目的:探讨circSEPT9在胶质瘤放射抵抗中的作用及其分子机制。方法:收集2019年1月—2022年1月在郑州大学第一附属医院接受手术及术后放疗的40例脑胶质瘤患者术后组织标本，分为放射敏感组和放射抵抗组，两组胶质瘤组织采用实时反转录PCR（RT-qPCR）检测circSEPT9的表达。以人胶质瘤细胞U251为基础构建放射抵抗的胶质瘤细胞U251R，将U251R细胞分为阴性对照组（si-NC组）、circSEPT9敲低组（si-circSEPT9组）、阴性对照+照射组（si-NC+4 Gy组）、circSEPT9敲低+照射组（si-circSEPT9+4 Gy组）、circSEPT9敲低+抑制对照+照射组（si-circSEPT9+NC抑制剂+4 Gy组）、circSEPT9敲低+miR-432-5p抑制+照射组（si-circSEPT9+miR-432-5p抑制剂+4 Gy组）。双荧光素酶报告基因实验验证circSEPT9与miR-432-5p的靶向关系。克隆形成实验检测U251R细胞存活率，流式细胞术检测U251R细胞凋亡率，采用独立样本 t检验比较两组患者胶质瘤组织circSEPT9的表达量，采用单因素方差分析比较各组细胞的存活率和凋亡率。 结果:circSEPT9在放射抵抗组患者胶质瘤组织中的表达量升高（1.00±0.18∶3.25±0.13， P<0.05）。与si-NC组比较，si-circSEPT9组U251R细胞存活分数降低，细胞凋亡率显著升高（9.24±0.83∶19.36±2.13， P<0.05）。给予细胞4、6、8 Gy照射后，与si-NC组相比，si-circSEPT9组细胞的存活分数显著降低（ P均<0.05）。与si-NC+4 Gy组相比，si-circSEPT9+4 Gy组细胞的凋亡率增加（18.83±1.94∶35.23±3.56， P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验显示，circSEPT9可靶向并负调控miR-432-5p的表达。与si-circSEPT9+NC抑制剂+4 Gy组比较，si-circSEPT9+miR-432-5p抑制剂+4 Gy组U251R细胞存活分数显著升高（ P<0.05）。 结论:敲低circSEPT9通过靶向miR-432-5p促进细胞凋亡，从而增强胶质瘤细胞的放射敏感性。

目的:探讨微小RNA(miR)-432与异柠檬酸脱氢酶( IDH)野生型胶质瘤的细胞增殖迁移、患者总生存期及三基序蛋白质38( TRIM38)基因表达的关系。 方法:(1)下载中国胶质瘤基因组图谱(CGGA)数据库中198例胶质瘤患者(81例 IDH突变型、106例 IDH野生型、11例未知型)的临床资料、miRNA表达芯片数据及5例非肿瘤对照脑组织样本的miRNA表达芯片数据，比较miR-432在不同 IDH突变状态的胶质瘤亚型间及与非肿瘤对照样本间的表达差异。依据 IDH野生型胶质瘤样本中miR-432表达水平的中位值，将患者分为miR-432高表达组( n=51)与miR-432低表达组( n=53)，采用Kaplan-Meier生存分析比较2组间总生存期的差异。采用单因素Cox回归分析和多因素Cox回归分析筛选 IDH野生型胶质瘤患者总生存期的影响因素。应用Pearson相关性分析检验 IDH野生型胶质瘤样本中miR-432与 TRIM38基因表达水平的关系。(2)体外培养人胶质瘤细胞系U251，并分为miR-432无义序列对照组和miR-432类似物组。采用细胞计数试剂(CCK)-8法检测2组细胞培养第1~5天时的活性，采用Transwell小室实验检测2组细胞的迁移能力，采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组细胞中 TRIM38 mRNA的表达水平。(3)分别将野生型及突变型含TRIM38 3'-末端非翻译区(3'-UTR)的pGL3荧光报告载体结合miR-432无义序列、miR-432类似物转染U251细胞，分为miR-432无义序列+野生型TRIM38 3'-UTR组、miR-432类似物+野生型TRIM38 3'-UTR组、miR-432无义序列+突变型TRIM38 3'-UTR组及miR-432类似物+突变型TRIM38 3'-UTR组，并应用酶标仪检测各组细胞的荧光素酶活性。 结果:(1)与 IDH突变型胶质瘤样本相比， IDH野生型胶质瘤样本中miR-432的表达水平明显降低，差异有统计学意义( P<0.05)。miR-432低表达组的总生存期较miR-432高表达组明显缩短，差异有统计学意义( P<0.05)。患者的年龄、肿瘤级别及miR-432表达分组与 IDH野生型胶质瘤患者的总生存期相关( P<0.05)，但miR-432表达分组并不是患者总生存期的独立影响因素( P>0.05)。 IDH野生型胶质瘤样本中miR-432与 TRIM38 mRNA的表达水平呈负相关关系( r=-0.255， P=0.018)。(2)与无义序列对照组比较，miR-432类似物组培养第2~5天时的细胞活性明显降低，迁移细胞数目明显减少， TRIM38 mRNA表达水平明显降低，差异均有统计学意义( P<0.05)。(3)miR-432类似物+野生型TRIM38 3'-UTR组的荧光素酶活性明显低于miR-432无义序列+野生型TRIM38 3'-UTR组细胞，差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:miR-432在 IDH野生型胶质瘤组织中表达降低，且与患者的预后不良有关；过表达miR-432能够抑制胶质瘤细胞的增殖迁移能力，这或许与其能特异性结合 TRIM38基因并干扰该基因表达有关。

