（ n=20）、标准菌株组（ n=20）、强产膜组（ n=19）、不产膜组（ n=17）、耐氟康唑组（ n=18）。扫描电镜观察气液相培养上皮细胞的形态。采用免疫荧光检测气液相培养上皮细胞体外模型标志蛋白的表达。通过微孔板法检测细胞中乳酸脱氢酶（LDH）含量，利用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测细胞培养液中细胞内β-防御素（hBD2）、粒巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、粒细胞集落刺激因子（G-CSF）等的分泌情况。 结果:强产膜菌株以菌丝相互交错生长，能看到极少数酵母细胞包裹于其中。扫描电镜观察气液相培养的上皮细胞菌丝能够主动入侵上皮细胞；纤毛乙酰化的微管蛋白和角蛋白的表达量明显减少，同时细胞增殖相关蛋白的表达也被下调。空白对照组、标准菌株组、强产膜组、不产膜组、耐氟康唑组细胞中LDH含量分别为（12.21±5.68）、（46.35±6.35）、（18.69±4.38）、（12.56±3.69）、（13.48±4.28）U/L，差异有统计学意义（ P<0.001）；与标准菌株组相比，强产膜组、不产膜组、耐氟康唑组细胞内LDH含量均降低（均 P<0.01）。空白对照组、标准菌株组、强产膜组、不产膜组、耐氟康唑组细胞内hBD2的含量分别为（26.14±0.77）、（56.18±0.83）、（30.66±2.59）、（29.22±0.48）、（28.28±1.56）ng/L，差异有统计学意义（ P<0.001）；与空白对照组相比，只有标准菌株组的上皮细胞可诱导细胞内hBD2表达量增加（ P<0.001）。不同组别间细胞内GM-CSF、G-CSF的表达量差异均无统计学意义（均 P>0.05）。 结论:强产膜白色念珠菌可通过下调细胞增殖相关蛋白的表达，抑制细胞的增殖，破坏上皮细胞的完整性，从而诱导细胞损伤。

目的:探讨微小RNA-210-3p(miR-210-3p)在结直肠癌细胞中的表达以及对细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:体外培养人结直肠癌细胞系RKO、SW480、SW620、DLD1和人正常结肠上皮细胞系NCM460。将miR-210-3p抑制剂(inhibitor)及inhibitor阴性对照(NC)转染于RKO细胞中，设为miR-210-3p inhibitor实验组以及NC组。使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-210-3p表达水平。采用细胞计数实验(CCK-8)和平板克隆实验检测细胞增殖活性。划痕愈合实验、Transwell迁移和侵袭实验分别检测细胞的迁移及侵袭能力。qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)分别检测激活素A的ⅠB型受体(ACVR1B) mRNA和蛋白的表达水平。两样本间比较采取 t检验，多组间比较采用单因素方差分析(ANOVA)。 结果:miR-210-3p在结直肠癌细胞系中表达均高于人正常结肠上皮细胞，以RKO中升高最为明显(2.33±0.51、5.54±0.95、1.80±0.15、3.34±0.45比1.00±0.02， P<0.01)，差异有统计学意义。体外转染实验构建低表达miR-210-3p的miR-210-3p inhibitor实验组和NC组，qRT-PCR测量实验组miR-210-3p表达量低于对照组(0.44±0.04比1.02±0.27， t＝3.26， P<0.05)，差异有统计学意义。生物学实验验证miR-210-3p对结直肠癌细胞系的增殖、迁移和侵袭的影响。CCK-8表明，miR-210-3p inhibitor组24、48、72 h细胞吸光度明显低于NC组(0.33±0.01比0.41±0.01、0.51±0.01比0.72±0.03、0.80±0.02比1.01±0.08， t＝0.378、17.900、23.920、5.494， P<0.05)，差异有统计学意义。平板克隆试验显示，miR-210-3p inhibitor组细胞集落个数明显少于NC组[(370.67±13.80)个比(518.67±11.50)个， t＝14.270， P<0.05]，差异有统计学意义。