目的 研究桃红四物汤(Taohong Siwu Decoction,THSWD)对缺血性脑卒中的微小RNA(microRNA,miR-NA)表达谱的影响,探讨THSWD治疗缺血性脑卒中的分子机制.方法 建立大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)诱导的局灶性脑缺血大鼠模型,采用单细胞RNA测序技术检测THSWD治疗后MCAO大鼠miRNA表达谱.采用GO和KEGG富集分析方法分析miRNA作用于靶基因的功能.对表达差异显著的miRNA进行RT-qPCR实验验证.结果 THSWD干预后,MCAO大鼠脑梗死区有13个miRNA表达发生变化,其中6个miRNA表达上调,7个miRNA表达下调.利用miRanda进行预测,确定了这13个miRNA的靶基因,构建了miRNA-mRNA网络,通过RT-qPCR验证了其中6个差异表达的miRNA(rno-miR-653-5 p、rno-miR-216 b-5 p、rno-miR-3547、rno-miR-217-5p、rno-miR-758-3p和rno-miR-223-3p).结论 THSWD可以通过逆转某些miRNA的异常表达来治疗缺血性脑卒中.

目的:探讨miR-758-3p在非小细胞肺癌(NSCLC)中的生物学功能及其作用机制。方法:采用脂质体法转染miR-758-3p模拟物(miR-758-3p模拟物组)、miRNA对照(对照组)、核仁纺锤体相关蛋白1(NUSAP1)过表达质粒(NUSAP1过表达组)、miR-758-3p模拟物＋NUSAP1(miR-758-3p模拟物＋NUSAP1组)至人NSCLC细胞系A549细胞中。采用CCK-8法和Transwell小室法检测A549细胞增殖、迁移和侵袭能力，结合生物信息学预测网站和双荧光素酶报告基因实验验证miR-758-3p及其靶基因的靶向关系。结果:转染24 h后，miR-758-3p模拟物组和对照组A549细胞中miR-758-3p基因的相对表达水平分别为3.02±0.16和1.00±0.08，NUSAP1基因的相对表达水平分别为0.04±0.02和1.00±0.03，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。转染72 h后，miR-758-3p模拟物组和对照组细胞的吸光度值分别为0.78±0.06和1.15±0.06，差异有统计学意义( P<0.05)。miR-758-3p模拟物组细胞的迁移数和侵袭数分别为[(119.04±11.49)个]和[(71.33±5.36)个]，均低于对照组[分别为(271.38±19.05)个和(164.30±8.11)个；均 P<0.05]。miR-758-3p模拟物转染野生型NUSAP1报告基因的荧光素酶活性(0.37±0.04)低于对照组(1.00±0.03， P<0.05)。突变型NUSAP1报告基因和对照组的荧光素酶活性分别为0.96±0.02和0.95±0.02，差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:miR-758-3p通过调控NUSAP1基因的表达抑制NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭。

目的 探讨长链非编码(Lnc)RNA分化拮抗非蛋白编码RNA(DANCR)通过调控miR-758-3p对口腔鳞癌(OSCC)细胞增殖、侵袭能力的影响.方法 以实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测体外培养的人口腔上皮细胞和人OSCC 细胞 CAL27、Tca8113、SCC9 细胞中 LncRNA DANCR 与 miR-758-3p 表达.将体外培养的 CAL27 细胞给予 LncRNA DAN-CR 敲低质粒、miR-758-3p mimics、miR-758-3p inhibitor及相应的阴性对照转染后,检测LncRNA DANCR与miR-758-3p表达、细胞增殖活力、凋亡与侵袭能力及相关蛋白表达.于裸鼠背部右腋下皮下接种各组细胞构建OSCC移植瘤模型,饲养3 w后测量各组移植瘤裸鼠肿瘤体积与重量.以双荧光素酶报告基因实验检测CAL27细胞LncRNA DANCR对miR-758-3p的靶向调控.结果 相比人口腔上皮细胞,CAL27、Tca8113、SCC9中LncRNA DANCR表达显著升高,miR-758-3p表达显著降低(P＜0.05).敲低LncRNA DANCR或过表达miR-758-3p可明显降低CAL27细胞增殖活力、侵袭数、波形蛋白(Vimentin)和N-钙黏蛋白(cadherin)表达及移植瘤裸鼠肿瘤体积与重量,明显升高凋亡率、E-cadherin蛋白表达(P＜0.05);下调miR-758-3p表达可明显减弱LncRNA DANCR敲低对CAL27细胞恶性行为的抑制作用(P＜0.05).CAL27细胞中LncRNA DANCR靶向下调miR-758-3p.结论 敲低LncRNA DANCR可通过上调miR-758-3p抑制OSCC细胞增殖、侵袭,并诱导其凋亡.

