目的 研究桃红四物汤(Taohong Siwu Decoction,THSWD)对缺血性脑卒中的微小RNA(microRNA,miR-NA)表达谱的影响,探讨THSWD治疗缺血性脑卒中的分子机制.方法 建立大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)诱导的局灶性脑缺血大鼠模型,采用单细胞RNA测序技术检测THSWD治疗后MCAO大鼠miRNA表达谱.采用GO和KEGG富集分析方法分析miRNA作用于靶基因的功能.对表达差异显著的miRNA进行RT-qPCR实验验证.结果 THSWD干预后,MCAO大鼠脑梗死区有13个miRNA表达发生变化,其中6个miRNA表达上调,7个miRNA表达下调.利用miRanda进行预测,确定了这13个miRNA的靶基因,构建了miRNA-mRNA网络,通过RT-qPCR验证了其中6个差异表达的miRNA(rno-miR-653-5 p、rno-miR-216 b-5 p、rno-miR-3547、rno-miR-217-5p、rno-miR-758-3p和rno-miR-223-3p).结论 THSWD可以通过逆转某些miRNA的异常表达来治疗缺血性脑卒中.

目的 探究微小RNA(microRNA,miR)-758-3p在口腔鳞状细胞癌(OSCC)的表达及对OSCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测正常牙龈上皮细胞(human gingival epithelial cells,HGE)及OSCC细胞系(CAL27、SCC9 和SCC25)中miR-758-3p的表达水平.将miR-758-3p模拟物转染至CAL27细胞中,构建过表达miR-758-3p细胞模型.采用WST-1 检测细胞增殖能力;Transwell法检测迁移和侵袭的影响;Western blot检测过表达miR-758-3p对CAL27 细胞中MMP2 及MMP9 蛋白水平的影响.结果 与HGE细胞比较,OSCC细胞系CAL27、SCC9 和SCC15 中miR-758-3p表达下调(P＜0.05),其中CAL27 细胞miR-758-3p表达量最低.miR-758-3p模拟物转染后,CAL27 细胞中miR-758-3p的表达水平显著增高(P＜0.05).miR-758-3p的过表达能显著抑制CAL27 的细胞增殖、迁移和侵袭能力(P＜0.05),明显抑制MMP2 和MMP9 蛋白的表达(P＜0.05).结论 miR-758-3p在OSCC细胞CAL27 中呈较低表达,过表达miR-758-3p可以显著抑制CAL27 细胞的增殖、迁移和侵袭.

胆固醇稳态受多种因素的密切调节,而胆固醇代谢紊乱与2型糖尿病、动脉粥样硬化、非酒精性脂肪性肝病等多种疾病的发生、发展密切相关.微小RNA(microRNA,miRNA)是脂代谢的转录后调控因子,miRNA-185-5p、miRNA-758-5p、miRNA-33a、miRNA-21、miRNA-122和miRNA-370与胆固醇的合成有关,miRNA-33、miRNA-144、miRNA-26、miRNA-758-3p、miRNA-106b、miRNA-10b、miR-NA-302、miRNA-145、miRNA-27a/b和miRNA-613与胆固醇的转运有关,多种microRNA共同参与调控胆固醇代谢中关键蛋白的表达,调控胆固醇的稳态平衡.

目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-758-3p在舌鳞状细胞癌细胞株中的表达,探讨其对肿瘤细胞增殖和迁移的影响.方法 采用实时定量反转录聚合酶链反应(qPCR)检测miR-758-3p在人舌鳞状细胞癌细胞株和人正常口腔黏膜细胞细胞中的表达.脂质体转染miR-NC(对照组)或miR-758-3p(实验组)至舌鳞状细胞癌细胞.生物信息学预测及双荧光素酶报告基因验证miR-758-3p和靶基因的靶向关系.qPCR和Western blot检测TRIM44基因及下游蛋白的表达.流式细胞术、MTT法和Transwell迁移实验分别检测过表达miR-758-3p对细胞周期、增殖能力和迁移能力的影响.结果 miR-758-3p在舌鳞状细胞癌细胞株中呈现低表达(P＜0.01).TRIM44为miR-758-3p的直接靶基因(P＜0.01).转染miR-758-3p后的TSCCA中,TRIM44基因表达降低(P＜0.05),细胞周期进展被抑制(P＜0.01),增殖能力明显下降(P＜0.01),细胞迁移能力受到抑制(P＜0.01).结论 miRNA-758-3p在舌鳞状细胞癌细胞株中表达降低,通过靶向干扰TRIM44基因的表达抑制舌鳞状细胞癌细胞增殖和迁移.

目的 观察微小RNA(miR)-758-3p对鼠双微体基因2(MDM2)表达的调控作用及对胃癌细胞MGC803侵袭和增殖的影响.方法 采用生物信息学软件预测MDM2为miR-758-3p靶基因,分别将野生型MDM2基因3'端非翻译区荧光素酶报告基因载体和miR-758-3p靶序列突变型载体及相应的miRNA转染至胃癌细胞MGC803,双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性.采用脂质体转染法将miR-758-3p模拟物转入胃癌细胞MGC803,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测转染效果,Real-time PCR和Western blotting检测转染miR-758-3p后在胃癌细胞中MDM2的表达水平.Transwell实验和CCK-8实验检测细胞侵袭和增殖.采用SPSS 20.0进行统计分析.结果 双荧光素酶报告基因检测系统证实miR-758-3p能够靶向调控MDM2基因(P＜0.05).胃癌细胞MGC803转染miR-758-3p模拟物后,miR-758-3p的表达水平(6.68±0.53)明显高于miR-NC组(0.84±0.12),差异有统计学意义(P＜0.01).与miR-NC组比较,转染miR-758-3p模拟物后MGC803细胞中MDM2的表达下调(P＜0.05).miR-NC组和miR-758-3p组侵袭细胞数量分别为(136.00±16.62)个和(79.49±6.42)个,敲减MDM2之后,细胞的侵袭能力明显下降(P＜0.05).CCK-8结果显示,与miR-NC组的增殖比较,转染miR-758-3p组胃癌细胞MGC803的增殖能力明显降低,两组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-758-3p能够通过靶向调控MDM2而降低胃癌细胞MG C.803的侵袭和增殖能力.

目的 检测长链非编码RNA肿瘤易感候选者9(lncRNA CASC9)、微小RNA-758-3p(miR-758-3p)在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)血清中的表达及诊断价值.方法 选取2018年6月至2020年2月于镇江市第三人民医院收治的HCC患者72例作为HCC组,另选取健康体检人员30例作为健康对照组.starBase v2.0在线软件预测lncRNA CASC9与miR-758-3p的结合位点;检测受试者血清中lncRNA CASC9、miR-758-3p的表达,分析两者与HCC患者临床病理参数的关系,分析两者和甲胎蛋白(AFP)对HCC的诊断价值.结果 StarBase v2.0软件结果显示,lncRNA CASC9与miR-758-3p存在潜在的互补结合位点.与健康对照组相比,lncRNA CASC9在HCC患者血清中的表达升高(P<0.05),miR-758-3p在HCC患者血清中的表达降低(P<0.05).HCC患者血清中lncRNA CASC9、miR-758-3p的表达与肝硬化、淋巴结转移和TNM分期有关(P<0.05).ROC分析显示:lncRNA CASC9、miR-758-3p和AFP对HCC均有一定的诊断价值.三者联合应用的诊断价值较高,ROC-AUC为0.848(95％CI:0.767～0.937).结论 血清lncRNA CASC9和miR-758-3p有可能成为HCC早期诊断的血清学标志物.