细胞划痕愈合实验表明miR-210-3p inhibitor组划痕愈合度低于NC组[(7.91±0.55)%比(21.22±1.00)%， t＝20.380， P<0.05]差异有统计学意义。miR-210-3p inhibitor组在Transwell迁移和侵袭实验中通过微孔膜的细胞数显著低于NC组[(145.00±5.67)个比(208.00±10.54)个， t＝9.157， P<0.05；(122.33±8.02)个比(195.67±6.81)个， t＝12.070， P<0.05]，差异有统计学意义。使用预测软件(miRDB、miRWalk和StarBase 2.0)预测，并通过qRT-PCR及Western blot验证潜在靶点，结果显示ACVR1B作为miR-210-3p靶基因位点调控结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭，miR-210-3p inhibitor组ACVR1B mRNA表达和蛋白表达倍数明显高于NC组，mRNA表达(2.00±0.03比1.00±0.11， t＝14.540， P<0.05)，差异有统计学意义；蛋白相对倍数为[(67.89±0.65)%比(37.85±0.86)%， t＝48.260， P<0.05]，差异有统计学意义。 结论:人结直肠癌细胞系中miR-210-3p显著高表达，并通过靶向ACVR1B促进结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

目的:探讨聚碳酸1,2-丙二酯(PPC)/聚丁二酸丁二醇酯(PBS)复合生物膜在兔胫骨骨缺损模型中的空间支撑能力及其对成骨效果的影响,阐明其屏障功能的可靠性和体内促成骨作用.方法:制备PPC/PBS和PPC/PBS/Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)(PPC/PBS/Co)复合生物膜.选用18只日本大耳白兔,于兔每侧胫骨制备2处骨缺损,随机选择6只兔于骨缺损处放置PPC/PBS复合生物膜,术后4、8和12周各处死2只兔,扫描电子显微镜(SEM)观察兔骨缺损区PPC/PBS复合生物膜表面微观结构.实验分为空白对照组、PPC/PBS复合生物膜组、BME-10X胶原膜组和PPC/PBS/Co复合生物膜组,分别行手术将上述生物膜放置于兔相应骨缺损处,空白对照组兔不放置复合生物膜,于术后2、4、8和12周时分别处死3只兔,采用软X线检测各组兔骨缺损区再生骨组织灰度值,荧光标记后采用激光共聚焦显微镜观察各组兔骨缺损区再生骨组织荧光强度,采用HE染色和改良Gomori三色染色法观察各组兔骨缺损区再生骨组织病理形态表现,免疫组织化学染色法检测各组兔骨缺损区再生骨组织中骨形态发生蛋白2(BMP-2)和骨桥蛋白(OPN)蛋白表达水平.结果:大体观察,PPC/PBS复合生物膜紧密覆盖于骨缺损区,未见移位及塌陷.SEM观察,PPC/PBS复合生物膜多孔面随时间延长表面出现微孔结构并数量增多,而光滑面基本未形成微孔样结构.软X线检测,各组兔骨缺损区再生骨组织灰度值均随时间延长而升高,12周时PPC/PBS/Co复合生物膜组兔骨缺损区再生骨组织灰度值明显高于其他各组(P＜0.05).共聚焦显微镜观察,4、8和12周时PPC/PBS/Co复合生物膜组兔骨缺损区再生骨组织荧光强度与空白对照组相近;与PPC/PBS复合生物膜组和BME-10X胶原膜组比较,4周时PPC/PBS/Co复合生物膜组兔骨缺损区再生骨组织荧光强度升高(P＜0.05),8和12周时PPC/PBS/Co复合生物膜组兔骨缺损区再生骨组织荧光强度降低(P＜0.05).HE染色和改良Gomori染色,与PPC/PBS复合生物膜组和BME-10X胶原膜组比较,2和4周时PPC/PBS/Co复合生物膜组和空白对照组兔骨缺损区形成新骨的速度较快,在12周时骨缺损区形成的层板状骨矿化程度较高.免疫组织化学染色,2和4周时,与空白对照组、PPC/PBS复合生物膜组和BME-10X胶原膜组比较,PPC/PBS/Co复合生物膜组兔骨缺损区再生骨组织中BMP-2和OPN蛋白表达水平升高(P＜0.05或P＜0.01);与空白对照组和PPC/PBS复合生物膜组比较,BME-10X胶原膜组兔骨缺损区再生骨组织中BMP-2和OPN蛋白表达水平均降低(P＜0.05或P＜0.01).结论:PPC/PBS复合生物膜具有较好的空间支撑能力,物理屏障功能可靠,且PPC/PBS/Co复合生物膜具有良好的体内促成骨作用.