目的 探讨食管癌组织微小核糖核酸-758-3p(miR-758-3p)、核仁纺锤体相关蛋白1(NUSAP1)表达变化及其与临床病理特征和预后的关系.方法 选择食管癌患者97例,取手术切除的食管癌组织及其癌旁正常组织,采用实时荧光定量PCR法检测miR-758-3p、NUSAP1 mRNA表达.通过TargetScan数据库预测miR-758-3p与NUSAP1的结合位点,分析食管癌组织miR-758-3p表达与NUSAP1 mRNA表达的关系以及二者表达与临床病理特征和预后的关系.结果 与癌旁正常组织比较,食管癌组织miR-758-3p相对表达量降低,NUSAP1 mRNA相对表达量升高(t分别为23.037、25.253,P均<0.05).经TargetScan数据库预测,NUSAP1基因3′非翻译区583～589位点处存在miR-758-3p的结合位点.Pearson相关分析显示,食管癌组织miR-758-3p表达与NUSAP1 mRNA表达呈负相关(r=-0.732,P<0.01).食管癌组织miR-758-3p、NUSAP1 mRNA表达与组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05),而与性别、年龄、病理类型、吸烟史、饮酒史、肿瘤最大径无关(P均>0.05).以食管癌组织miR-758-3p、NUSAP1 mRNA相对表达量的均数为临界值,将患者分为miR-758-3p高表达者(≥0.64,47例)与miR-758-3p低表达者(<0.64,50例)、NUSAP1 mRNA高表达者(≥3.19,43例)与NUSAP1 mRNA低表达者(<3.19,54例).生存分析发现,miR-758-3p高表达者3年累积生存率高于其低表达者,NUSAP1 mRNA高表达者3年累积生存率低于其低表达者(Log-rank χ2分别为5.682、6.918,P均<0.05).结论 食管癌组织miR-758-3p低表达、NUSAP1 mRNA高表达,二者表达变化与组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移以及患者预后密切相关.

目的 探究微小RNA(microRNA,miR)-758-3p在口腔鳞状细胞癌(OSCC)的表达及对OSCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测正常牙龈上皮细胞(human gingival epithelial cells,HGE)及OSCC细胞系(CAL27、SCC9 和SCC25)中miR-758-3p的表达水平.将miR-758-3p模拟物转染至CAL27细胞中,构建过表达miR-758-3p细胞模型.采用WST-1 检测细胞增殖能力;Transwell法检测迁移和侵袭的影响;Western blot检测过表达miR-758-3p对CAL27 细胞中MMP2 及MMP9 蛋白水平的影响.结果 与HGE细胞比较,OSCC细胞系CAL27、SCC9 和SCC15 中miR-758-3p表达下调(P＜0.05),其中CAL27 细胞miR-758-3p表达量最低.miR-758-3p模拟物转染后,CAL27 细胞中miR-758-3p的表达水平显著增高(P＜0.05).miR-758-3p的过表达能显著抑制CAL27 的细胞增殖、迁移和侵袭能力(P＜0.05),明显抑制MMP2 和MMP9 蛋白的表达(P＜0.05).结论 miR-758-3p在OSCC细胞CAL27 中呈较低表达,过表达miR-758-3p可以显著抑制CAL27 细胞的增殖、迁移和侵袭.

胆固醇稳态受多种因素的密切调节,而胆固醇代谢紊乱与2型糖尿病、动脉粥样硬化、非酒精性脂肪性肝病等多种疾病的发生、发展密切相关.微小RNA(microRNA,miRNA)是脂代谢的转录后调控因子,miRNA-185-5p、miRNA-758-5p、miRNA-33a、miRNA-21、miRNA-122和miRNA-370与胆固醇的合成有关,miRNA-33、miRNA-144、miRNA-26、miRNA-758-3p、miRNA-106b、miRNA-10b、miR-NA-302、miRNA-145、miRNA-27a/b和miRNA-613与胆固醇的转运有关,多种microRNA共同参与调控胆固醇代谢中关键蛋白的表达,调控胆固醇的稳态平衡.

目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-758-3p在舌鳞状细胞癌细胞株中的表达,探讨其对肿瘤细胞增殖和迁移的影响.方法 采用实时定量反转录聚合酶链反应(qPCR)检测miR-758-3p在人舌鳞状细胞癌细胞株和人正常口腔黏膜细胞细胞中的表达.脂质体转染miR-NC(对照组)或miR-758-3p(实验组)至舌鳞状细胞癌细胞.生物信息学预测及双荧光素酶报告基因验证miR-758-3p和靶基因的靶向关系.qPCR和Western blot检测TRIM44基因及下游蛋白的表达.流式细胞术、MTT法和Transwell迁移实验分别检测过表达miR-758-3p对细胞周期、增殖能力和迁移能力的影响.结果 miR-758-3p在舌鳞状细胞癌细胞株中呈现低表达(P＜0.01).TRIM44为miR-758-3p的直接靶基因(P＜0.01).转染miR-758-3p后的TSCCA中,TRIM44基因表达降低(P＜0.05),细胞周期进展被抑制(P＜0.01),增殖能力明显下降(P＜0.01),细胞迁移能力受到抑制(P＜0.01).结论 miRNA-758-3p在舌鳞状细胞癌细胞株中表达降低,通过靶向干扰TRIM44基因的表达抑制舌鳞状细胞癌细胞增殖和迁移.

