目的:探讨氟化物对成釉细胞毒性作用的分子机制。方法:取小鼠成釉细胞株（LS8细胞），根据氟化钠（NaF）终浓度分为对照组（0.0 mmol/L NaF）和染氟组（1.6 mmol/L NaF）。对两组细胞进行转录组测序，筛选差异表达基因（DEGs），对DEGs进行基因本体（GO）分析及基因集富集分析（GSEA）。采用STRING数据库构建DEGs的蛋白-蛋白相互作用（PPI）网络，使用Cytoscape 3.8.0软件对PPI网络进行可视化，筛选关键模块和关键基因。同时，使用实时荧光定量PCR检测关键基因mRNA表达水平，并通过基因表达数据库（GEO数据库）对关键基因进行验证。结果:染氟组与对照组比较，共有709个DEGs，其中上调基因223个，下调基因486个。DEGs的GO分析主要涉及受体配体活性、细胞黏附分子结合、细胞外基质结构成分等分子功能，细胞外基质胶原蛋白、受体复合物、膜筏等细胞组分，外部封装结构组织、细胞外结构组织、细胞外基质组织等生物学过程。全基因集的GSEA发现，白细胞介素-17（IL-17）信号通路、真核生物中的核糖体生物发生、核因子κB（NF-κB）信号通路处于激活状态，脂肪酸降解、丙酮酸代谢、脂肪酸代谢处于抑制状态。构建PPI网络后，得到3个关键模块和4个关键基因[Ⅰ型胶原α1（Col1a1）、Ⅰ型胶原α2（Col1a2）、Ⅴ型胶原α1（Col5a1）和纤维蛋白原-1（Fbn1）]。与对照组比较，染氟组LS8细胞Col1a1、Col1a2、Col5a1、Fbn1 mRNA表达水平均较低（ P均< 0.05），与GEO数据库中基因表达变化趋势一致。 结论:利用生物信息学方法筛选得到的关键基因Col1a1、Col1a2、Col5a1、Fbn1及IL-17、NF-κB信号通路可能与氟化物对成釉细胞的毒性作用密切相关。

目的:探索犬尿氨酸代谢通路对牙周膜干细胞（periodontal ligament stem cells，PDLSC）成骨分化的影响，为研究牙周炎微环境对牙周组织再生的影响提供依据。方法:于2022年6至10月在南京大学医学院附属口腔医院牙周病科、口腔综合科收集19例牙周炎患者（牙周炎组）和19例牙周健康者（牙周健康组）的非刺激性唾液，采用超高效液相色谱-串联质谱检测两组受试者唾液中犬尿氨酸及其代谢产物的含量。对牙周炎组和牙周健康组的牙龈组织通过免疫组化检测吲哚胺2，3-双加氧酶（indoleamine 2，3-dioxygenase，IDO）与芳香烃受体（aryl hydrocarbon receptor，AhR）的表达情况。收集因正畸治疗需要拔除的前磨牙5颗（来自2022年7至11月南京大学医学院附属口腔医院口腔颌面外科12~18岁的5例就诊患者），从离体牙上提取PDLSC，使用成骨诱导分化培养基（对照组）或含有20 μmol/L犬尿氨酸的成骨诱导分化培养基（犬尿氨酸组）培养7 d，对成骨诱导的PDLSC进行碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）染色和ALP活性测定。通过实时荧光定量PCR（real-time fluorescence quantitative PCR，RT-qPCR）检测对照组和犬尿氨酸组PDLSC成骨相关基因ALP、骨钙素、runt相关转录因子2（runt-related transcription factor 2，RUNX2）、Ⅰ型胶原蛋白（collagen type-Ⅰ，COL-Ⅰ）mRNA表达和犬尿氨酸通路相关基因AhR、细胞色素P450家族成员（cytochrome P450 family，CYP）1A1、1B1 mRNA的表达。通过蛋白质印迹法检测对照组和犬尿氨酸组RUNX2、骨桥蛋白（osteopontin，OPN）和AhR蛋白表达情况。培养21 d时，用茜素红染色评估对照组和犬尿氨酸组PDLSC矿化情况。结果:牙周炎组唾液中犬尿氨酸［8.26（0，19.60）nmol/L］及犬尿喹啉酸［11.4（3.34，13.52）nmol/L］含量均显著高于牙周健康组［分别为0.75（0，4.25）、1.92（1.34，3.88）nmol/L］（ Z=-2.84， P=0.004； Z=-3.61， P<0.001）。