目的:研究利福平耐药结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)对氟喹诺酮类药物(fluoroquinolones,FQs)耐药基因突变特征与 FQs 最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)的关系.方法:选取2016-2021年北京市结核病防治机构及定点医院收治的利福平耐药结核病(rifampicin resistant tuberculosis,RR-TB)患者分离培养阳性菌株进行微孔板法药物敏感性检测,总结RR-TB患者菌株对左氧氟沙星(levofloxacin,Lfx)和莫西沙星(moxifloxacin,Mfx)的MIC值;同时进行一代测序.分析FQs耐药相关基因gyrA和gyrB突变特征与FQs MIC之间的关系;以表型药物敏感性试验(phenotypic drug susceptibility testing,pDST)结果为参照标准,评价基因型药物敏感性试验(genotypic drug susceptibility testing,gDST)对FQs耐药的检测效能;探讨RR-MTB对FQs表型耐药与基因型耐药差异的原因.结果:303株RR-TB患者菌株中,FQspDST耐药率为27.7％(84/303),gyrA基因突变检出率为25.1％(76/303),未检测到gyrB基因突变.以pDST结果为参照标准,gDST检测RR-MTB的FQs耐药性的敏感度和特异度分别为84.5％(71/84;95％CI:74.6.1％～91.2％)和97.7％(214/219;95％CI:94.5％～99.1％).两种方法结果不一致的菌株有25株,不一致率为8.3％(25/303).FQs耐药菌株的MIC主要为2 μg/ml,最常见的突变位点发生在第94位点(53.9％,41/76),gyrA基因在第88和94位点突变与pDST耐药完全一致,而第90和91位点突变的pDST耐药一致率分别为95.8％(23/24)和3/5.第88位点的突变与Lfx pDST耐药相关,与Mfx pDST高浓度耐药相关;第90位点的突变以丙氨酸转变为缬氨酸为主(92.3％,24/26),该突变发生的Lfx和Mfx最低MIC为临界浓度(1 μg/ml和0.25 μg/ml).第94位点天冬氨酸突变为天冬酰胺均为Lfx和Mfx高浓度耐药(1/1),该位点天冬氨酸突变为酪氨酸与Lfx耐药(1/1)相关,与Mfx高浓度耐药相关(1/1).结论:北京地区RR-MTB的FQs耐药的主要机制是gyrA基因突变,不同gyrA基因突变提示FQs耐药水平存在差异.FQs pDST和gDST检测RR-MTB的结果高度一致,可及早应用gDST检测RR-TB患者的FQs的耐药性,以指导临床制定合理治疗方案.

目的 评估以多色巢式实时荧光定量聚合酶链式反应技术(GeneXpert)为初始检测方法联合线性探针及表型药敏试验的二阶段检测流程在临床使用时对利福平耐药结核病的检出效果.方法 回顾性收集并分析2019-2022年北京市朝阳区结核病门诊部登记的645例病原学阳性肺结核患者基本信息及实验室检测结果.参照《利福平耐药肺结核诊断流程》解读,将GeneXpert作为初始第一阶段利福平耐药检出方法,然后对未接受GeneXpert检测或检测结果显示结核分枝杆菌阴性或利福平耐药不明确的患者标本开展培养,并对培养阳性菌株开展线性探针耐多药检测和微孔板法进一步进行利福平耐药检测的第二阶段检测流程.对二阶段流程中检出的利福平耐药菌株进行利福平、异烟肼、左氧氟沙星、莫西沙星4种药物比例法药敏试验.分析二阶段检测流程对利福平耐药检出情况及利福平耐药患者对其他药物的耐药谱.结果 645例病原学阳性患者的利福平耐药检测率为95.97％(619/645),利福平耐药检出比例为7.59％(47/619).其中第一阶段GeneXpert法检出87.23％(41/47)利福平耐药患者,而第二阶段线性探针和微孔板法共检出12.77％(6/47)利福平耐药患者.47例利福平耐药病例中37例培养阳性,经4种药物比例法药敏检测显示,7例为单耐利福平,26例为同时耐利福平和异烟肼,2例为准广泛耐药.结论 以GeneXpert为初始检测方法联合后续培养及线性探针和/或表型药敏试验的二阶段检测流程有助于检出更多利福平耐药患者.

