目的 制备一种新型脂质载药纳米探针HD@P-NPs,探讨其体外超声成像效果及用于瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFs)迁移抑制和级联放大治疗的效果.方法 采用超声乳化法制备以全氟乙烷为核心脂质壳层,负载血卟啉单甲醚和阿霉素的脂质载药纳米探针HD@P-NPs,观察其形态、结构并检测粒径和Zeta电位,计算药物包封率和载药率;进一步观察HD@P-NPs在低强度聚焦超声(LIFU)辐照下的二维超声及超声造影成像效果;溶血实验检测HD@P-NPs在不同浓度下的溶血率.取对数生长期的瘢痕疙瘩KFs按照不同实验条件培养,并分为5组:对照组(不予特殊处理)、LIFU辐照组、D@P-NPs组(仅加入阿霉素)、HD@P-NPs组、HD@P-NPs+LIFU辐照组,使用MTT法检测各组细胞存活率;Calcein AM/PI染色观察各组细胞活性;细胞迁移实验检测各组细胞迁移率;活性氧荧光染色观察各组活性氧产生情况,获取其荧光强度.结果 成功制备HD@P-NPs,呈球形且大小均一,平均粒径(170.36±6.03)nm,平均Zeta电位(-36.91±3.56)mV;血卟啉单甲醚包封率和载药率分别为67.41%、5.18%,阿霉素包封率和载药率分别为72.80%、11.20%.LIFU辐照后,HD@P-NPs相变产生微气泡,在3 W/cm2、2 min辐照条件下可实现最佳成像效果,后续实验采用此辐照条件.HD@P-NPs在25、50、100、200μg/ml浓度下的溶血率分别为(2.48±0.02)%、(4.87±0.06)%、(5.03±0.03)%、(6.10±0.04)%.对照组、LIFU辐照组、D@P-NPs组、HD@P-NPs组及HD@P-NPs+LIFU辐照组细胞存活率分别为100%、(96.87±0.71)%、(77.94±2.83)%、(77.11±3.53)%、(49.75±1.25)%,HD@P-NPs+LIFU辐照组与对照组细胞存活率比较差异有统计学意义(P＜0.05).HD@P-NPs+LIFU辐照组见明显红色荧光及少量绿色荧光.对照组、LIFU辐照组、D@P-NPs组、HD@P-NPs组、HD@P-NPs+LIFU辐照组的细胞迁移率分别为(29.96±3.20)%、(28.62±2.56)%、(18.13±0.89)%、(17.46±0.20)%、(10.04±1.62)%,其中HD@P-NPs+LIFU辐照组细胞迁移率低于其余各组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).HD@P-NPs+LIFU辐照组活性氧荧光强度为22.43±3.10,与其余各组比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 本实验成功制备了HD@P-NPs,其在LIFU辐照下可提高靶区有效药物浓度,具有较好的体外超声成像效果,可实现超声可视化瘢痕疙瘩KFs级联放大治疗.

高血压性脑出血(HICH)是高血压病的严重并发症,是最常见的出血性中风,约占其50％～70％,是目前致残率、致死率最高的卒中类型[1].高血压性脑出血可发生在脑的各个部位,主要发生在外囊-壳核、内囊-球脑、桥脑中央和小脑,大多数发生在动脉分叉处,颈硬、抽搐、呕吐、头痛是常见临床表现,舒张压≥110 mmHg.

慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B，CHB)是全球性的公共卫生威胁，肝硬化和肝细胞癌是致患者死亡的2个主要并发症。虽然核苷(酸)类似物的广泛使用降低了这些并发症的发生率和患者的病死率，但在功能性治愈方面仍收效甚微。随着技术的进步与发展，CHB的治疗策略研究取得了丰硕成果，这些策略分为感染相关治疗策略和免疫相关治疗策略，前者靶向病毒的生命周期，在病毒进入、基因转录、蛋白质翻译、核衣壳组装、病毒释放等环节发挥作用，后者靶向宿主的免疫应答，在细胞免疫应答、体液免疫应答、固有免疫应答等环节发挥作用。现从以上两个方面对这些最新成果进行回顾和展望。