目的 探讨miRNA-432-5p在脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞损伤中的作用及可能机制.方法 人肺泡上皮细胞A549随机分为对照组、LPS组、miRNA-432-5p mimics组及miRNA-432-5p siRNA组.利用CCK-8实验检测细胞的活性;利用ELISA法检测细胞培养液中炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)的含量;利用RT-qPCR检测细胞中miRNA-432-5p mRNA的表达;利用Hoechst染色检测细胞的凋亡情况;利用Western blot检测细胞中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase1)、白细胞介素1β(IL-1β)蛋白的表达.结果 LPS组细胞的活性OD值(6 h:0.809±0.09;12 h:0.601±0.09;24 h:0.485±0.43)明显低于对照组的1.000±0.00,差异均具有统计学意义(P<0.05);LPS组细胞中miRNA-432-5p mRNA表达水平为1.563±0.10,明显高于对照组的1.000±0.00,细胞凋亡率为(41.52±1.83)%,明显高于对照组的(0.000±0.00)%,差异均有统计学意义(P<0.05);LPS组培养液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量分别为(36.32±6.07)pg/mL、(45.08±3.75)pg/mL、(40.87±6.65)pg/mL,明显高于对照组的(5.27±0.84)pg/mL、(5.57±0.65)pg/mL、(3.26±0.85)pg/mL,差异均具有统计学意义(P<0.05),LPS组细胞中的NLRP3、Caspase1和IL-1β蛋白表达水平分别为0.734±0.08、0.305±0.06、0.430±0.05,明显高于对照组的0.163±0.03、0.025±0.01、0.032±0.01,差异均具有统计学意义(P<0.05).miRNA-432-5p mimics组细胞凋亡率为(24.23±3.09)%,明显低于LPS组的(41.52±1.83)%,细胞活性为0.639±0.09,明显高于LPS组的0.468±0.07,差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p mimics组培养液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量分别为(22.85±4.01)pg/mL、(29.15±5.22)pg/mL、(20.63±3.89)pg/mL,明显低于LPS组的(36.32±6.07)pg/mL、(45.08±3.75)pg/mL、(40.87±6.65)pg/mL,差异均具有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p mimics组细胞中的NLRP3、Caspase1和IL-1β蛋白表达水平分别为0.473±0.04、0.121±0.02、0.279±0.04,明显低于LPS组的0.734±0.08、0.305±0.06、0.430±0.05,差异均有统计学意义(P<0.05).miRNA-432-5p siRNA组细胞凋亡率为(56.44±3.25)%,明显高于LPS组的(41.52±1.83)%,细胞活性为0.348±0.06,明显低于LPS组的0.468±0.07,差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p siRNA组培养液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量分别为(51.08±4.12)pg/mL、(53.61±4.83)pg/mL、(59.97±3.62)pg/mL,明显高于LPS组的(36.32±6.07)pg/mL、(45.08±3.75)pg/mL、(40.87±6.65)pg/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p siRNA组细胞中的NLRP3、Caspase1和IL-1β蛋白表达水平分别为0.969±0.12、0.430±0.09、0.575±0.07,明显高于LPS组的0.734±0.08、0.305±0.06、0.430±0.05,差异均具有统计学意义(P<0.05).结论 miRNA-432-5p可通过抑制NLRP3炎性小体通路的激活,对受损细胞发挥保护作用.

