目的 建立同时测定意大利牛舌草中咖啡酸、芦丁和紫云英苷含量的HPLC法.方法 采用πNAP COSMOSIL C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);以乙腈(A)-2 mL·L-1磷酸(B)为流动相,进行梯度洗脱;流速:1.0 mL·min-1;柱温:30℃;紫云英苷、咖啡酸和芦丁的检测波长分别为266,341和341 nm.结果 咖啡酸、芦丁和紫云英苷分别在0.3488～22.32(r=0.9999),1.813～116.0(r=0.9999)和0.2413～15.44μg·m L-1(r=0.9998)范围内质量浓度与峰面积线性关系良好,平均回收率分别为99.6％(RSD=1.28％),101.1％(RSD=0.66％)和99.8％(RSD=3.75％).3批意大利牛舌草样品中咖啡酸、芦丁和紫云英苷的平均含量分别为84.27±2.19,720.77±62.85和63.63±4.33μg·g-1.结论 该方法操作简便、重复性好、准确度高,为意大利牛舌草的质量控制提供了实验依据.

目的 建立大鼠肠温孵液中意大利牛舌草4种成分(芦丁、山奈酚-3-O-芸香糖苷、水仙苷、迷迭香酸)的一测多评方法(Quantitative Analysis of Multi-components by Single-marker,QAMS).方法 采用聚酰胺柱色谱对意大利牛舌草粗提物进行纯化.建立同时测定大鼠肠温孵液中意大利牛舌草提取物主要成分芦丁、山奈酚-3-O-芸香糖苷、水仙苷、迷迭香酸的高效液相色谱定量分析方法.以芦丁为内参物,测定大鼠肠温孵液中意大利牛舌草提取物主要成分芦丁与山奈酚-3-O-芸香糖苷、水仙苷、迷迭香酸的相对校正因子(Relative Correction Factor,RCF),利用RCF进行含量计算(计算值),并与外标法(External Standard Method,ESM)的测定结果(实测值)进行比较,对该方法进行可行性验证.结果 采用ESM法测定8个批次的大鼠肠温孵液中意大利牛舌草提取物主要成分芦丁、山奈酚-3-O-芸香糖苷、水仙苷、迷迭香酸的平均含量分别为14.20、15.88、9.80、66.90 mg/g.在线性范围内,芦丁与山奈酚-3-O-芸香糖苷、水仙苷、迷迭香酸的RCF分别为0.983、1.101、0.843(RSD值均＜2％).利用RCF计算得山奈酚-3-O-芸香糖苷、水仙苷、迷迭香酸的平均含量分别为15.67、9.87、67.44 mg/g,两种方法的含量测定结果基本一致(相对偏差均＜2％).结论 一测多评法简便、准确、可行,可用于大鼠肠温孵液中意大利牛舌草提取物山奈酚-3-O-芸香糖苷、水仙苷、迷迭香酸的含量测定.

目的 研究意大利牛舌草(Anchusa italica Retz)不同极性溶剂萃取物对大鼠对缺氧/复氧心肌细胞(myocardial cells,MCs)氧化应激损伤保护作用的影响.方法 模拟缺血再灌注损伤,建立体外培养心肌细胞缺氧/复氧模型,分为 12 组,正常对照组,缺氧/复氧模型组,阳性对照组,处理组包括:高、中、低剂量乙酸乙酯萃取物+缺氧/复氧模型组;高、中、低剂量正丁醇萃取物+缺氧/复氧模型组;高、中、低剂量水萃取物+缺氧/复氧模型组.采用 MTT法测定心肌细胞存活率;酶标仪检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)水平及细胞内的丙二醛(MDA)含量和细胞内超氧化物歧化酶(SOD)的活力.结果 与缺氧/复氧模型组比较,意大利牛舌草乙酸乙酯萃取物高剂量组、正丁醇萃取物高剂量组、水萃取物高剂量组心肌细胞存活率升高,LDH 水平及 MDA含量降低,SOD活力提高,差异有统计学意义(P ＜0.01).结论 意大利牛舌草乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物、水萃取物对缺氧/复氧心肌细胞的损伤具有保护作用,其机制可能与平衡氧化应激产物和抗氧化应激的酶系统有关.