牙周炎组牙龈组织中IDO（18.33±2.22）和AhR的表达（44.14±13.63）均显著高于牙周健康组（分别为12.21±2.87、15.39±5.14）（ t=3.38， P=0.015； t=3.42， P=0.027）。ALP活性测定显示，与对照组（329.30±19.29）相比，犬尿氨酸组PDLSC ALP活性（291.90±2.35）显著下降（ t=3.34， P=0.029）。RT-qPCR结果显示，犬尿氨酸组PDLSC ALP、骨钙素和RUNX2表达（0.43±0.12、0.78±0.09、0.66±0.10）均较对照组（1.02±0.22、1.00±0.11、1.00±0.01）显著下降（ t=4.71， P=0.003； t=3.23， P=0.018； t=6.73， P<0.001），AhR、CYP1A1 mRNA表达（1.43±0.07、1.65±0.10）均较对照组（1.01±0.12、1.01±0.14）显著升高（ t=5.23， P=0.006； t=6.59， P<0.001），两组间COL-Ⅰ、CYP1B1 mRNA表达差异均无统计学意义（ P>0.05）。蛋白质印迹法结果显示，犬尿氨酸组OPN、RUNX2表达（0.82±0.05、0.87±0.03）与对照组（1.00±0.00、1.00±0.00）相比均显著下降（ t=6.79， P=0.003； t=7.95， P=0.001），AhR表达（1.24±0.14）显著高于对照组（1.00±0.00）（ t=3.04， P=0.039）。 结论:牙周炎患者犬尿氨酸通路异常激活，不仅能上调AhR相关通路，还能抑制PDLSC的成骨向分化。

目的:探索神经生长因子（NGF）在小鼠治疗性血管生成中诱导缺血肢体骨骼肌纤维重塑的机制。方法:雌性ICR小鼠18只，无特定病原体级，6周龄，体重25~30 g。按随机数字表法分为假手术组（ n=6）、空白对照组（ n=6）和NGF基因治疗组（ n=6）。对空白对照组和NGF基因治疗组小鼠进行后肢缺血造模，在术后第7天对假手术组注射生理盐水，空白对照组小鼠进行空质粒转染，NGF基因治疗组小鼠进行NGF基因转染。在术后第21天对患肢血流灌注评估后进行腓肠肌取材。对3组腓肠肌标本进行苏木精-伊红（HE）染色，CD31和增殖细胞核抗原（PCNA）免疫组织化学染色，实时荧光定量PCR检测肌球蛋白重链（MHC）-Ⅰ、MHC-Ⅱa及MHC-Ⅱb的mRNA表达，Western blot检测NGF和过氧化物酶体增殖物激活受体-β/δ（PPAR β/δ）的表达，酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测细胞色素C氧化酶（COX）、异柠檬酸脱氢酶（IDH）和三磷酸腺苷（ATP）表达量。 结果:术后第21天，NGF基因转染组小鼠患肢血流灌注量为（195.70±9.99）PU，低于假手术组（312.15±17.32）PU（ P=0.001），但高于空白对照组（82.11±8.55）PU（ P=0.001）。NGF组的肌肉萎缩程度低于空白对照组，NGF基因转染组的毛细血管密度为（0.34±0.05），高于假手术组（0.11±0.03）和空白对照组（0.27±0.04）（均 P<0.05）。NGF基因转染组的内皮细胞增殖指数为（0.39±0.19），高于假手术组（0.18±0.01）和空白对照组（0.25±0.14）（均 P<0.05）。NGF基因转染组的NGF、PPAR β/δ、COX、IDH、ATP的表达水平，以及MHC-ⅠmRNA表达水平较假手术组和空白对照组均明显升高（均 P<0.05）。 结论:NGF基因转染后能够促进小鼠缺血肢体毛细血管生成，增加其血流灌注，进而诱导骨骼肌肌纤维向Ⅰ型重塑，该过程可能与NGF诱导PPAR β/δ表达，促进骨骼肌细胞有氧代谢有关。

