本文使用国产24道遗传分析仪搭配国产36 cm毛细管阵列,解决无胶筛分毛细管电泳技术为基础的遗传分析仪在测序中荧光信号校正、运行电压、迁移校正问题.以24道遗传分析仪原始光谱荧光信号为基础,建立光谱校正模型,获得基线噪声阈值.通过运行电压与峰间距值绘制标准曲线,利用测序分析软件计算清晰片段长度,确定最佳运行电压和峰间距,进而计算迁移偏移值,建立碱基大小与迁移时间的线性模型,实现碱基的准确识别.研究表明,在合适的光谱校正和基线噪声阈值限制下,当运行电压设置为10 kV,峰间距为13.05帧时,分析仪的最长清晰片段检验能力最强,为561 bp.通过迁移修正值的补偿,建立碱基大小与迁移时间的线性模型,碱基G、A、T、C的R2(标准曲线)值分别从0.992 7、0.992 7、0.994 5、0.987 9提高到0.999 6、0.999 8、0.999 6、0.999 7,且修正后,各个荧光标记的碱基均能得到正确标记,无漏标和错标,清晰片段长度延长到621 bp.本研究可以指导国产遗传分析仪测序模块的优化和设计,使分析仪的DNA碱基识别功能更高效和准确.

目的 制备一种毛细管电泳筛分介质,将其应用于GA118-16A型遗传分析仪上.方法 通过聚合反应、冷冻干燥得到白色固体聚丙烯酰胺(LPA),经溶胶缓冲液溶胀后获得所需的毛细管电泳筛分介质.对其分子量、结构等关键性能指标进行表征;并将其应用于GA118-16A型遗传分析仪上,根据空间校正、光谱校正及STR检测结果对其筛分性能进行评价.结果 制备的筛分介质Mw 1.8×105Da,Mn 1.2×105Da,多分散性1.5;结构正确且纯度高;在GA118-16A型遗传分析仪上能够建立空间校正、光谱校正文件;能够有效分离相差1bp的DNA片段,峰型尖锐、无杂峰、无拖尾、无丢峰现象.结论 该方法制备的筛分介质完全可应用于GA118-16A等国产遗传分析仪.

目的 探讨惠州地区血红蛋白Q-Thailand(hemoglobin Q-Thailand,HbQ-Thailand)的血液学和分子特征.方法 应用毛细管电泳和琼脂糖凝胶电泳技术检测34 977份外周血样本,对筛查出Hb Q条带的样本分别进行血细胞分析和DNA测序.采用液相芯片和导流杂交技术检测中国人常见的23种a和β地贫基因突变.结果 惠州地区人群Hb Q-Thailand的检出率为0.13％,家系分析其与-a4.2缺失型的a地贫存在连锁.检出的45例Hb Q-Thailand杂合子的血液学参数(血红蛋白、红细胞平均体积、平均血红蛋白含量、HbA、HbA2、Hb Q)分别为(130.25±17.37)g/L、(79.81±4.97)fl、(26.38±1.48) pg、(71.37±5.07)％、(1.65±0.45)％、(26.87±4.95)％.选取408例-α4.2缺失杂合子与Hb Q-Thailand杂合子的数据相比较,除了HbA和HbA2差异有统计学意义外(P＜0.05),其余指标差异均无统计学意义.结论 惠州地区人群HbQ-Thailand的检出率高,以杂合子且与-α4.2缺失杂合子连锁存在.通过血红蛋白电泳可以检出Hb Q条带,当Hb Q-Thailand杂合子合并其他类型地贫时,可表现出明显的血液学参数差异性.

