目的 构建经门静脉直接注射日本血吸虫虫卵诱导血吸虫肝病小鼠模型并评价其效果,为血吸虫肝病研究提供新的动物模型.方法 将15只8周龄的C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组和注射虫卵组,其中对照组5只,注射虫卵组10只.第-14天将5 000个活虫卵注射至小鼠腹腔,第0天麻醉小鼠后剖开腹腔,经门静脉注入5 000个虫卵,对照组注射等体积的磷酸盐缓冲盐溶液(PBS).分别于第10天、第30天处死虫卵组小鼠各5只,第10天处死对照组小鼠,收集小鼠血清和肝组织,通过进行苏木素-伊红染色(HE染色)、马松染色(Masson染色),微孔板分光光度计法检测丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、肝脏羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量,以及实时荧光定量PCR(qPCR)法检测肝纤维化相关基因、Th1和Th2型免疫反应相关基因,分析肝损伤、虫卵肉芽肿和纤维化以及适应性免疫反应等指标,评价经门静脉注射虫卵诱导血吸虫肝病小鼠模型的效果.结果 经门静脉注射虫卵10d和30d后,小鼠肝脏出现明显的虫卵肉芽肿,第10天组虫卵肉芽肿面积与第30天组相比,差异无统计学意义(t=0.975,P=0.332).Masson染色和肝脏羟脯氨酸含量检测显示肝脏发生明显纤维化.qPCR结果表明,与对照组相比,第10天组小鼠肝组织纤维化标志基因α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-Sma)、Ⅰ 型胶原(collagen type Ⅰ alpha 1,Col1 α1)、转化生长因子 β1(transforming growth factor beta 1,Tgfb1)表达水平显著升高,差异有统计学意义(t=6.380、7.533、5.314,P=0.002、0.001、0.007);在第30天时出明显下降,与对照组相比差异无统计学意义(t=0.940、1.529、1.746,P=0.778、0.543、0.457).同时,Th1型免疫反应相关基因肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,Tnf)、干扰素-γ(interferon gamma,Ifng)和 Th2 型免疫反应相关基因白细胞介素 5(interleu-kin-5,Il5)、白细胞介素 13(interleukin-13,Il13)表达水平在注射虫卵10 d后显著升高,差异有统计学意义(t=6.163、4.589、5.651、5.367,P=0.003、0.018、0.020、0.009).此外,各组小鼠血清中的AST、ALT水平无明显变化,差异无统计学意义(t=0.982、3.450,P=0.771、0.074;t=1.164、0.564,P=0.697、0.917).结论 经门静脉注射虫卵诱导血吸虫肝病小鼠模型构建成,研究结果为血吸虫病肝纤维化的机制研究提供了新的建模方法.

目的 初步探讨miR-155/SOCS1协同IL-17在日本血吸虫(Schistosoma japonicum)感染早期病程进展中的作用.方法 BALB/c小鼠腹部经皮感染日本血吸虫尾蚴,分别于第8、14周活杀小鼠,分析小鼠体质量及脾指数的变化,H&E染色观察肝病理形态,实时定量PCR检测miR-155及细胞因子信号抑制蛋白1(SOCS1)的mRNA表达,ELISA检测血清IL-17含量.结果 小鼠感染后一般状况差,体质量减轻,脾明显肿大致脾指数显著升高,感染8周肝组织开始有虫卵沉积,伴大量炎性细胞浸润,出现明显的肉芽肿和纤维化病变,模型鼠肝炎症程度随感染进展减轻,肉芽肿减少.血吸虫感染后miR-155的基因表达和血清IL-17含量明显增加,感染14周显著下降但仍高于正常对照组,而SOCS1的mRNA表达持续增加.结论 miR-155可能协同IL-17促进血吸虫感染早期的炎症免疫反应,通过负调控SOCS1参与血吸虫感染的病程进展.

肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)是一种组织病理学概念,几乎是各种慢性炎症性肝病共同的病理变化过程,临床研究发现即使很晚的HF也可被逆转[1],早期阻断“细胞分泌细胞因子-转化生长因子-β1-刺激HSC激活和增殖”防治HF成为国内外研究的热点[2].西医尚缺乏特效药,认为只有控制了原发病才能有效阻止HF,关键在于病因治疗,如抑制病毒复制、降脂、戒酒、调控免疫、杀灭血吸虫等.中医药应用于HF始于上世纪50年代血吸虫性肝纤维化的治疗[3],随着对HF研究的不断深入,愈加发现中医中药多层次、多靶点综合抗HF有独特的临床优势[4].临床据其“血瘀”证候,紧扣肝络瘀阻的病机是关键[5],祛邪和扶正应双管齐下[6].下面就从血瘀着手论述中医中药治疗HF的理论基础、机制、动物模型、临床应用及前景.