目的:研究严重烧伤大鼠骨形成及骨吸收相关指标的变化。方法:采用实验研究方法。将30只6~8周龄SD雌性大鼠按随机数字表法分为假伤组、12%体表总面积（TBSA）Ⅲ度烧伤组、24%TBSAⅢ度烧伤组，每组10只。于各组大鼠背部进行相应处理，之后仅烧伤大鼠按Parkland公式经腹腔注射补液，创面外涂20 g/L碘伏，直至创面愈合。伤后28 d，取各组大鼠胫骨组织，分别行Masson、抗酒石酸酸性磷酸酶染色，观察新生骨组织、破骨细胞数量；取各组大鼠腹主动脉血制备血清，分别采用甲基百里酚蓝比色法、磷钼酸法测定骨代谢指标血清钙离子、磷离子浓度，采用酶联免疫吸附测定法检测血清中骨形成标志物Ⅰ型前胶原氨基端前肽（P1NP）和骨吸收标志物β-Ⅰ型胶原羧基端肽（β-CTX）水平；取各组大鼠第1腰椎组织，采用实时荧光定量反转录PCR法检测护骨因子、核因子κB受体激活蛋白配体（RANKL）、肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF-6）、活化T细胞核因子1（NFATC1）、c-Fos、c-Src的mRNA表达水平。数据处理采用单因素方差分析、Bonferroni法、Welch检验、Games-Howell检验、Kruskal-Wallis检验、Mann-Whitney U检验及Bonferroni校正。 结果:伤后28 d，与假伤组比较，2个烧伤组大鼠胫骨组织中新生骨组织生成均减少，烧伤面积越大减少越明显；2个烧伤组大鼠胫骨组织中破骨细胞数量相近，均较假伤组明显增多。伤后28 d，3组大鼠血清钙离子浓度、血清中β-CTX水平相近（ P>0.05）；24%TBSAⅢ度烧伤组大鼠血清磷离子浓度明显高于12%TBSAⅢ度烧伤组（ P<0.05），且2个烧伤组大鼠血清磷离子浓度均显著高于假伤组（ P<0.01）；24%TBSAⅢ度烧伤组大鼠血清中P1NP水平明显低于假伤组（ P<0.01）。伤后28 d，假伤组、12%TBSAⅢ度烧伤组、24%TBSAⅢ度烧伤组大鼠第1腰椎组织中护骨因子mRNA表达水平分别为1.01±0.20、1.71±0.83、2.24±0.51，其中24%TBSAⅢ度烧伤组明显高于假伤组（ P<0.01）；24%TBSAⅢ度烧伤组大鼠第1腰椎组织中RANKL mRNA表达水平为1.31±0.17，明显高于假伤组的1.00±0.14与12%TBSAⅢ度烧伤组的0.97±0.10（ P<0.01）；12%TBSAⅢ度烧伤组、24%TBSAⅢ度烧伤组大鼠第1腰椎组织中TRAF-6、NFATC1（ Z=3.141、3.782）、c-Src mRNA表达水平及12%TBSAⅢ度烧伤组大鼠第1腰椎组织中c-Fos mRNA表达水平均明显高于假伤组（ P<0.05或 P<0.01）；12%TBSAⅢ度烧伤组大鼠第1腰椎组织中c-Fos、c-Src mRNA表达水平均明显高于24%TBSAⅢ度烧伤组（ P<0.01）。 结论:严重烧伤可引起大鼠新生骨组织生成减少及破骨细胞数量增多，血清磷离子浓度升高与血清中P1NP水平下降，骨组织中护骨因子、RANKL、TRAF-6、NFATC1、c-Fos、c-Src呈升高趋势，且NFATC1、c-Fos、c-Src随烧伤总面积增加呈下降趋势。

目的:建立神经源性膀胱大鼠模型，分析肾脏形态功能及血管紧张素Ⅱ/转化生长因子β1/Smads（AngⅡ/TGF-β1/Smads）通路相关蛋白表达的变化。方法:48只Sprague-Dawley大鼠随机分为实验组（脊神经离断， n=36）和对照组（假手术， n=12），分别于6周、12周和24周通过尿动力学检测膀胱顺应性，B超检测肾脏形态，血肌酐和尿素氮分析肾功能变化，Masson和HE染色检测肾脏病理改变，免疫组化检测AngⅡ/TGF-β1/Smads通路蛋白在肾脏的分布，Western印迹检测AngⅡ/TGF-β1/Smads通路蛋白表达。 结果:尿动力显示，实验组大鼠基础膀胱压明显高于对照组大鼠。B超显示，与对照组相比，实验组大鼠肾盂直径逐渐增宽（ P<0.05），肾积水逐渐明显。与对照组相比，实验组大鼠BUN和Scr逐渐增加（均 P<0.01）。