目的 建立肠道腺病毒(Adv)、诺如病毒G1及G2型(NoV G1和NoV G2)、A组轮状病毒(RV A)、扎如病毒(SV)及星状病毒(HAstV)5种儿童腹泻病毒多重PCR-毛细管电泳法检测体系.方法 针对Adv、NoV G1、NoV G2、RV A、SV及HAstV保守序列设计特异性引物,设计并优化腹泻病毒的多重PCR-毛细管电泳检测体系,琼脂糖凝胶电泳确认扩增片段;进行性能(灵敏度、特异性)评估;收集185例儿童病毒样腹泻样本,采用多重PCR-毛细管电泳体系进行检测,并通过测序验证阳性结果 .结果 所设计引物特异性扩增出5种腹泻病毒;多重PCR-毛细管电泳检测体系检出限为102～103 copies/μL,CV均<10％;其他腹泻病原体未出现交叉反应,无明显的非特异杂峰,特异性较好;185例临床病毒样腹泻样本检测阳性132例(71.35％),其中RV A 105例(56.8％)、Adv 22例(11.9％)、SV 15例(8.1％)、NoV G211例(5.9％)和HAstV 10例(5.4％),其中包括双病毒感染样本;毛细管电泳进样量需20μL,3 h内完成全部分析;测序结果 与GeneBank比对分析,序列一致.结论 成功建立一种能够快速筛查5种常见儿童腹泻病毒的多重PCR-毛细管电泳检测方法 .

目的 评估毛细管电泳法(CE)检测血清蛋白电泳(SPE)的性能.方法 应用美国临床和实验室标准化协会(CLSI)EP5-A2、EP15-A2、C28-A3c、EP9-A2方法评价CE检测SPE的精密度、正确度、生物参考区间与琼脂糖凝胶电泳法(AGE)的偏差、样本的稳定性及对M蛋白的筛查情况.结果 CE检测SPE的批内、批间精密度均符合要求.正确度验证显示测定国内、国外、厂家提供的评价物质的结果符合验证要求.与AGE比较,清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白、γ 球蛋白平均相对偏差为-7.79％、124.61％、-18.24％、11.33％、14.87％,α1球蛋白、α2球蛋白在参考区间处的预期偏差存在明显差异,结果一致性较差,无可比性.生物参考区间验证α2球蛋白、β1球蛋白、γ球蛋白未能通过评估,证明厂家提供的美国人参考区间不适合我国人群.该院检验科不可接受直接转移该参考区间.稳定性试验显示,β2球蛋白区在室温和4℃避光保存平均偏差呈负增长趋势,分别为-69.16％ ～-3.69％ 和-41.62％ ～-0.49％;C E检测M蛋白的灵敏度为0.753,特异度为0.988,ROC曲线下面积为0.870,与AGE比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 CE检测SPE与AGE比较存在一定差异,应用CE检测SPE是筛查和定量M蛋白的一种好方法.

目的 通过Y-STR复合扩增技术检测AMELY缺失的男性个体Y染色体的完整性,并对数据库中的STS位点进行筛选并设计引物,检测Y染色体AMEL区域的STS位点缺失情况,为进一步研究中国人口中AMELY的缺失提供数据和理论依据.方法 应用Goldeneye 20A PCR扩增试剂盒、华夏TM白金PCR扩增试剂、Y filer plus试剂盒和Goldeneye 27YB试剂盒进行PCR扩增、通过ABI 3500遗传分析仪进行毛细管电泳以及STR分型.通过UniSTS database和UCSC对Y染色体p11.2区域的多个STS位点进行筛选,部分STS位点自行设计引物,梯度PCR和常规PCR扩增结合琼脂糖凝胶电泳进行STS位点的分析.结果 Goldeneye 20A和华夏TM白金两种试剂盒分型结果均显示两父子AMELY等位基因无效扩增.Y filer plus和27YB试剂盒分型结果显示两父子均在DYS570和DYS576位点无效扩增.STS位点扩增显示两父子的Y染色体缺失的STS位点有BV703904、BV703923、SY2137、SY716、DYS256、DYS267、SY2232、SY2233、DYS261 和 DYS260.结论 AMELY 无效扩增的父子 Yp11.2缺失片段包含了 BV703904-DYS260之间的区域,长度为2.63～2.74 Mb.