目的:基于网络药理学及分子对接技术探讨复元醒脑汤治疗脑梗死的作用机制。方法:利用TCMSP、中医药综合数据库（TCMID）、有机小分子生物活性数据库（PubChem）、Uniprot及Swiss Target Prediction数据库对复元醒脑汤的药物活性成分及作用靶点进行筛选，应用GeneCards、OMIM、TTD、DrugBank和PharmGKB数据库筛选脑梗死疾病靶点，将复元醒脑汤中药物靶基因与脑梗死疾病靶基因相交集，将交集靶点导入Cytoscape 3.8.2软件构建成分-靶点网络，使用STRING数据库及Cytoscape 3.8.2软件构建PPI网络，筛选核心靶点。对复元醒脑汤-脑梗死疾病共同靶点基因进行GO功能富集及KEGG通路富集分析，得出相关信号通路，运用AutoDock与Pymol软件对预测靶标与其对应的成分进行分子对接。结果:得到复元醒脑汤治疗脑梗死的有效成分80个，复元醒脑汤-脑梗死共同靶点214个，核心靶点MAPK1、RELA、TP53、JUN、AKT1、HSP90AA1等与脑梗死疾病的关键靶点相互关联，参与调控对药物的反应、对脂多糖的反应、对含氧量的反应等生物过程，细胞组成涉及膜筏、膜微区、神经元胞体等；分子功能主要集中于核受体活性、配体激活转录因子活性、DNA-结合转录因子结合等；并涉及脂质和动脉粥样硬化、化学致癌-受体激活、流体剪切应力和动脉粥样硬化等信号通路；分子对接显示，槲皮素与HSP90AA1（-9.4 kJ/mol）、山柰酚与HSP90AA1（-9.4 kJ/mol）、异鼠李素与HSP90AA1（-9.1 kJ/mol）、槲皮素与JUN（-8.6 kJ/mol）具有较好的结合活性。结论:复元醒脑汤通过调控血管内皮功能、促进血液循环、修复及改善神经功能、保护血脑屏障、减少细胞凋亡及调节免疫和炎症反应等机制防治脑梗死。

目的:分析2020年10月—2021年3月以及2021年10月—2022年3月两个流感流行季天津地区人偏肺病毒(human metapneumovirus, hMPV)的流行病学特点及全基因组特征，丰富我国hMPV的全基因组数据库。方法:收集流感样病例(influenza-like illness，ILI)患者的咽拭子样本共1 040例，采用微流体芯片荧光定量PCR进行检测，对hMPV阳性样本采用RT-PCR扩增其全基因组，全基因组二代测序技术进行序列测定，使用CLC、DNAStar和MEGA等生物信息学软件进行序列组装，分析其核苷酸与氨基酸同源性并绘制系统发育树。结果:1 040例咽拭子样本中共检出25例hMPV阳性样本，检出率为2.40%，3～5岁年龄组的检出率最高，为3.71%(16/431)。在流感流行季中，hMPV流行高峰在12月份，其检出率为6.67%(12/180)。测序成功的12株序列中有7株为B2型、4株为A2b型、1株为B1型。其中G基因变异最大，有3株A2b型的G基因中存在111nt-dup的核苷酸重复。结论:天津地区流感流行季中，hMPV的流行高峰为12月份，流行株以B2型为主，除G基因变异较大之外，其他基因较为稳定。

传统免疫学检测需依靠大型且昂贵的仪器和熟练的操作人员，测量时间较长，敏感性却较低，同时即时检测需求也在不断上涨，故而临床需要一种高敏感、高准确、快速、便携的即时诊断方式。微流控芯片具有高敏感、高通量、自动化等优点，与临床即时诊断需求相契合。基于微流控技术和免疫检测开发的微流控免疫芯片成为近年来研究热点，在肿瘤标志物检测，感染性疾病抗原和抗体检测、自身抗体检测、激素检测等领域成果突出。然而在芯片的研发过程中仍需克服许多难题，例如微流体的操纵、反应信号的收集和分析等。

类淋巴系统是维持大脑内环境稳定的重要流体动力学系统，亦是中枢神经系统疾病治疗干预的新靶点。类淋巴系统研究的关键在于对脑脊液示踪剂的微流体动力学分析。笔者现就MRI技术、双光子显微成像技术、近红外荧光成像技术和全颅宏观成像技术等多种神经影像学技术在类淋巴系统研究中的应用进展进行介绍，并总结其各自的技术优势，旨在为类淋巴系统的基础和临床研究提供方法学策略。

