目的:基于甘肃省武威市急性呼吸道感染(acute respiratory infection, ARI)病例样本，分析人腺病毒(human adenovirus, HAdV)的感染情况以及基因分型。方法:针对2021年1—8月采集的甘肃省武威市ARI病例的鼻咽拭子样本，使用荧光定量PCR(RT-PCR)对12种呼吸道病毒进行筛查；选取HAdV阳性样本进行病毒分离，普通PCR扩增分离株的Hexon基因Loop2区域以及3个结构蛋白(Penton base、Hexon、Fiber)全长，从GenBank数据库下载国内外各型别原型株以及代表株全基因组进行系统发育和一致性分析。结果:本研究共收集ARI样本574份，共检出呼吸道病毒阳性标本233份，检出率位居前三位的分别是鼻病毒(15.16%，87/574)、人偏肺病毒(7.67%，44/574)和HAdV(7.32%，42/574)。574份样本中，男、女HAdV检出率差异无统计学意义；HAdV主要发生在0～1岁(10.61%，14/132)；各月份均有检出，差异无统计学意义；从42份HAdV阳性标本中分离出28株阳性株，分别为HAdV-B(4株均为HAdV-3)和HAdV-C(包括7株P1H2F2、8株HAdV-1、9株Px1/Ps3H5F5)两个亚属，其中P1H2F2和Px1/Ps3H5F5为本研究基因重组模式。结论:HAdV是甘肃省武威市2021年1—8月ARI病例中第三流行的病毒，感染型别以C亚属为主，其次为B亚属。

目的:探究同时伴有低密度脂蛋白受体衔接蛋白1（LDLRAP1）及胆固醇转运蛋白三磷酸腺苷结合盒转运体G8（ABCG8）基因异常的家族性高胆固醇血症（FH）一家系的临床及分子生物学特征。方法:2020年9月于上海交通大学医学院附属瑞金医院收治1例FH患者，采集该家系成员外周静脉血样本，检测血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）；用高效液相色谱法检测血清豆固醇和谷固醇含量。二代基因测序检测先证者及家系成员基因变异情况。采用Pymol软件对基因变异位点进行致病性分析，并使用Uniprot Modelling软件行蛋白结构建模。结果:先证者表现为贫血合并多部位黄色瘤、早发急性冠状动脉综合征。冠状动脉造影示冠状动脉三支严重病变；腹部超声示脾肿大；血涂片示异型红细胞、大血小板散在可见；血清TC、LDL-C、豆固醇和谷固醇浓度均升高［分别为8.54 mmol/L（正常值2.3~5.7 mmol/L）、4.84 mmol/L（正常值1.3~4.3 mmol/L）、44 μmol/L（正常值1.0~10 μmol/L）、28 μmol/L（正常值1.0~15 μmol/L）］。基因测序示：LDLRAP1：NM_015627.2：exon 4 c.415 C>T（p.Q139X），该纯合突变形成的蛋白截断体丢失多个稳定蛋白结构区域，不具备正常功能。同时，先证者发现ABCG8基因变异：exon13 c.1895T>C（p.V632A），exon8 c.1199C>A（p.T400K）。2例家系成员HDL-C增高（Ⅱ5：2.33 mmol/L，Ⅱ6：2.96 mmol/L）；3例带ABCG8基因变异的成员豆固醇（Ⅱ8：23 μmol/L，Ⅱ7：24 μmol/L，Ⅰ2：18 μmol/L）、谷固醇（Ⅱ8：41 μmol/L，Ⅱ7：33 μmol/L，Ⅰ2：45 μmol/L）轻度增高。结论:同时伴有LDLRAP1及ABCG8基因异常的FH患者，可出现植物固醇浓度异常，其临床表现更加复杂，应综合考虑家族史及LDL-C、植物固醇水平及基因检测结果。