Masson和HE染色显示，与对照组相比，实验组大鼠胶原沉积面积和肾小管间质评分逐渐增加（均 P<0.01）。免疫组化显示，与对照组相比，实验组血管紧张素Ⅱ一型受体（AT1）、TGF-β受体1（TGF-βR1）、磷酸化Smad2表达逐渐增加（均 P<0.01），通路抑制蛋白Smad6逐渐降低（ P<0.01），且各蛋白在肾脏分布具有一致性。Western印迹显示，随神经离断时间延长，AT1、TGF-βR1、磷酸化Smad2、Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达逐渐增加，Smad6逐渐降低（均 P<0.05）。 结论:双侧脊髓神经切断引起的神经源性膀胱，由于膀胱功能障碍，膀胱压力增加，引起肾积水，肾小球结构破坏，AngⅡ/TGF-β1/Smads通路激活，肾脏发生纤维化。该方法有效，具有临床相似性，为探索神经源性膀胱的治疗方法奠定了基础。

目的:检测Luminal B型乳腺癌酪氨酸3-单加氧酶/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白ζ(YWHAZ)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)蛋白表达并研究其临床价值。方法:选择2014年1月至2017年12月上海交通大学医学院附属第六人民医院诊治的312例Luminal B型乳腺癌患者为研究对象。采用采用链霉亲合素-生物素复合物法检测乳腺癌患者肿瘤组织及癌旁组织YWHAZ及IGF-1蛋白表达。分析YWHAZ及IGF-1蛋白表达与临床病理因素和预后的关系。Cox回归模型分析Luminal B型乳腺癌预后的影响因素。计数资料比较采用 χ2检验。Kaplan-Meier法分析YWHAZ、IGF-1蛋白表达与预后的关系，多因素Cox回归分析乳腺癌预后的影响因素。 结果:Luminal B型乳腺癌肿瘤组织中YWHAZ、IGF-1蛋白阳性率显著高于癌旁组织(YWHAZ蛋白表达阳性率为77.56%比19.87%，IGF-1蛋白表达阳性率为62.50%比15.06%)，差异有统计学意义( χ2＝205.526、147.853， P<0.05)。有淋巴结转移、Ⅲ期、人表皮生长因子受体2(Her-2)阳性乳腺癌患者肿瘤组织YWHAZ蛋白表达阳性率高于无淋巴结转移、Ⅰ~Ⅱ期、Her-2阴性乳腺癌患者(分别为88.28%比68.26%、90.70%比68.31%、86.18%比57.90%)；有淋巴结转移、Ⅲ期、细胞核增殖抗原(Ki-67)阳性乳腺癌患者肿瘤组织IGF-1蛋白表达阳性率显著高于无淋巴结转移、Ⅰ~Ⅱ期、Ki-67阴性乳腺癌患者，差异有统计学意义( χ2＝17.862、21.800、30.367、18.562、10.088、9.725， P<0.05)。YWHAZ和IGF-1蛋白表达阳性乳腺癌患者预后良好率低于YWHAZ和IGF-1蛋白阴性患者(预后良好率分别为44.21%比60.00%、41.54%比58.12%)，差异有统计学意义( χ2＝9.986、18.028， P<0.05)。淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ期、YWHAZ蛋白表达阳性及IGF-1蛋白表达阳性为Luminal B型乳腺癌患者不良预后的危险因素( P<0.05)。 结论:YWHAZ和IGF-1在Luminal B型乳腺癌组织中表达增加，与其不良预后有关，可用于Luminal B型乳腺癌病情及预后评估。