患者男，65岁，主诉左小腿红斑及增殖性斑块伴痒30余年，加重半年。患者于1990年左右无明显诱因左外踝出现瘙痒，搔抓后形成红斑、丘疹，逐渐累及左小腿，部分皮损较肥厚，呈增殖性改变，且瘙痒加重，无关节痛及发热等不适，否认有足癣病史。1997年在当地医院手术切除部分增殖性皮损后，左小腿外侧形成溃疡。2007年至2016年多次在各地皮肤科就诊，诊断为真菌感染（具体不详）。在医生指导下口服伊曲康唑200 mg每日2次，疗程1年，效果不明显，遂遵医嘱改为盐酸特比萘芬250 mg/d疗程2年，自觉效果不佳，遂自行停药，未再治疗。2016年8月无明显诱因患者发现皮疹再次增多，并向大腿蔓延，遂就诊，无发热、咳嗽咳痰，无关节畸形及疼痛，无明显体重减轻，饮食睡眠及二便尚可。家族中无类似疾病患者。既往无输血及应用血制品史，无高血压、糖尿病等病史，无传染性疾病史，无食物、药物过敏史。系统检查：一般情况尚可，各系统无明显异常。实验室检查：血尿常规、肝肾功能正常，梅毒螺旋体和人免疫缺陷病毒相关检查均为阴性。皮肤科检查：左小腿可见多发性黄豆至鸽蛋大小红斑、丘疹及增生性结节、斑块，小腿外侧部分斑块破溃，见较多黏性渗出物及黄褐色结痂，左踝及足背肿胀（图1A）。溃疡边缘行组织病理检查：表皮角化过度，棘层增生肥厚，呈假上皮瘤样增生，真皮中上可见密集中性粒细胞、淋巴细胞、组织细胞及多核细胞浸润（图1B），过碘酸希夫染色可见硬壳小体（图1C）。真菌直接镜检：取溃疡处脓液和黑色小点部位脓液涂片可见少量杆状细菌和少量真菌菌丝。组织液细菌培养：血平板37 ℃培养7 d有细菌生长，通过VITEK2 COMPAC型全自动药敏分析系统鉴定为奇异变形杆菌、摩尔摩根菌摩根亚种（ Morgamella morganii subsp. morganii）。脓液真菌培养：沙氏培养基27 ℃培养4周见单个黑色菌落，表面凸起灰黑色菌落，背面呈深橄榄黑色，表面可见气生绒毛（图2A）。行小培养4周，显微镜下见大片枝孢型或喙枝孢型分支，分生孢子主要位于孢子梗顶端，以单细胞性紧密堆积成球状或排列成短链状（图2B）。药敏检测显示，伊曲康唑、氟康唑、伏立康唑、泊沙康唑、特比萘芬、两性霉素B和卡泊芬净最小抑菌浓度值分别为128、128、256、4、512、256和256 μg/ml。分子生物学鉴定：提取真菌DNA送至北京华大基因公司进行序列测定，Genbank BLAST比对结果提示该菌株与 Fonsecaea nubica碱基序列一致性大于99%，该菌序列已上传至Genbank数据库并获得编号MW269556（https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/MW269556），通过内部转录间隔序列构建系统发育树，并使用MEGA7.0建立邻里连接，最终显示菌株的来源属 Fonsecaea nubica。

目的:研制一种乳腺癌细胞膜(CCM)包被的载血卟啉单甲醚(HMME)仿生纳米分子探针，观察其体外靶向同源乳腺癌细胞的能力，并探讨其体外增强光声显像及声动力治疗(SDT)乳腺癌的效果。方法:通过化学裂解及反复冻融法提取乳腺癌4T1细胞膜，然后以双乳化法联合挤压法制备CCM包被的载HMME的聚乳酸-羟基乙酸共聚物仿生纳米粒作为分子探针(CHP-NPs)。检测纳米粒的基本表征；体外观察纳米粒对同源乳腺癌细胞的靶向能力及增强光声显像的效果；以单线态氧荧光探针(SOSG)验证纳米粒产生活性氧(ROS)的性能，并以CCK8细胞毒性实验评估其对乳腺癌细胞的SDT效果。结果:所制备的CHP-NPs大小均一，形态规则呈球形"核壳结构"，粒径为(275.23±8.25)nm，表面电位为(-18.43±0.45)mV;激光共聚焦显微镜下观察到CHP-NPs能靶向同源4T1细胞；体外光声显像实验显示，纳米粒光声信号随其浓度的升高而增强；经SOSG探针检测，CHP-NPs在超声辐照下可产生ROS；单独CHP-NPs与4T1细胞共同孵育，不应用超声辐照时，对细胞存活率无明显影响，其浓度为0.6 mg/ml时细胞存活率仍达95%；经超声辐照时，CCK8实验显示该CHP-NPs对乳腺癌细胞具有显著的SDT效果。结论:成功制备出乳腺癌细胞膜仿生纳米分子探针，该探针具有良好的靶向同源肿瘤的能力，并可显著增强肿瘤光声显像及SDT效果。