目的:对昆明市一起聚集性发热疫情样本进行腺病毒检测和遗传进化分析。方法:采集典型发热患者咽拭子标本，使用微流体芯片技术进行30种常见呼吸道传染病病原体核酸检测。对腺病毒核酸阳性标本使用Nanopore三代高通量测序技术进行Penton base、Hexon和Fiber三个重要基因全长序列扩增、测定和分型鉴定，构建系统进化树，开展分子变异、遗传进化等分析。结果:共采集5份标本，均检出呼吸道腺病毒及流感嗜血杆菌。对腺病毒进行Nanopore三代基因测序最终均获得Penton base、Hexon和Fiber基因全长编码区核苷酸序列，5份标本之间3个基因核苷酸相似性依次为100.0%、99.9%～100.0%和100.0%，氨基酸同源性均为100.0%；与HAdV3原型株(AY599834)核苷酸相似性最高，分别为98.6%、98.7%和98.9%。系统发育分析表明，3个基因系统进化树分析结果基本一致，人腺病毒3型(HAdV3)原型株单独一支，本研究中HAdV3序列均划分在同一进化分支上，与较早年份国外及中国台湾毒株亲缘关系较远，与近年国内外毒株亲缘关系较近，与2019年日本株(LC703523)和中国广州株(MZ540961)高度同源。与原型株比较分析昆明HAdV3氨基酸突变位点，Penton base有5处变异；Hexon有10处变异；Fiber有11处变异。结论:本起疫情中的腺病毒在Penton base、Hexon和Fiber基因全长序列中型别分型结果一致，为P3H3F3型，与包括原型株在内的国内外HAdV3毒株显示出非常小的遗传变异。与原型株相比发生了多处氨基酸位点突变，并且多数氨基酸位点变异发生在蛋白质的高变区或功能区，其中Hexon蛋白中M7L为昆明序列独有氨基酸突变位点。

目的:了解云南省境外输入新冠病毒感染者中新型冠状病毒与常见呼吸道病原体的混合检出情况，为新冠疫情中多重感染的治疗和应对提供科学依据。方法:随机选取采样日期从2021年4月18日至2022年4月24日的云南省境外输入新冠病毒感染者标本74份，使用呼吸道病原体微流体芯片技术（TaqMan array cards，TAC）对41种常见的呼吸道病原体进行筛查。结果:56份检出一种或多种呼吸道病原体，其中流感嗜血杆菌检出率最高，不同病原体间的阳性率差异具有统计学意义（ x2=235.790， P<0.05）。EB病毒（ x2=6.358， P=0.038）和人疱疹病毒6型（ x2=5.044， P=0.049）在不同的疾病严重程度分组中检出率差异有统计学意义。肠道病毒（ x2=7.843， P=0.041）在不同的年龄分组中检出率差异有统计学意义。 结论:在本研究中，75.68%（56/74）的新冠病毒感染者检测到一种或多种呼吸道病原体，较高的检出率可能归因于年龄组、疾病严重程度、检测方法以及时空差异。

目的:探索将微流控芯片用于遗传性耳聋基因热点突变的分型检测。方法:将专门设计加工的微流控芯片与KASP扩增整合，借助激光共聚焦荧光扫描仪实现遗传性耳聋常见4个相关基因的23个热点突变分型检测，采集276例（听障组：成都市2019年出生并诊断为听力损失的131例新生儿；对照组：成都市2020年出生且听力筛查结果为双耳通过的145例新生儿）新生儿的足跟血斑样品验证其结果准确性和临床应用可行性。结果:微流控芯片通过聚类分析对全部质控品均实现准确分型，其最低检测限可达1 mg/L。276例新生儿血斑样品的微流控芯片分型结果全部通过复核确认。听障组131例新生儿，检出66例阳性携带者，阳性携带率50.4%；对照组145例新生儿，检出40例阳性携带者，阳性携带率27.6%。其中携带率最高的突变热点为GJB2基因c.109G>A，在听障组和对照组中阳性携带率分别为46.6%（61/131）和23.4%（34/145）。结论:微流控芯片可用于遗传性耳聋相关热点突变的分型检测，具有准确性高、防污染能力强、操作简单、用时短等优势，能更好地满足新生儿耳聋基因筛查等遗传性耳聋基因检测需求。