目的 分析肝硬化合并胆囊结石伴胆囊炎患者行腹腔镜胆囊切除术(laparoscopic cholecystec-tomy,LC)治疗的可行性.方法 对2015年6月至2016年8月武警安徽省总队医院普外三科收治的55例肝硬化合并胆囊结石伴胆囊炎患者行LC的临床资料进行回顾性分析.55例中血吸虫性肝硬化29例,病毒性肝炎肝硬化23例,酒精性肝硬化3例.均行终末期肝病模型(model for end-stage liver disease,MELD)评分:MEDL<14分有44例,20分>MELD≥14分有11例.结果 腹腔镜下成功切除胆囊49例,胆囊次全切除5例,1例因术中胆囊床出血而中转开腹.平均手术时间(31.2±8.8)min,术中出血(52.3±5.85)mL,住院时间(7.6±0.7)d.术后肝下引流管引流大量腹水2例,经对症治疗后,康复出院.无肝功能衰竭、肺感染等不良并发症.结论 术前准确评估肝硬化分级,针对性地进行保肝治疗;术者手术熟练,术中谨防出血,LC术治疗肝硬化合并胆囊结石伴胆囊炎是安全有效的.

选取73例血吸虫病患者,以肝活组织检查为“金标准”,评估瞬时弹性诊断仪(Fibroscan)和无创诊断模型对日本血吸虫肝病患者肝纤维化程度预测价值.结果 Fibroscan测定值与肝组织病理等级之间Spearman相关系数r=0.651(P＜0.001).Fibroscan预测F1(轻微肝纤维化)的截断值7.90;预测F2(显著肝纤维化)的截断值为8.15;预测F3(严重肝纤维化)的截断值为10.1;预测F4(肝硬化)的截断值为18.0.ARPI和FIB-4预测血吸虫病患者轻微肝纤维化具有较高价值;Fibroscan预测血吸虫病患者显著和严重肝纤维化时,优于无创诊断模型.

目的 探讨桑黄醇提多糖(PPI)对日本血吸虫感染小鼠氧化应激、肝肉芽肿和肝纤维化的改善作用.方法 采用日本血吸虫尾蚴玻片贴腹感染法建立日本血吸虫肝病小鼠模型.设健康对照组(A组)、感染对照组(B组)、PPI单独治疗组(C组)、吡喹酮单独治疗组(D组)和PPI加吡喹酮混合治疗组(E组),每组各10只小鼠;除A组外,其他各组每只小鼠感染(30±2)条尾蚴.自感染后42 d开始,D、E组小鼠灌胃给予500 mg/kg吡喹酮,连续2d;C、E组给予400 mg/kg PPI灌胃,连续给药30 d.HE染色观察小鼠肝组织病理学改变,测定小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)及小鼠肝组织匀浆中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、谷胱甘肽还原酶(GSH-R)、谷胱甘肽(GSH)含量,采用免疫组化技术检测小鼠肝组织中转化生长因子-β(TGF-β)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平,采用实时荧光定量PCR检测Nrf2、Gsta4基因表达水平.结果 日本血吸虫感染但未予治疗小鼠出现典型血吸虫病肝病病理改变,PPI干预后能有效减轻小鼠肝虫卵肉芽肿及胶原沉积.血吸虫病肝病小鼠肝脏脂质过氧化加剧,诱导了氧化应激,小鼠血清中MDA含量增加,GSH和各种抗氧化酶含量下降.与B组相比,PPI治疗抑制了脂质过氧化,提高了GSH含量,恢复了抗氧化酶活性.此外,PPI治疗可抑制TGF-β信号通路,提升Nrf2、Gsta4基因表达水平.结论 PPI在治疗血吸虫病肝纤维化方面发挥重要作用,其内在机制可能是通过上调Nrf2和Gsta4基因表达、改善氧化应激损伤,从而抑制肝脏虫卵肉芽肿形成和肝纤维化.