目的 探讨微小RNA(miR)-432-5p对胃癌细胞增殖、转移和放疗敏感性的作用及在此过程中与DEAD-盒解旋酶41(DDX41)的靶向调控关系.方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测不同胃癌细胞中miR-432-5p、DDX41的表达,将HGC-27细胞进行转染并分为NC组(未转染质粒)、miR-NC组(转染miR-432-5p mimics阴性对照)、miR-432-5p组(转染miR-432-5p mimics)、miR-432-5p+pcDNA-NC组(转染miR-432-5p和pcDNA-DDX41阴性对照)、miR-432-5p+pcDNA-DDX41组(转染 miR-432-5p mimics和pcDNA-DDX41).48 h后采用qRT-PCR检测各组细胞中miR-432-5p、DDX41的表达,MTT检测各组细胞增殖活性,Transwell实验检测各组细胞的迁移能力,克隆形成实验和流式细胞术检测各组细胞的放疗敏感性,双荧光素酶报告基因实验验证miR-432-5p和DDX41的靶向关系,建立裸鼠移植瘤模型并检测肿瘤生长情况,蛋白质印迹法检测裸鼠肿瘤组织中DDX41蛋白的表达.结果 与正常细胞比较,胃癌细胞中 miR-432-5p水平降低(P<0.05),DDX41 mRNA水平升高(P<0.05);与NC组和miR-NC组比较,miR-432-5p组细胞的存活率、DDX41 mRNA水平均降低,迁移细胞数减少(P<0.05),miR-432-5p水平升高、放疗敏感性增强(P<0.05);DDX41过表达逆转了miR-432-5p对胃癌细胞增殖、迁移及放疗敏感性的作用(P<0.05);裸鼠移植瘤实验发现结果显示,与NC组和miR-NC组比较,miR-432-5p组小鼠肿瘤组织体积、重量及DDX41蛋白表达均降低(P<0.05).结论 miR-432-5p通过靶向下调DDX41来抑制胃癌细胞的增殖和转移,增强细胞的放疗敏感性.

Characterized by positive symptoms(such as changes in behavior or thoughts,including delusions and hallucinations),negative symptoms(such as apathy,anhedonia,and social withdrawal),and cognitive impairments,schizophrenia is a chronic,severe,and disabling mental disorder with late adolescence or early adulthood onset.Antipsychotics are the most commonly used drugs to treat schizophrenia,but those currently in use do not fully reverse all three types of symptoms characterizing this condition.Schizophrenia is frequently misdiagnosed,resulting in a delay of or inappropriate treatment.Abnormal expression of microRNAs is connected to brain development and disease and could provide novel biomarkers for the diagnosis and prognosis of schizophrenia.The recent studies reviewed included microRNA profiling in blood-and urine-based materials and nervous tissue materials.From the studies that had validated the preliminary findings,potential candidate biomarkers for schizophrenia in adults could be miR-22-3p,-30e-5p,-92a-3p,-148b-5p,-181a-3p,-181a-5p,-181b-5p,-199b-5p,-137 in whole blood,and miR-130b,-193a-3p in blood plasma.Antipsychotic treatment of schizophrenia patients was found to modulate the expression of certain microRNAs including miR-130b,-193a-3p,-132,-195,-30e,-432 in blood plasma.Further studies are warranted with adolescents and young adults having schizophrenia and consideration should be given to using animal models of the disorder to investigate the effect of suppressing or overexpressing specific microRNAs.