目的:研究建立意大利牛舌草及其易混淆品的鉴别方法,为意大利牛舌草的质量控制提供依据.方法:采集不同产地的意大利牛舌草及其混淆品,采用药材显微鉴别、薄层色谱鉴别和DNA分子鉴别方法,对意大利牛舌草及其混淆品进行鉴别研究.结果:意大利牛舌草与琉璃苣、倒提壶在显微、薄层色谱有较为明显的差异,DNA分子鉴定表明,意大利牛舌草及其混淆品的最小种间K-2-P距离大于种内最大K-2-P距离,邻接法(NJ)树中意大利牛舌草的样品聚为一支,琉璃苣、倒提壶混淆品分别表现出单系性,可明显区分开.结论:该文在对意大利牛舌草及混淆品的茎、粉末显微特征比较研究的基础上,采用药材显微鉴别、薄层色谱鉴别与DNA分子鉴定手段相结合的综合鉴别模式,确定了意大利牛舌草及其混淆品的鉴别要点,DNA分子鉴定技术对于意大利牛舌草及其混淆品的鉴别有较大的优势,该法专属性强、灵敏度高,是传统鉴别技术的重要补充,具有较大的潜力和应用前景.建议进一步提高和完善意大利牛舌草的质量标准,加强意大利牛舌草的质量控制.

目的 研究意大利牛舌草提取物对大鼠离体胸主动脉的舒张作用.方法 将意大利牛舌草粉碎成粗粉,70％乙醇超声提取3次,浓缩提取液.处死大鼠,分离胸主动脉,制作血管环,分别设置内皮完整组和内皮去除组,2组累积加药法记录牛舌草提取物溶液(1.0、3.0、5.0、7.0、9.0、11.0 mg/mL)对去甲肾上腺素(PE)预收缩的胸主动脉环的张力的影响,测定血管舒张率.结果 牛舌草对大鼠内皮完整组和内皮去除组的胸主动脉环均具有浓度依赖性的舒张作用,内皮完整组和内皮去除组的Emax分别为(93.82％±5.35％)和(91.54％±5.00％),2组舒张作用效果相比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 牛舌草对大鼠胸主动脉环具有剂量依赖性舒张血管的作用,其舒张血管作用与血管上的内皮细胞无依赖作用.

目的 研究意大利牛舌草水、乙醇提取物抗氧化及抗血栓的作用.方法 将意大利牛舌草粉碎成粗粉,分别用蒸馏水和70％乙醇提取,得到意大利牛舌草水提取物和乙醇提取物.选取健康昆明小鼠70只,随机分为7组(n=10),正常对照组给予等体积蒸馏水,意大利牛舌草水提物高(678.40 mg/kg)、中(339.20 mg/kg)、低剂量组(169.60 mg/kg),意大利牛舌草乙醇提物高(409.50 mg/kg)、中(204.75 mg/kg)、低剂量组(102.38 mg/kg),各组小鼠每天灌胃给药1次,连续灌胃21 d,按试剂盒方法说明书测定小鼠血清中的SOD、MDA、GSH-PX含量.测定意大利牛舌草水、乙醇提取物对正常小鼠凝血时间、止血时间及对正常大鼠动脉血栓形成的作用.结果 与正常对照组比较,意大利牛舌草乙醇提物高剂量组小鼠血清中SOD、GSH-PX活性升高,MDA含量降低,差异有统计学意义(P<0.01);意大利牛舌草乙醇提物中剂量和低剂量组小鼠血清中SOD、GSH-PX活性升高,MDA含量降低,差异有统计学意义(P<0.05);意大利牛舌草水提物各剂量组小鼠血清中SOD、GSH-PX活性升高,MDA含量降低,差异无统计学意义(P>0.05).意大利牛舌草乙醇提物(204.75 mg/kg)和水提物(339.20 mg/kg)均可延长正常小鼠的凝血时间,意大利牛舌草乙醇提物(141.75 mg/kg)和水提物(234.83 mg/kg)均可降低大鼠血栓湿重,血栓抑制率分别为42.76％、36.68％.结论 意大利牛舌草乙醇提取物具有抗氧化作用,意大利牛舌草水、乙醇提取物可以延长凝血时间,防止血栓的形成.