目的:探究激活素A受体Ⅰ型(ACVR1)在胃癌中的表达、预后预测价值及临床意义。方法:通过癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载375例胃癌转录组数据、32例正常胃组织转录组数据及临床相关参数，利用Wilcoxon秩和检验分析ACVR1 mRNA的表达差异，采用卡方检验分析ACVR1表达量与临床病理特征的相关性。通过基因表达交互网站(GEPIA)及单多因素回归分析胃癌患者预后影响因素。其中，采用Cox回归模型进行单因素和多因素分析。同时，通过R语言分析ACVR1基因的相关通路，探索其在胃癌中的潜在机制。结果:ACVR1在胃癌组织中的mRNA表达量显著高于正常组织[4.673(4.247，5.087)比3.699(3.332，4.426)， Z＝16.6， P<0.01]，其表达量与肿瘤浸润深度呈正相关( χ2＝11.521， P<0.01)；TCGA数据库分析显示胃癌组织中ACVR1高表达患者预后差(Logrank P<0.01)；多因素分析结果显示ACVR1表达(风险比＝1.639，95%可信区间：1.102～2.436， P<0.05)是影响胃癌预后的独立因素；京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析显示ACVR1参与磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)信号通路、神经活性配体-受体相互作用、黏着斑、钙信号、人类乳头状瘤病毒感染等相关通路。 结论:ACVR1 mRNA在胃癌组织中高表达，且与胃癌患者的不良预后密切相关，其可能通过PI3K-Akt信号通路、神经活性配体-受体相互作用、黏着斑通路等在胃癌中发挥作用。

目的:探讨微小RNA-210-3p(miR-210-3p)在结直肠癌细胞中的表达以及对细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:体外培养人结直肠癌细胞系RKO、SW480、SW620、DLD1和人正常结肠上皮细胞系NCM460。将miR-210-3p抑制剂(inhibitor)及inhibitor阴性对照(NC)转染于RKO细胞中，设为miR-210-3p inhibitor实验组以及NC组。使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-210-3p表达水平。采用细胞计数实验(CCK-8)和平板克隆实验检测细胞增殖活性。划痕愈合实验、Transwell迁移和侵袭实验分别检测细胞的迁移及侵袭能力。qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)分别检测激活素A的ⅠB型受体(ACVR1B) mRNA和蛋白的表达水平。两样本间比较采取 t检验，多组间比较采用单因素方差分析(ANOVA)。 结果:miR-210-3p在结直肠癌细胞系中表达均高于人正常结肠上皮细胞，以RKO中升高最为明显(2.33±0.51、5.54±0.95、1.80±0.15、3.34±0.45比1.00±0.02， P<0.01)，差异有统计学意义。体外转染实验构建低表达miR-210-3p的miR-210-3p inhibitor实验组和NC组，qRT-PCR测量实验组miR-210-3p表达量低于对照组(0.44±0.04比1.02±0.27， t＝3.26， P<0.05)，差异有统计学意义。生物学实验验证miR-210-3p对结直肠癌细胞系的增殖、迁移和侵袭的影响。CCK-8表明，miR-210-3p inhibitor组24、48、72 h细胞吸光度明显低于NC组(0.33±0.01比0.41±0.01、0.51±0.01比0.72±0.03、0.80±0.02比1.01±0.08， t＝0.378、17.900、23.920、5.494， P<0.05)，差异有统计学意义。平板克隆试验显示，miR-210-3p inhibitor组细胞集落个数明显少于NC组[(370.67±13.80)个比(518.67±11.50)个， t＝14.270， P<0.05]，差异有统计学意义。细胞划痕愈合实验表明miR-210-3p inhibitor组划痕愈合度低于NC组[(7.91±0.55)%比(21.22±1.00)%， t＝20.380， P<0.05]差异有统计学意义。miR-210-3p inhibitor组在Transwell迁移和侵袭实验中通过微孔膜的细胞数显著低于NC组[(145.00±5.67)个比(208.00±10.54)个， t＝9.157， P<0.05；(122.33±8.02)个比(195.67±6.81)个， t＝12.070， P<0.05]，差异有统计学意义。