目的 探讨缺氧微环境下肝细胞癌(简称肝癌)细胞释放的外泌体对巨噬细胞极化的影响及其机制.方法 通过免疫荧光染色、透射电镜、Western blotting明确缺氧对肝癌细胞外泌体释放的影响;通过流式细胞术、免疫荧光染色和实时定量PCR检测缺氧肝癌细胞来源外泌体对M2型巨噬细胞极化、免疫微环境的影响;通过免疫组织化学染色、免疫荧光染色、荧光素酶报告基因、Western blotting检测缺氧肝癌细胞来源外泌体miR-432-5p促进M2型巨噬细胞极化的机制.结果 缺氧可促进肝癌细胞分泌外泌体,促进M2型巨噬细胞极化,其发挥作用的机制是外泌体中的miR-432-5p靶向SOCS3,调控SOCS3/STAT3信号通路实现的.结论 缺氧肝癌细胞来源外泌体miR-432-5p介导的M2型巨噬细胞极化是通过SOCS3/STAT3信号通路实现的,这一信号通路为肝癌的靶向治疗提供了新方向.

MicroRNA是一类20-24 nt核苷酸长度的参与基因转录后水平调控的非编码小分子RNA.利用高通量测序技术获得鳜(Siniperca chuatsi)孵化后第3天、第17天和第28天全鱼miRNA转录组,共鉴定出1 084个miRNAs,其中432个已知、624个保守、28个新发现.第17天时鉴定出的miRNA个数最多,为926个.在3个发育时期都表达的有628个miRNAs,只在各时期中特异表达的分别有71、104和70个miRNAs.一些与鳜发育相关的miRNAs在上述3个时期呈现持续上调或下调的表达特点.进一步的实验表明,miR-199-5p和miR-203可能与鳜生长发育相关,相应的靶基因分别是WnT和MyoD.

目的 研究长链非编码RNA(lncRNA)Dancr在肝脏中的时空表达规律,探索其与糖异生的可能调控关系与分子机制.方法 建立小鼠饥饿-再喂养模型、高脂饮食诱导的肥胖(high-fat diet,HFD)模型,并以磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶、葡萄糖-6-磷酸酶为阳性对照,检测Dancr在两组模型小鼠肝脏中的表达;分离小鼠主要脏器组织,检测不同组织中Dancr的表达量;运用NCBI、UCSC、RegRNA、TargetScan等数据库,分析Dancr的序列特征,预测与其相互作用的miRNA,并对miRNA下游靶基因进行基因本体和京都基因与基因组百科全书分析.采用Student-t检验分析各组之间差异的显著性,采用单因素方差分析比较多组间差异.结果 Dancr的表达量随饥饿进程持续升高,并在16 h达到最高,再进食后迅速恢复正常水平(4.20±0.27比1.00±0.23,t=22.10,P<0.01).在HFD小鼠肝脏中Dancr表达量同样显著升高(1.69±0.30比1.00±0.25,t=4.33,P<0.01).Dancr在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、骨骼肌、小肠、胃、白色脂肪组织、棕色脂肪组织和脑组织中表达差异有统计学意义(F=180.32,均P<0.01),Dancr在肝脏中的表达量显著高于除脾、肺外的其余组织(t=6.03～36.19,均P<0.01).在线分析Dancr位于chr5:74,093,083-74,090,355,全长1060 bp,由2个外显子构成,可能存在9个与之相互作用的miRNAs(mmu-let-7i-5p、mmu-miR-134-5p、mmu-miR-326-5p、mmu-miR-433-5p、mmu-miR-497-5p、mmu-miR-504-3p、mmu-miR-1906、mmu-miR-432、mmu-miR-5620-5p),调节下游2124个靶基因,其中多条基因与糖异生调控相关.结论 Dancr的表达受生理及病理性糖异生信号影响,可能介导肝脏糖异生的调控,且生物信息学分析为后续实验提供了一定的数据支持,有助于我们进一步了解Dancr在糖异生调控中的分子机制.

