目的:了解多重RT-PCR方法检测13种常见呼吸道感染病原体，在老年患者呼吸系统感染病原体检测中的应用价值。方法:317例2016年6月至2017年5月在石家庄市第一医院老年科就诊的具有呼吸系统感染症状的老年患者，年龄60～98岁，采集其抽吸痰液，提取病毒DNA/RNA，利用多重RT-PCR技术扩增，通过毛细管电泳，同时检测13种呼吸道病原体；并以直接测序方法和荧光实时PCR法为标准，评价该试剂的临床性能。结果:使用直接测序和荧光实时PCR结果为参照，多重RT-PCR技术的准确性为99.93% (95% CI: 99.79%～99.98%)，阳性预测值为99.24% (95% CI: 97.78%～99.74%)，阴性预测值为100% (95% CI: 99.9%～100%)，Cohen’s kappa值为0.9958 (95% CI: 0.965 2～1.026)。在317例老年患者中，呼吸道病原阳性检出率为75.7% (240/317)，其中甲型流感病毒最高，为20.2% (64/317)，主要为H3亚型(70.3% (45/64)；其次为鼻病毒、腺病毒、肺炎支原体和乙型流感病毒，检出率分别为15.5% (49/317)、13.6% (43/317)、11.0% (35/317)和10.1% (32/317)。此外，同时检出2种以及2种以上病原体的老年患者为81例，检出率为25.6% (81/317)。 结论:多重RT-PCR方法能满足临床对呼吸道病原体检测的需求，并为老年患者呼吸系统感染的防治提供有效的临床资料。

目的:评估一种基于毛细管电泳的高苯丙氨酸血症的快速基因诊断方法的临床价值。方法:前瞻性单中心研究。选取2021年2月至2023年2月于南京市妇幼保健院经液相串联质谱新生儿筛查检测疑似高苯丙氨酸血症的40例患儿。其中男22例，女18例；平均诊断年龄21.93 d。采用毛细管电泳技术对40例疑似高苯丙氨酸血症患儿苯丙氨酸羟化酶( PAH)基因中的85个变异位点进行检测，对未明确诊断患儿的 PAH基因进一步采用Sanger测序进行检测。评估毛细管电泳技术的检出率、敏感度和特异度。 结果:在40例疑似高苯丙氨酸血症患儿中，毛细管电泳技术共检出71个 PAH变异，32例患儿明确基因诊断，5例患儿仅发现1个致病变异，3例患儿未检出变异。毛细管电泳技术的检出率为80.00%，敏感度为88.75%，特异度为100%。 结论:毛细管电泳技术能够快速、高效、准确地检出 PAH基因变异，且成本较低，是一种极具临床应用前景的高苯丙氨酸血症基因检测方法。

目的:对孕早、中期孕妇进行脆性X智力低下1(fragile X mental retardation 1，FMR1)基因筛查，为携带高风险CGG重复数者提供产前诊断。方法:采集2316名12～21 +6周的孕妇的外周血样，提取基因组DNA，用荧光PCR-毛细管电泳法检测FMR1的CGG重复次数。对3例携带前突变者提供遗传咨询及产前诊断。 结果:FMR1基因CGG重复数中间型携带率为1/178，前突变携带率为1/772，未发现全突变患者或携带者。CGG重复最大频率等位基因为29次，占比49.29%，其次为30次(28.56%)、36次(8.83%)。病例1孕12 +5周绒毛染色体检查示胎儿核型为45，X，FMR1基因CGG重复数为前突变，经遗传咨询后引产。其父母的重复数分别为70/-次、29/30次。病例2于孕20周行羊膜腔穿刺，胎儿FMR1基因CGG重复数为29/-次，染色体核型及染色体拷贝数变异检测均未见异常，选择继续妊娠。病例3经遗传咨询后拒绝产前诊断，足月顺产一女婴，出生体重2440 g，随访未见明显异常。 结论:孕妇应在早、中期进行FMR1基因筛查，携带高风险CGG重复数者应进行产前诊断、遗传咨询和家系筛查。