目的 采用星点设计-响应面法优化意大利牛舌草总皂苷提取工艺.方法 采用单因素试验研究乙醇浓度、液料比、回流提取时间及回流提取次数对意大利牛舌草总皂苷提取效果的影响.在单因素试验结果基础上,采用星点设计-响应面法优选意大利牛舌草总皂苷提取工艺.结果 优选出的意大利牛舌草总皂苷提取工艺为:提取溶剂为80％乙醇,液料比14∶ 1(mL∶g),回流提取1h,提取2次,总皂苷含量为(203.04±1.36)mg/g(RSD=0.67％),与预测值之间的相对误差为1.04％.结论 星点设计-响应面法优化意大利牛舌草总皂苷提取工艺方法简便,结果可靠,预测性良好.

目的 研究意大利牛舌草提取物抗炎镇咳及体外抑菌作用,为临床应用提供科学依据.方法 采用角叉菜胶致大鼠足趾肿胀实验,观察意大利牛舌草不同提取物的抗炎作用;采用浓氨水诱导小鼠止咳实验,观察不同提取物的镇咳作用;采用试管稀释法,评价不同提取物对5种菌株(金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白念珠菌)的体外抑菌作用.结果 意大利牛舌草0.63 g·kg-1、2.52 g·kg-1乙醇提取部位、2.52 g·kg-1乙酸乙酯与正丁醇部位在致炎后的不同时间段内抑制大鼠足趾肿胀程度显著(P<0.01),2.52 g·kg-1乙醇提取部位抑制炎症效果与地塞米松组作用相当,正丁醇部位与乙醇部位的抑制炎症效果差异无统计学意义;小鼠镇咳实验中,0.90 g·kg-1、3.04 g·kg-1乙醇提取部位与3.04 g·kg-1正丁醇部位的延长小鼠咳嗽潜伏期作用与急支糖浆差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),且上述部位的3.04 g·kg-1剂量组小鼠咳嗽次数明显减少(P<0.05);4种意大利牛舌草提取物分别对枯草芽孢杆菌具有抑菌活性,其中乙酸乙酯部位与水溶部位的抑制作用较强.结论 意大利牛舌草乙醇提取部位及正丁醇部位具有抗炎,镇咳的药理活性,而乙酸乙酯部位对枯草芽孢杆菌具有体外抑制活性.

目的:优选意大利牛舌草抗炎活性部位的提取工艺.方法:采用单因素与正交试验设计法,以总黄酮与总多酚为指标综合评价意大利牛舌草优选提取工艺参数;建立角叉菜胶致大鼠足趾炎症模型,以足趾肿胀度为指标,评价提取物的抗炎药理活性.结果:优化的提取工艺为25倍量70％乙醇,95℃加热回流提取1.5小时,提取2次;药效评价证实2.52 g/kg给药剂量的70％乙醇提取物具有抑制大鼠足趾肿胀的作用.结论:优选的意大利牛舌草抗炎活性部位的提取工艺稳定、可行.

目的 研究意大利牛舌草的化学成分及其对大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用.方法 用体积分数为60％的乙醇提取,经硅胶柱色谱、聚酰胺层析和制备液相等多种色谱方法进行分离纯化得到单体化合物,通过理化性质和核磁共振波谱鉴定化合物结构.建立大鼠乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,考察单体化合物对心肌细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)水平、细胞内丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响.结果 从意大利牛舌草中分离鉴定了10种化合物,分别为β-谷甾醇乙酸酯(1)、β-谷甾醇(2)、苦莓苷(3)、芦丁(4)、山柰酚(5)、咖啡酸(6)、胡萝卜苷(7)、山柰酚-3-O-芸香糖苷(8)、水仙苷(9)和迷迭香酸(10).化合物4,8,9和10组心肌细胞存活率分别为91.05％,92.32％,93.41％和93.38％.与模型组比较,心肌细胞LDH水平和MDA含量均显著降低,SOD活性显著升高.结论 化合物1,2,3,7和8均为首次从该植物中分离得到,单体化合物4,8,9和10对缺氧/复氧心肌细胞损伤具有保护作用.