目的:构建微流控器官芯片，并评估其在模拟骨关节炎进程中软骨下骨骨重塑的能力。方法:基于微流控技术和细胞共培养技术设计芯片主体，MC3T3-E1细胞贴壁培养在细胞接种小室的内部，在细胞接种小室的底部以0.5 ml/min的流速灌流培养基。评价指标：（1）微流控器官芯片的评价：灌流生长培养基，采用模拟仿真实验测试不同时间点细胞接种小室内部和底部液体的浓度差和平衡时间；活死染色观察细胞在设定流速下连续培养3、7 d的生物相容性，分为3 d组和7 d组。（2）微流控器官芯片的促成骨作用：灌流成骨诱导培养基，通过碱性磷酸酶（ALP）染色和PCR比较细胞在静态和灌流条件下3、7 d的黑色ALP阳性细胞数量和成骨相关标志基因成骨特异性转录因子2（RUNX2）、Ⅰ型胶原（COL1A1）、骨形态发生蛋白-2（BMP-2）、骨钙素（OCN）的表达情况，分为静态未诱导组、静态诱导组和灌流诱导组。（3）三种成骨细胞亚型外泌体（EVs）的形态和大小表征及生物相容性：获取三种不同细胞亚型［内皮型成骨细胞（EnOB）-EVs、基质型成骨细胞（StOB）-EVs和矿化型成骨细胞（MinOB）-EVs］，通过透射电镜和粒径分析获取形态和大小；灌流含有三种不同细胞亚型EVs的生长培养基，通过细胞增殖/凋亡检测实验比较添加不同EVs浓度（1、1.25、2.5、5 μg/ml）24 h的生物相容性，分为EnOB-EVs组、StOB-EVs组、MinOB-EVs组。（4）三种成骨细胞亚型EVs的促成骨作用：灌流含有三种不同细胞亚型EVs的成骨诱导培养基3 d，通过ALP染色和PCR比较黑色ALP阳性细胞数量和成骨相关标志基因RUNX2、COL1A1、BMP-2、OCN的表达情况，分为无EVs组、EnOB-EVs组、StOB-EVs组和MinOB-EVs组。结果:（1）微流控器官芯片的评价：模拟仿真结果显示，在持续灌流12 h后，上室最上层浓度达到下室浓度的95%以上，最下层为下室浓度的96.5%左右，上下室的浓度差达到平衡状态。活死染色结果表明，芯片在0.5 ml/min的流速下，生物相容性好，灌流3、7 d细胞存活率分别为（99.48±0.12）%、（97.07±1.05）%（ P<0.01）。（2）ALP染色结果显示，3 d时灌流诱导组黑色ALP阳性细胞最多，静态诱导组其次，静态未诱导组最少；7 d时静态诱导组黑色ALP阳性细胞最多，灌流诱导组其次，静态未诱导组最少。PCR结果显示，3 d时静态未诱导组RUNX2、COL1A1、BMP-2、OCN表达水平分别为1.00±0.03、1.00±0.12、1.00±0.01、1.00±0.02，静态诱导组分别为1.80±0.04、4.05±0.37、9.80±1.94、4.38±0.89，灌流诱导组分别为2.45±0.23、5.48±0.42、91.50±4.56、10.82±4.96（ P<0.01）。7 d时静态未诱导组RUNX2表达水平为1.00±0.01，静态诱导组为1.46±0.46，灌流诱导组为1.11±0.08（ P>0.05）；静态未诱导组COL1A1、BMP-2、OCN表达水平分别为1.00±0.03、1.00±0.13、1.00±0.09，静态诱导组分别为9.38±0.25、14.27±4.35、84.01±4.02，灌流诱导组分别为2.39±0.08、133.64±8.87、86.64±8.36（ P<0.01）。3、7 d时静态未诱导组、静态诱导组和灌流诱导组相互比较，均为灌流诱导组的促成骨能力最强。（3）三种成骨细胞亚型EVs的形态和大小表征及生物相容性：透射电镜下EnOB-EVs、StOB-EVs、MinOB-EVs均为典型的茶托状形态。粒径分析结果显示，EnOB-EVs、StOB-EVs、MinOB-EVs的大小分别为（91.3±14.7）nm、（106.0±16.0）nm、（68.1±10.7）nm。细胞增殖/凋亡检测结果显示，EnOB-EVs、StOB-EVs、MinOB-EVs的最佳给药浓度均为1.25 μg/ml。（4）微流控器官芯片对于三种EVs促成骨功能验证：ALP染色结果显示，无EVs组黑色ALP阳性细胞最少，添加EnOB-EVs组其次，StOB-EVs组再者，MinOB-EVs组最多。PCR结果显示，无EVs组RUNX2、COL1A1、BMP-2、OCN表达水平分别为1.00±0.01、1.00±0.03、1.00±0.02、1.00±0.02，EnOB-EVs组分别为1.95±0.11、6.78±2.04、7.99±0.57、6.93±3.83，StOB-EVs组分别为0.79±0.12、5.68±1.53、12.59±3.15、25.59±0.95，MinOB-EVs组分别为0.68±0.10、4.36±0.69、18.75±3.21、34.74±3.98（ P<0.01）。无EVs组、EnOB-EVs组、StOB-EVs组和MinOB-EVs组相互比较，MinOB-EVs组促成骨效果最明显。 结论:基于微流控技术和细胞共培养技术所构建的微流控器官芯片能够维持MC3T3-E1细胞的正常生长、促进MC3T3-E1细胞的增殖和成骨诱导分化能力。不同时期的成骨细胞所释放的EVs具有促成骨作用，加速骨关节炎进程中软骨下骨骨重塑中骨硬化的现象。