目的:调查海南黎族21个非DNA联合索引系统(combined DNA index system, CODIS)基因座的遗传多态性，探讨其在法医亲子鉴定、个体识别及群体遗传学研究中的意义。方法:采用荧光标记复合扩增和毛细管电泳技术，对339名海南黎族无关个体的21个非CODIS基因座进行基因分型，并计算遗传学参数。结果:21个非CODIS基因座在339例海南黎族无关个体中共检出173个等位基因，489种基因型，基因频率在0.0010～0.5434之间，基因型频率在0.0020～0.3274之间，杂合度分布在0.639～0.833之间，个人识别能力为0.803～0.948，三联体非父排除率为0.416～0.584，二联体非父排除率为0.140～0.238，多态信息含量为0.57～0.81，累积个人识别能力大于0.999 999 999 999 99，三联体累积非父排除率为0.999 999 883 211 752，二联体累积非父排除率为0.987 266。结论:D6S474的21个短串联重复序列基因座在海南黎族群体中具有良好的遗传多态性，在个体识别及亲子鉴定中是一个高效的检测系统，可作为补充基因座用于单亲、疑难、亲缘鉴定和突变亲子鉴定案件中。

目的:分析河北省石家庄地区人乳头状瘤病毒（human papillomavirus，HPV）感染特征以及HPV亚型分布情况，探讨多重PCR-毛细管电泳片段分析法的应用评估。方法:采用横断面调查研究，2022年5至8月期间纳入河北省人民医院434例女性（年龄范围17~74岁，就诊者260例、查体者174例）进行横断面调查，应用多重PCR-毛细管电泳片段分析法进行HPV分型检测。以多重荧光定量PCR试剂盒作为参考，采用卡方检验分析多重PCR-毛细管电泳片段分析法的诊断效果， Kappa值分析其一致性。 结果:总HPV感染率为45.85%（199/434），其中高危型HPV（HR-HPV）阳性率为35.48%（154/434）、低危型HPV（LR-HPV）3.92%（17/434）、HR-HPV和LR-HPV混合感染6.45%（28/434）、单一型别感染率27.88%（121/434）和多型别17.97%（78/434）。HPV52（9.68%，42/434）、HPV16（6.91%，30/434）、HPV58（6.91%，30/434）为常见HPV亚型。查体者阳性率为45.40%（79/174），接近于就诊者阳性率为54.76%（120/260），差异无统计学意义（ χ2=0.024， P>0.05）。17~30岁年龄组感染率最高为56.32%（46/84），各年龄组之间阳性率差异无统计学意义（ χ2=4.123， P>0.05）。以多重荧光定量PCR为参考，多重PCR-毛细管电泳片段分析法的敏感度和特异度分别是92.96%和94.04%， Kappa值为0.870。 结论:HPV感染可能呈现年轻化，HR-HPV感染阳性率最高，以HPV52、16、58为主要感染亚型。多重PCR-毛细管电泳片段分析法与多重荧光定量PCR相比的检测结果具有高度一致性，适合HPV DNA分型检测。

目的:探讨中国广东人群δ珠蛋白（HBD）基因变异谱及δ地中海贫血血液学表型特征。方法:采用回顾性病例分析研究，收集2020年7月至2022年12月参加广州市免费地中海贫血筛查的11 616对夫妇血液样本，进行血常规和血红蛋白（Hb）毛细管电泳分析，依据以上结果，共154例样本入组研究：（1）HbA 2<2.0%且无HbF条带组35例；（2）HbA 2<2.0%伴HbF条带组64例；（3）HbA 2<2.0%伴可疑HbA 2变异体组25例；（4）2.0%≤HbA 2<3.5%伴HbF条带且血常规异常［红细胞平均体积（MCV）<82 fl和/或红细胞平均血红蛋白含量（MCH）<27 pg］组25例；（5）2.0%≤HbA 2<3.0%伴β地中海贫血基因携带组5例。采用Sanger 测序检测δ珠蛋白基因的单核苷酸变异。 结果:（1）共检出22种HBD基因变异，包括6种新变异，前3位基因变异分别为c.-127T>C（57.02%，65/114）、c.-80T>C（9.65%，11/114）与c.349C>T（7.89%，9/114）。（2）HbA 2<2.0%且无HbF条带组检出HBD基因变异22例（62.85%，22/35），其中7例MCV、MCH均低于正常参考值，4例合并α地中海贫血；13例未检出HBD基因变异，其中12例MCV、MCH均明显低于正常参考值。19例血常规异常样本中，HBD基因变异检出异常者（7例）HbA 2水平低于未检出者（12例）（ P<0.01）。（3）HbA 2<2.0%伴HbF条带组检出HBD基因变异59例（92.18%，59/64），均为启动子区变异，59例样本HbF均<5.0%；5例HbF>5.0%样本均未检出HBD基因变异。（4）HbA 2<2.0%伴可疑HbA 2变异体组HBD基因变异检出率为100%（25/25），δ珠蛋白变异体值<1.0%。（5）2.0%≤HbA 2<3.5%伴HbF条带且血常规异常组未检出HBD基因变异。（6）2.0%≤HbA 2<3.0%伴β地中海贫血基因携带组5例全部检出HBD基因变异，HbA 2值为（2.62±0.17）%，HbF值（3.62±2.22）%。 结论:HBD基因变异类型多样，c.-127T>C是中国广东人群最常见类型；启动子区突变可导致HbA 2降低，HbF升高，但HbF值通常<5.0%，合并β地中海贫血可能>5.0%。本研究丰富了广东人群HBD基因突变谱。