目的 研究三结构域蛋白家族28(TRIM 28)和p16基因在食管鳞癌(ESCC)组织中的表达情况,并观察二者与患者临床病理因素的相关性.方法 选取河北北方学院附属第一医院手术切除的ESCC患者肿瘤组织136例,并选取37例距肿瘤边缘5 cm以上的正常食管黏膜组织,用免疫组化SP法及对各个组织中TRIM28、p16蛋白的表达情况进行检测,并采用免疫荧光染色定位二者在ESCC中的表达部分,依据结果对它们与ESCC患者临床病理特征的相关性进行探究.结果 (1)TRIM28与p16在ESCC组织中的阳性率分别为91.2%(124/136)、32.4%(44/136),在正常食管黏膜组织中的阳性率分别为24%(9/37)、57%(21/37),差异均具有统计学意义(P<0.05).(2)免疫荧光染色显示二者均主要定位于ESCC癌细胞的胞核中.(3)二者的表达情况均与ESCC的TNM分期、浸润程度、淋巴结转移相关.(4)TRIM28与p16在ESCC中的表达呈负相关(r=-0.284,P=0.001).结论 在ESCC发生发展过程中TRIM28及p16均可呈异常表达,协同检测二标记物可辅助ESCC诊断并指导临床治疗.

目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-758-3p在舌鳞状细胞癌细胞株中的表达,探讨其对肿瘤细胞增殖和迁移的影响.方法 采用实时定量反转录聚合酶链反应(qPCR)检测miR-758-3p在人舌鳞状细胞癌细胞株和人正常口腔黏膜细胞细胞中的表达.脂质体转染miR-NC(对照组)或miR-758-3p(实验组)至舌鳞状细胞癌细胞.生物信息学预测及双荧光素酶报告基因验证miR-758-3p和靶基因的靶向关系.qPCR和Western blot检测TRIM44基因及下游蛋白的表达.流式细胞术、MTT法和Transwell迁移实验分别检测过表达miR-758-3p对细胞周期、增殖能力和迁移能力的影响.结果 miR-758-3p在舌鳞状细胞癌细胞株中呈现低表达(P＜0.01).TRIM44为miR-758-3p的直接靶基因(P＜0.01).转染miR-758-3p后的TSCCA中,TRIM44基因表达降低(P＜0.05),细胞周期进展被抑制(P＜0.01),增殖能力明显下降(P＜0.01),细胞迁移能力受到抑制(P＜0.01).结论 miRNA-758-3p在舌鳞状细胞癌细胞株中表达降低,通过靶向干扰TRIM44基因的表达抑制舌鳞状细胞癌细胞增殖和迁移.

为探讨胰岛素样生长因子-Ⅰ(Insulin like growth factor-Ⅰ, IGF-Ⅰ)对于翘嘴鲌(Culter alburnus)生长性状的影响, 对其DNA序列进行了克隆.翘嘴鲌IGF-Ⅰ全长14567 bp, 由5个外显子和4个内含子组成.其5个外显子长度分别为298、160、182、36 和1360 bp.推测的阅读框为486 bp, 编码由161个氨基酸组成的IGF-Ⅰ前体蛋白.前体肽由信号肽、成熟肽、E肽三部分组成, 其中信号肽44个氨基酸, 成熟肽70个氨基酸, E肽47个氨基酸.成熟肽由B、C、A、D四个区域组成, 其中B结构域和A结构域的保守性最高, 在这2个区域包含由 6个半胱氨酸残基形成的3个二硫键.翘嘴鲌B区域还包含保守的IGF-Ⅰ受体识别序列(PheB23-TyrB24-PheB25). E肽的长度表明翘嘴鲌IGF-Ⅰ属Ea-2型.同源性分析表明翘嘴鲌与鲤科鱼类的IGF-Ⅰ编码氨基酸同源性较高, 为94％-100％, 但在聚类分析中翘嘴鲌并不是首先和鲌亚科的鱼类聚集在一起.Real-time qPCR组织特异性表达结果显示IGF-Ⅰ mRNA在肝脏组织中的表达量最高, 脾、心脏、精巢、脑次之, 肾、鳃、胃和卵巢中表达量较低.翘嘴鲌IGF-Ⅰ基因4个内含子长度分别为1170、9364、251 和1746 bp.相对外显子来说, 种间内含子变异较大, 其中第三内含子变异最大.翘嘴鲌IGF-Ⅰ基因中包含6个微卫星, (GATG)5AATAT (ATAG)11位于第一内含子中, (CT)8、(TTA)5、(AC)13、(TG)12和(ATT)5位于第二内含子中.其中4个微卫星位点具有多态性, 将它们在120尾同塘养殖的翘嘴鲌中进行基因型与生长性状的关联性分析, 均未达到显著水平(P>0.05).结果为进一步研究该基因的表达、功能及其转录调控特征奠定了分子基础.