肿瘤类器官能概括原发肿瘤的诸多特性，因此可以为肿瘤研究和个体化诊疗提供更为精准和详细的信息。肿瘤类器官技术对细胞操作平台的微环境仿真性能、分析通量和操作自动化程度提出了新的要求。微流控芯片具有便于实现多种功能单元的灵活组合与规模集成的特点。结合微尺寸结构以及微流体控制，微流控芯片便于实现细胞精细操控、微环境仿真以及规模化分析。因此，微流控芯片是有利于肿瘤类器官研究和应用的技术平台。本文介绍了微流控芯片肿瘤类器官技术的研究进展，以及其在疾病模型构建、药物筛选和个性化治疗等方面的应用。总体来看，微流控芯片肿瘤类器官技术有望为肿瘤精准诊断和治疗提供一种有力的工具。

目的:比较选择性与完全去龋技术治疗恒牙深龋近髓的临床疗效。方法:选取2021年10月至2023年10月于安徽医科大学附属口腔医院牙体牙髓科就诊的恒牙深龋患者52例（患牙52颗），采用随机数字表法将患者分为观察组（选择性去龋组）和对照组（完全去龋组）各26例（患牙26颗），分别在口腔手术显微镜下以对应方法去龋。根据去龋完成后是否露髓，采用iRoot BP Plus直接盖髓或TheraCal LC间接盖髓，流体树脂封闭牙本质层，3M复合树脂分层充填窝洞。采用卡方检验比较两组术中露髓率；采用独立样本t检验比较两组术后1周的疼痛程度；采用Fisher精确检验比较两组术后随访6个月的并发症；采用符合方案分析和意向治疗分析比较两组术后6个月的成功率。结果:选择性去龋组的术中露髓率（0%）明显低于完全去龋组（30.77%），差异有统计学意义（P = 0.004）；选择性去龋组术后24 h的疼痛视觉模拟评分（VAS）值为（2.9 ± 0.7）分，明显低于完全去龋组（3.3 ± 0.6）分，差异有统计学意义（t = 2.120，P = 0.039）；选择性去龋组的术后并发症（2例牙髓炎）与完全去龋组（1例根尖炎和2例牙髓炎）相比较，差异无统计学意义（P = 0.369）；符合方案分析结果显示，选择性去龋组术后半年的成功率（91.30%）和完全去龋组的成功率（87.50%）均较高，差异无统计学意义（RR 失访不计入 = 0.696，95% CI 失访不计入：0.128 ~ 3.790，P失访不计入 = 0.675）。意向治疗分析结果显示，选择性去龋组术后半年的成功率分别为80.77%和92.31%，完全去龋组的成功率分别为80.77%和88.46%，差异均无统计学意义（RR失访全部失败 = 1.000，95% CI失访全部失败：0.328 ~ 3.047，P失访全部失败 = 1.000；RR失访全部成功 = 0.667，95% CI失访全部成功：0.121 ~ 3.666，P失访全部成功 = 0.641）。结论:与传统完全去腐技术相比较，选择性去龋技术牙髓暴露风险低、微创、术后并发症少、成功率高，建议在恒牙深龋近髓患者中推广应用。