目的:本研究旨在探讨Delta-like配体蛋白1（delta-like ligand protein-1，DLL1）基因的两个SNP位点rs2738822（C>T）、rs9459988（T>G）及基因表达对乳腺癌新辅助化疗后骨髓抑制的影响。方法:选择在临沂市人民医院首次就诊并接受新辅助化疗的乳腺癌患者作为研究对象，其中重度骨髓抑制90例，轻度骨髓抑制72例。收集患者的一般人口学特征和实验室检测指标。采用毛细管电泳和片段分析（SNaPshot）技术对DLL1基因的两个SNP位点rs2738822、rs9459988进行基因分型。采用定量实时荧光定量聚合酶链式反应（quantitative reverse transcription polymerase chain reaction，qRT-PCR）检测法测定DLL1基因mRNA相对表达量。结果:对于DLL1基因rs2738822位点，严重骨髓抑制组和轻度骨髓抑制组的基因型分布差异有统计学意义（ χ2=8.622， P=0.013）；相对于CC基因型，CT和TT基因型携带者发生严重骨髓抑制的风险均更高， OR值分别为2.746（1.335~6.882）和3.054（1.282~8.143）；显性模型结果显示，TT或CT携带者发生严重骨髓抑制的风险显著高于CC基因型患者， OR值为2.976（1.231~4.963）。对于rs9459988位点，严重骨髓抑制组和轻度骨髓抑制组的基因型分布差异无统计学意义（ χ2=2.149， P=0.342）。显性模型结果表明，TG或GG携带者发生严重骨髓抑制的风险显著高于TT携带者， OR值为2.046（1.053~5.611）。严重骨髓抑制者DLL1基因mRNA相对表达量为1.15±0.23，显著低于轻度骨髓抑制者2.64±0.51（ t=6.381， P<0.001）。对于rs2738822位点，随着T等位基因的增加，DLL1基因mRNA相对表达量逐渐降低（ P<0.05）；对于rs9459988位点，携带突变等位基因G患者的DLL1基因mRNA相对表达量也显著低于野生型CC携带者（ P<0.05）。 结论:DLL1基因rs2738822和rs9459988突变与乳腺癌新辅助化疗后严重骨髓抑制的发生有关，可作为预测乳腺癌患者新辅助化疗骨髓抑制程度的遗传标志。

目的:探讨结肠腺瘤性息肉病蛋白（adenomatous polyposis coli, APC）基因的两个SNP位点E1317Q（rs1801166，G>C）和D1822V（rs45952，A>T）多态性与绝经后女性骨质疏松及骨代谢指标的相关性。方法:选择2019年3月至2021年3月于浙江大学医学院附属第二医院进行常规体检的374例绝经后女性作为研究对象，分为骨量正常组（103例）、骨量减少组（114例）和骨质疏松组（157例）。采用西门子公司生产的128排螺旋CT机测量骨密度；记录临床和骨代谢指标；应用毛细管电泳和片段分析（SNaPshot）技术对2个SNP位点进行基因分型。在定量实时荧光定量聚合酶链式反应系统中测定APC基因mRNA的相对表达量。结果:APC基因rs1801166和rs45952位点基因型和等位基因频率分布在三组间的差异均有统计学意义（ P均<0.05）。对于rs1801166位点，两两比较结果显示骨质疏松组的基因型分布与骨量正常组、骨量减少组间差异具有统计学意义（ P均<0.05）；等位基因频率比较在不同两组间差异均有统计学意义（ P均<0.05）；对于rs45952位点，两两比较结果显示基因型分布和等位基因频率在骨质疏松组与骨量正常组间差异有统计学意义（ P<0.05）。rs1801166位点野生型和突变型间的血钙、血磷、碱性磷酸酶、25-羟基维生素和骨密度比较差异均有统计学意义（ P均<0.05）；rs45952位点野生型和突变型间血钙、碱性磷酸酶、25-羟基维生素和骨密度比较差异均有统计学意义（ P均<0.05）。骨量正常组、骨量减少组和骨质疏松组的APC基因mRNA相对表达量两两比较差异有统计学意义（ P均<0.05）。rs1801166和rs45952位点位点野生型的APC基因mRNA相对表达量均显著低于突变型（ P均<0.05）。 结论:APC基因变异与绝经后女性骨质疏松及骨代谢指标显著相关，并可能影响基因的表达水平。