目的:了解microRNA在乳腺癌中的表达情况,以及其对肿瘤化疗药物耐药性的影响.方法:获取GEOGSE71142的microRNA表达数据,通过edgeR和热图寻找乳腺癌耐药和药物敏感两组中差异性表达的microRNA.收集我院2012年至2015年100例病理诊断为乳腺癌的患者的癌及癌旁组织.使用qRT-PCR检测microRNA在癌和癌旁中的表达情况以及在MCF-7中的表达情况;应用配对t检验分析microRNA和T、N、M分期之间的关系.使用倾向值匹配模型(PSM),将患者分为耐药组和非耐药组,使用qRT-PCR检测microRNA的表达情况.使用Logistic回归模型进行多因素分析.按照microRNA的表达情况,进行亚组分析.结果:使用edgeR对GSE71142进行差异性表达分析,共筛选出了1 432个差异性表达的microRNA.应用qRT-PCR,配对样本t检验发现miR-148a-3p(P ＜0.05)、miR-128(P ＜0.05)、miR-466(P ＜0.05)、miR-31-5p(P ＜0.05)、miR-588(P ＜0.05)在癌和癌旁中差异性表达.卡方检验提示T分期、N分期、Her-2表达以及Cyclin-D1的表达情况与紫杉醇(PTX)耐药性有关(P＜0.05).PSM匹配后,在PTX耐药及PTX敏感中,qRT-PCR发现miR-148a-3 p、miR-128、miR-588呈差异性表达(P＜0.05).ROC曲线提示miR-148a-3p(AUC:0.864,95％ CI:0.737～0.991,P＜0.05)、miR-128(AUC:0.859,95％ CI:0.733～0.986,P＜0.05)和miR-588(AUC:0.777,95％ CI:0.623～0.930,P＜0.05).Logistic回归提示miR-148a-3p(OR=18.36,p＜0.05)和miR-128是PTX耐药的保护因素(OR =5.26,P＜0.05);而miR-588是PTX耐药的危险因素(OR =0.35,P＜0.05).miR-148a-3p的亚组分析提示其高表达和低表达均与Cyclin-D1的表达有关.结论:miR-148a-3 p、miR-128、miR-466、miR-31-5 p、miR-588有成为乳腺癌肿瘤标志物的可能;miR-148a-3p、miR-128、miR-588与乳腺癌的PTX耐药性有关;miR-]48a-3p、miR-128可以用于判断患者的PTX耐药情况.miR-148a-3p可能通过Cyclin-D1调控PTX耐药性,但需要进一步的分子学机制研究证实.

目的:探索血浆及外周血单个核细胞(PBMC)中微小RNA (miRNA)在精神分裂症(SZ)诊断中的价值. 方法:根据文献报道筛选出与SZ相关的7种miRNA(has-miR-449a,has-miR-34a-5p,has-miR-652-3p,has-miR-564,has-miR-432-5p,has-miR-548d-5p和has-miR-572);提取35例初诊的SZ患者(患者组)及15名健康体检者(对照组)的抗凝全血的血浆及PBMC中的RNA,采用实时逆转录聚合酶链式扩增反应技术测定血浆及PBMC中这7种miRNA水平,计算其相对表达量. 结果:患者组血浆及PBMC中4种miRNA(miR-652-3p,miR-564,miR-432-5p和miR-548d-5p)相对表达量较对照组明显增加(P均＜0.05);患者组7种miRNA的相对表达量血浆明显高于PBMC(P均＜0.05);多变量ROC曲线显示,患者组血浆miRNA(has-miR-652-3p,has-miR-564,has-miR-548 d-5p)ROC曲线下面积为98％,灵敏度为90.9％,特异度为95.4％;PBMC miRNA(has-miR-652-3p,has-miR-564,has-miR-432-5p以及has-miR-548 d-5p) ROC曲线下面积为86％;灵敏度为88.2％,特异度为78.3％. 结论:SZ患者血浆及PB-MC中的miRNA(miR-652-3p,miR-564,miR-432-5p和miR-548d-5p)相对表达量明显增高;血浆miRNA更有潜力成为SZ的分子诊断标志物.