使用预测软件(miRDB、miRWalk和StarBase 2.0)预测，并通过qRT-PCR及Western blot验证潜在靶点，结果显示ACVR1B作为miR-210-3p靶基因位点调控结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭，miR-210-3p inhibitor组ACVR1B mRNA表达和蛋白表达倍数明显高于NC组，mRNA表达(2.00±0.03比1.00±0.11， t＝14.540， P<0.05)，差异有统计学意义；蛋白相对倍数为[(67.89±0.65)%比(37.85±0.86)%， t＝48.260， P<0.05]，差异有统计学意义。 结论:人结直肠癌细胞系中miR-210-3p显著高表达，并通过靶向ACVR1B促进结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

Toll样受体(TLR)7 是TLR家族中的一员,是Ⅰ型跨膜糖蛋白,由细胞质Toll/白细胞介素-1 受体同源性(TIR)信号传导结构域和包含19～25 个串联富含亮氨酸重复基序的外部抗原识别结构域组成.人体内TLR7 主要分布在浆树突状细胞(pDC)和B细胞的胞体内体膜上,通过高尔基体的囊泡从内质网穿梭至内体.内体膜上的TLR7 与病毒来源的单链RNA分子或咪唑啉类似物结合从而被激活,进一步诱导Ⅰ型干扰素的合成,从而启动辅助性T淋巴细胞(TH)1 细胞的激活,快速招募炎症细胞到感染部分,发挥抗病毒、抗肿瘤以及抗过敏的功能.TLR7 激活后由于具有调节TH1/TH2 细胞比例的作用,其配体用于治疗过敏性疾病的研究日益受到关注.该文围绕TLR7 激动剂对过敏性哮喘、过敏性鼻炎以及过敏性脑炎的临床前研究和临床试验研究进行综述,以期为过敏性疾病的治疗提供新思路.

[目的]探讨加减补阳还五汤是否通过沉默信息调节因子 1(SIRT1)途径激活自噬改善糖尿病肾病(DKD)小鼠肾组织损伤.[方法]将DKD小鼠随机分为模型组、中药组,db/m组小鼠作为正常组.给药 8周后,检测小鼠血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HBA1c)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、尿微量白蛋白(mALB)水平;实时定量反转录聚合酶连锁反应(qRT-PCR)和免疫组化检测小鼠肾组织Wilms肿瘤基因 1(WT1)、nephrin及podocin的表达;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测小鼠肾组织SIRT1、人微管相关蛋白轻链 3B(LC3B)、自噬相关蛋白 7(Agt7)、自噬受体蛋白p62(P62)、Bcl-2 同源结构域蛋白抗体(Beclin1)、B细胞淋巴瘤因子 2(Bcl-2)、BCL-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达;同时光镜观察肾脏病理形态学变化.[结果]中药干预后,小鼠肾脏病理改变轻于模型组;尿微量白蛋白(mAlb)、血脂(TC、TG)下降,肾功能(BUN、Scr)改善;同时抑制了肾组织P62、Bax、Caspase-3 表达,上调了SIRT1、Beclin-1、Agt7、Bcl-2、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ的表达,并改善了肾组织足细胞标志蛋白WT1、nephrin及podocin的表达(P＜0.05或P＜0.01),但对血糖水平无明显影响(P＞0.05).[结论]加减补阳还五汤可通过增强DKD小鼠肾脏细胞自噬,并抑制其凋亡,保护足细胞,进而发挥肾脏保护作用.其中SIRT1 途径可能是其促进自噬的潜在途径.