目的:探索不同长度poly(A)尾对mRNA体外表达的影响以及含poly(A)尾转录模板在大肠埃希菌中的传代稳定性。方法:设计并构建含38、60、103、125 nt和60 nt+6 nt间隔序列+60 nt(简称126 nt)poly(A)尾的模板质粒，利用单酶切将其线性化并以此作为转录模板进行体外转录反应制备增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein，EGFP)-mRNA。将含有不同长度poly(A)尾的EGFP-mRNA转染293T细胞，流式细胞术检测EGFP表达情况。将poly(A)尾长度为125 nt和126 nt的模板质粒分别转化至大肠埃希菌TransStbl3感受态细胞以及Top10感受态细胞中，各挑取7个单克隆进行培养并提取质粒，质粒经双酶切后进行毛细管电泳检测。分别从中选取3个测序正确的单克隆于37℃条件下进行连续传代，每两代提取一次质粒，双酶切后进行毛细管电泳检测。同时将poly(A)尾长度为125 nt的两组单克隆再分别于30℃条件下进行连续传代，每两代提取一次质粒并进行双酶切鉴定和毛细管电泳检测。结果:成功构建了含不同长度poly(A)尾的转录模板。流式细胞术结果显示，poly(A)尾长度为103 nt和125 nt的模板质粒荧光表达明显高于poly(A)尾长度为38 nt与60 nt的模板质粒。poly(A)尾长度为126 nt的模板质粒荧光表达显著高于其他组。poly(A)尾长度为125 nt的模板质粒转化TransStbl3感受态细胞和Top10感受态细胞后稳定序列的百分比分别为76%和91%，37℃条件下连续传代均可稳定传代至第4代，30℃条件下连续传代可分别稳定传代至第16代和第10代。poly(A)尾长度为126 nt的模板质粒转化TransStbl3感受态细胞和Top10感受态细胞后稳定序列的百分比分别为95%和48%，37℃条件下连续传代均可稳定传代至第12代。结论:mRNA中poly(A)尾的长度和组成对目的蛋白的表达均有影响，在poly(A)尾中添加长度为6 nt的间隔序列以及30℃低温培养均有助于增加模板质粒的传代稳定性，为mRNA疫苗体外转录模板的设计和生产制备提供参考。

目的:分析湘潭市产前人群δ珠蛋白（hemoglobin subunit delta，HBD）基因突变谱及血液学表型，为罕见、复杂血红蛋白病的筛查和诊断提供科学依据。方法:选取2022年10月至2023年12月在湘潭市妇幼保健院进行地中海贫血（简称地贫）筛查和基因检测的产前人群为研究对象，结合毛细管电泳结果进一步进行HBD基因测序，鉴定具体基因型。结果:共纳入5 371例受试对象，检出HBD基因突变22例，突变携带率为0.41%（22/5 371）。其中，14例为δ地贫、7例为δ异常血红蛋白、1例为δ地贫合并δ异常血红蛋白；共包括7种HBD突变基因型，以-77（T>C）最为常见，其次是血红蛋白（Hb）A 2-Huadu和CD34（+GGT），分别占68.2%（15/22）、9.1%（2/22）、9.1%（2/22）。CD34（+GGT）为新发现基因型，CD7（GAG>TAG）为中国人群中首次报道。22例HBD基因突变携带者Hb含量、平均红细胞体积、平均红细胞血红蛋白含量均正常或接近正常；毛细管电泳均表现为Hb A 2含量降低。 结论:湘潭市产前人群有HBD基因突变检出，-77（T>C）是最常见的突变基因型；突变携带者均无贫血表现。