目的:基于深度学习脑龄预测方法和FreeSurfer图像分析软件，探讨特发性全面性癫痫（IGE）患者大脑形态结构的异常改变。方法:回顾性病例对照研究。纳入2020年1月—2021年12月山东省立医院及寿光市人民医院神经内科确诊的144例IGE患者。其中男84例、女60例，年龄10～70岁。基于公共脑成像数据库（人类连接组项目、中国人类连接组项目）建立正常人脑Ｔ 1加权像（T 1WI）MRI训练深度学习脑龄预测模型，并输入脑皮质及脑白质脑图。将IGE患者T 1WI MRI输入脑龄预测模型，获取预测脑龄。将27例未经治疗的早期IGE患者设为观察组，男18例、女9例，年龄（16.1±3.2）岁；招募与观察组年龄、性别匹配的29名健康志愿者作为对照组，男19例、女10例，年龄（16.4±4.5）岁，均行MR检查。观察项目：（1）比较IGE患者不同年龄段（10～20岁、>20～30岁、>30～40岁、>40～50岁、>50～60岁、>60～70岁）大脑的预测年龄与实际年龄的差异。（2）利用FreeSurfer软件，分析和比较观察组与对照组大脑皮质体积、厚度和表面积，以及局部形态的差异。 结果:（1）IGE患者的不同年龄段中，除>30~40岁外（ t=-1.58， P=0.138），脑龄预测值均大于实际年龄，差异均有统计学意义（ P值均<0.05）。（2）观察组与对照组的年龄、性别、教育程度等基线资料差异均无统计学意义（ P值均>0.05）。与对照组比较，观察组大脑左、右半球皮质厚度略变薄，差异有统计学意义（ t=3.91、3.40， P值均<0.01）；2组大脑半球皮质体积、表面积无明显变化，差异均无统计学意义（ P值均>0.05）。与对照组相比，观察组脑区中右侧眶额皮质体积增大，无脑区皮质体积减小；右侧中央后回、左侧中央沟附近中央后回、右侧舌回后部分、左侧舌回及楔叶的皮质厚度均增加，右侧中央前回、双侧额上回（背侧）、右侧内嗅皮质的皮质厚度均减小；右侧海马旁回的皮质表面积增大，无脑区的皮质表面积减小。观察组左、右侧苍白球及右侧丘脑体积较对照组缩小，差异均有统计学意义（ t=4.01、4.23、2.12， P值均<0.05）。2组左侧丘脑及双侧尾状核、壳核、海马及杏仁核体积比较，差异均无统计学意义（ P值均>0.05）。 结论:IGE患者在多个年龄段其脑结构都会发生异常改变。早期IGE患者的大脑皮质及皮质下核团仅发生细微结构的异常改变。

目的:探索载镁水凝胶微球的在体外细胞实验中的成骨活性.方法:设计和搭载微流控芯片装置,并利用该装置载镁水凝胶核-壳微球精准调控镁离子在体外稳定释放,系统研究可控镁离子释放促进成骨活性机制.结果:微流控芯片制备出的载镁水凝胶微球(PLGA/MgO-alginate微球)呈现单分散性和特殊的核-壳结构调控镁离子在体外稳定释放的浓度稳定在50 ppm.不仅能显著增强MC3T3-E1前成骨细胞的活性和增殖能力,还可以改善其成骨分化和矿化能力,并增强了 ALP活性.结论:载镁水凝胶核-壳微球能显著提高MC3T3-E1前成骨细胞的成骨活性.