目的 观察微小RNA(miR)-758-3p对鼠双微体基因2(MDM2)表达的调控作用及对胃癌细胞MGC803侵袭和增殖的影响.方法 采用生物信息学软件预测MDM2为miR-758-3p靶基因,分别将野生型MDM2基因3'端非翻译区荧光素酶报告基因载体和miR-758-3p靶序列突变型载体及相应的miRNA转染至胃癌细胞MGC803,双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性.采用脂质体转染法将miR-758-3p模拟物转入胃癌细胞MGC803,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测转染效果,Real-time PCR和Western blotting检测转染miR-758-3p后在胃癌细胞中MDM2的表达水平.Transwell实验和CCK-8实验检测细胞侵袭和增殖.采用SPSS 20.0进行统计分析.结果 双荧光素酶报告基因检测系统证实miR-758-3p能够靶向调控MDM2基因(P＜0.05).胃癌细胞MGC803转染miR-758-3p模拟物后,miR-758-3p的表达水平(6.68±0.53)明显高于miR-NC组(0.84±0.12),差异有统计学意义(P＜0.01).与miR-NC组比较,转染miR-758-3p模拟物后MGC803细胞中MDM2的表达下调(P＜0.05).miR-NC组和miR-758-3p组侵袭细胞数量分别为(136.00±16.62)个和(79.49±6.42)个,敲减MDM2之后,细胞的侵袭能力明显下降(P＜0.05).CCK-8结果显示,与miR-NC组的增殖比较,转染miR-758-3p组胃癌细胞MGC803的增殖能力明显降低,两组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-758-3p能够通过靶向调控MDM2而降低胃癌细胞MG C.803的侵袭和增殖能力.

目的 检测长链非编码RNA肿瘤易感候选者9(lncRNA CASC9)、微小RNA-758-3p(miR-758-3p)在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)血清中的表达及诊断价值.方法 选取2018年6月至2020年2月于镇江市第三人民医院收治的HCC患者72例作为HCC组,另选取健康体检人员30例作为健康对照组.starBase v2.0在线软件预测lncRNA CASC9与miR-758-3p的结合位点;检测受试者血清中lncRNA CASC9、miR-758-3p的表达,分析两者与HCC患者临床病理参数的关系,分析两者和甲胎蛋白(AFP)对HCC的诊断价值.结果 StarBase v2.0软件结果显示,lncRNA CASC9与miR-758-3p存在潜在的互补结合位点.与健康对照组相比,lncRNA CASC9在HCC患者血清中的表达升高(P<0.05),miR-758-3p在HCC患者血清中的表达降低(P<0.05).HCC患者血清中lncRNA CASC9、miR-758-3p的表达与肝硬化、淋巴结转移和TNM分期有关(P<0.05).ROC分析显示:lncRNA CASC9、miR-758-3p和AFP对HCC均有一定的诊断价值.三者联合应用的诊断价值较高,ROC-AUC为0.848(95％CI:0.767～0.937).结论 血清lncRNA CASC9和miR-758-3p有可能成为HCC早期诊断的血清学标志物.

该研究旨在探讨ROR1-AS1对神经母细胞瘤细胞SK-N-SH增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及作用机制.收集67例神经母细胞瘤组织和瘤旁组织,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测组织中ROR1-AS1和miR-758-3p的表达情况.转染ROR1-AS1小干扰RNA、miR-758-3p模拟物或共转染ROR1-AS1小干扰RNA与miR-758-3p抑制剂至SK-N-SH细胞,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测CyclinD1、p21、Bcl-2、Bax、MMP-2和MMP-9的蛋白表达情况.双荧光素酶报告基因实验验证ROR1-AS1和miR-758-3p的调控关系.结果 显示,神经母细胞瘤组织中ROR 1-AS1的表达明显高于瘤旁组织,而miR-758-3p表达明显低于瘤旁组织.抑制ROR1-AS1表达或过表达miR-758-3p降低了SK-N-SH细胞活性、迁移数和侵袭数及CyclinD1、Bcl-2、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平,而提高了细胞凋亡率及p21和Bax蛋白表达水平.ROR1-AS1在SK-N-SH细胞中靶向负调控miR-758-3p表达,干扰miR-758-3p可逆转抑制ROR1-AS1对SK-N-SH细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响.这提示抑制ROR1-AS1表达可能通过靶向上调miR-758-3p阻碍SK-N-SH细胞增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡,ROR1-AS1有可能成为神经母细胞瘤治疗的分子靶点.