目的 探讨荧光聚合酶链反应(PCR)熔解曲线法在耐多药结核病(MDR-TB)的快速诊断和有效药物快速筛选中的应用价值.方法 以利福平(RFP)、异烟肼(INH)、乙胺丁醇(EMB)、氟喹诺酮类(FQs)为检测药物,应用熔解曲线法和微孔板药敏法,对比检测2021年1～7月贵阳市公共卫生救治中心罗氏固体培养阳性的84株菌株.两种方法药敏结果不一致的菌株用基因测序法作验证.结果 以微孔板法为标准,熔解曲线法对MDR-TB(微孔板诊断)的检出符合率、灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和Kappa值依次为89.3％(75/84)、91.5％(43/47)、86.5％(32/37)、89.6％(43/48)、88.9％(32/36)、0.78.溶解曲线法对RFP、INH、EMB、FQs的检出符合率、灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和Kappa值分别为76.2％～97.6％、86.7％～95.7％、73.9％～100％、41.9％～100％、94.1％～98.6％和0.45～0.95.对22份(26.19％,22/84)微孔板法敏感、熔解曲线法耐药的菌株进行测序验证,结果均显示含有耐药突变;而微孔板法耐药、熔解曲线法敏感的6份(0.71％,6/84)菌株在测序区域均为野生型.结论 荧光PCR熔解曲线法对微孔板药敏法检测结果的灵敏度、特异度、符合率、一致性均较高,可为耐多药结核病的初筛诊断及治疗方案制定提供实验室依据.

目的 构建经门静脉直接注射日本血吸虫虫卵诱导血吸虫肝病小鼠模型并评价其效果,为血吸虫肝病研究提供新的动物模型.方法 将15只8周龄的C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组和注射虫卵组,其中对照组5只,注射虫卵组10只.第-14天将5 000个活虫卵注射至小鼠腹腔,第0天麻醉小鼠后剖开腹腔,经门静脉注入5 000个虫卵,对照组注射等体积的磷酸盐缓冲盐溶液(PBS).分别于第10天、第30天处死虫卵组小鼠各5只,第10天处死对照组小鼠,收集小鼠血清和肝组织,通过进行苏木素-伊红染色(HE染色)、马松染色(Masson染色),微孔板分光光度计法检测丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、肝脏羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量,以及实时荧光定量PCR(qPCR)法检测肝纤维化相关基因、Th1和Th2型免疫反应相关基因,分析肝损伤、虫卵肉芽肿和纤维化以及适应性免疫反应等指标,评价经门静脉注射虫卵诱导血吸虫肝病小鼠模型的效果.结果 经门静脉注射虫卵10d和30d后,小鼠肝脏出现明显的虫卵肉芽肿,第10天组虫卵肉芽肿面积与第30天组相比,差异无统计学意义(t=0.975,P=0.332).Masson染色和肝脏羟脯氨酸含量检测显示肝脏发生明显纤维化.qPCR结果表明,与对照组相比,第10天组小鼠肝组织纤维化标志基因α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-Sma)、Ⅰ 型胶原(collagen type Ⅰ alpha 1,Col1 α1)、转化生长因子 β1(transforming growth factor beta 1,Tgfb1)表达水平显著升高,差异有统计学意义(t=6.380、7.533、5.314,P=0.002、0.001、0.007);在第30天时出明显下降,与对照组相比差异无统计学意义(t=0.940、1.529、1.746,P=0.778、0.543、0.457).同时,Th1型免疫反应相关基因肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,Tnf)、干扰素-γ(interferon gamma,Ifng)和 Th2 型免疫反应相关基因白细胞介素 5(interleu-kin-5,Il5)、白细胞介素 13(interleukin-13,Il13)表达水平在注射虫卵10 d后显著升高,差异有统计学意义(t=6.163、4.589、5.651、5.367,P=0.003、0.018、0.020、0.009).此外,各组小鼠血清中的AST、ALT水平无明显变化,差异无统计学意义(t=0.982、3.450,P=0.771、0.074;t=1.164、0.564,P=0.697、0.917).结论 经门静脉注射虫卵诱导血吸虫肝病小鼠模型构建成,研究结果为血吸虫病肝纤维化的机制研究提供了新的建模方法.