目的 探究三结构域蛋白44(TRIM44)对子宫内膜癌(EC)细胞生长和放疗敏感性的调控机制.方法 ①通过免疫组化检测30例EC患者的癌组织和临近癌旁组织中TRIM44的表达水平.通过qRT-PCR检测癌旁组织以及不同FIGO分期、不同组织学分级、淋巴结转移/未转移的EC患者癌组织中TRIM44 mRNA水平.②将人子宫内膜癌细胞系(HEC-1 A)分为对照组、siRNA-NC组、siRNA-TRIM44组、LV-NC组和LV-TRIM44组,根据分组情况,使用Lipofectamine 2000试剂将阴性对照siRNA(siRNA-NC)、靶向TRIM44的siRNA(siRNA-TRIM44)、阴性对照慢病毒(LV-NC)和TRIM44过表达慢病毒(LV-TRIM44)转染到对应分组的HEC-1 A细胞中,对照组细胞不进行转染,通过qRT-PCR和Western blot检测各组细胞中TRIM44的mRNA和蛋白表达水平.③将HEC-1 A细胞分为siRNA-NC组、siRNA-TRIM44组、LV-NC组、LV-TRIM44组、8 Gy+siRNA-NC组、8 Gy+siRNA-TRIM44组、8 Gy+LV-NC组、8 Gy+LV-TRIM44组.根据分组情况,使用Lipofectamine 2000试剂转染细胞,并采用直线加速器6-MV X射线照射细胞(8 Gy).通过CCK-8测定细胞增殖,AnnexinⅤ-FITC凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡,Transwell检测细胞迁移和侵袭,qRT-PCR和Western blot检测TRIM44、p62、细丝蛋白A(FLNA)和RAD51的表达.结果 与癌旁组织相比,癌组织中TRIM44的mRNA表达水平显著升高(t=8.906,P<0.001).与FIGO分期Ⅰ+Ⅱ期相比,Ⅲ+Ⅳ期癌组织中TRIM44的mRNA表达水平显著升高(t=3.943,P<0.001).与组织学分级G1级相比,G2+G3级癌组织中TRIM44的mRNA表达水平显著升高(t=4.046,P<0.001).与淋巴结未转移的患者相比,转移患者癌组织中TRIM44 mRNA表达水平显著升高(t=4.576,P<0.001).与siRNA-NC组相比,siRNA-TRIM44组相对细胞活力、迁移和侵袭细胞数量均降低,而凋亡率升高(P<0.05).与siRNA-NC组相比,siRNA-TRIM44组和8 Gy+siRNA-NC组细胞核P62蛋白相对表达量均升高,而细胞核FLNA和RAD51蛋白相对表达量均降低(P<0.05).与8 Gy+siRNA-NC组相比,8 Gy+siRNA-TRIM44组细胞核P62蛋白相对表达量升高,而细胞核FLNA和RAD51蛋白相对表达量均降低(P<0.05).结论 TRIM44的高表达促进了EC细胞的增殖和转移,TRIM44的高表达抑制了p62的核转位,从而无法降解细胞核内FLNA和RAD51,导致DNA修复增加、癌细胞活性和放疗抗性升高.

从文心兰侵染软腐病转录组库中鉴定出72条WRKY蛋白序列,长度分布110～719个氨基酸,平均长度319.8个氨基酸.72条文心兰WRKY蛋白序列中14条被分到I组、42条序列被分到II组、16条序列被分到III组,其中II组还可以进一步分为7个亚组;72条序列均至少含有1个WRKY结构域和C2H2型锌指基序,来自I组的序列含有2个WRKY结构域.通过对筛选的12条文心兰WRKY基因进行荧光定量分析,发现其表达基本验证高通量表达模式,并可分成三种,来自第一种与第三种的OncWRKY44(I)、OncWRKY69(IIg)与OncWRKY70(IIg)3个WRKY基因可以被外源水杨酸与茉莉酸甲酯诱导,并在共生植株的侵染位点中呈现最高表达量,它们可能是参与印度梨形孢诱导的系统抗性的重要节点基因.