目的 联合定量磁敏感图(QSM)及神经突方向离散度与密度成像(NODDI)研究帕金森病(PD)患者脑内铁沉积量与微观结构随疾病进展的演变规律及其两者之间的相关性.方法 41例PD患者(PD组)根据Hoenh-Yahr分级分为早期PD组(PD-1)和中晚期PD组(PD-2),同时纳入23名健康对照者(HC组).三组铁沉积量及NODDI相关参数的差异比较采用单因素方差分析,QSM与NODDI各参数间的相关性采用Spearman相关系数分析.结果 与HC组相比,PD患者多个核团存在不同程度的Vic值、Viso值、ODI值的降低及铁沉积量的异常升高.PD-1组中,黑质及红核的ODI值、苍白球的ODI值及Viso值与对应核团的定量磁敏感值之间存在相关性(r=-0.532,P=0.016;r=0.514,P=0.020;r=-0.516,P=0.020,r=-0.479,P=0.033);而 PD-2 组中,壳核的 Vic值、苍白球的Vic值及ODI值与对应核团的定量磁敏感值之间存在正相关(r=0.610,P=0.003;r=0.575,P=0.006;r=0.508,P=0.019).结论 随着PD的病程进展,PD患者脑内存在铁沉积量异常及微观结构改变,且两者之间具有一定的相关性.

目的 评价不同生物活性基团修饰的纳米磁珠核酸提取效能,为临床应用及结果评价提供一些依据.方法 通过不同生物活性基团修饰的纳米磁珠对检测乙型肝炎病毒的标本进行核酸提取,采用微量分光光度计(NanoDrop Onec)检测核酸的浓度及纯度,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测样本的CT值.结果 在几种纳米磁珠提取法中,超顺磁性羧基纳米微粒提取的核酸浓度及纯度最高(浓度平均为953.3 IU/mL),其次是二氧化硅磁性微球与羧基微球混合纳米磁珠及纳米磁性氧化物MnFe2O4提取法.羟基修饰二氧化硅颗粒以及壳聚糖包覆的磁珠提取的核酸浓度较高,但纯度较差(A260/280及A260/230比值均超出标准范围).对于同一样本,超顺磁性羧基纳米微粒提取的核酸扩增CT值为(21.28±0.36),核酸提取效率明显高于离心柱提取法,且具有统计学意义.二氧化硅磁性微球和羧基微球混合纳米磁珠、羟基修饰二氧化硅纳米磁珠及壳聚糖包覆的纳米磁珠核酸提取效率均低于离心柱提取法.此外,超顺磁性羧基纳米微粒的提取时间可缩短至15分钟.结论 超顺磁性羧基纳米微粒核酸提取效率、精密度及核酸产物纯度最高,有较大的临床应用价值.

目的 制备血小板膜仿生纳米靶向探针(PLT-RAP@NPs),探讨其在体外的免疫逃逸、靶向和黏附能力,以及联合超声靶向微泡释放技术(UTMD)后的载药释放情况.方法 采用单乳化-溶剂挥发法合成纳米探针RAP@NPs,梯度离心-反复冻融法提取血小板膜囊泡,超声震荡法制备PLT-RAP@NPs,检测其粒径、表面电位及稳定性,观察其微观形态,计算其包封率和载药率,确定雷帕霉素(RAP)负载的最佳方案.DiI荧光染料分别标记聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA,DiI@PLGA组)和PLT@PLGA(PLT-DiI@PLGA组),用于模拟RAP@NPs、PLT-RAP@NPs进行体外寻靶实验的荧光强度检测;将其分别与巨噬细胞、泡沫细胞和内皮细胞共孵育2h,观察DiI@PLGA组与PLT-DiI@PLGA组橙红色荧光强度,分析各细胞对DiI@PLGA和PLT-DiI@PLGA的吞噬、摄取和黏附能力.细胞增殖-毒性实验观察不同浓度RAP(3.00 μg/ml、6.25 μg/ml、12.50 μg/ml、25.00 μg/ml、50.00 μg/ml、100.00 μg/ml)的游离RAP、RAP@NPs和PLT-RAP@NPs对细胞增殖活性的影响.体外药物控释实验观察PLT-RAP@NPs联合UTMD后载药释放效果.结果 本实验制备的PLT-RAP@NPs呈球形,大小均匀,表面覆盖薄膜,"核-壳"结构清晰,平均粒径(286.83±5.25)nm,平均表面电位-(15.60±5.04)mV.当100 mg PLGA负载3 mg RAP时,包封率为60.35%,载药率为2.18%.体外寻靶实验结果显示,巨噬细胞与纳米靶向探针共孵育2h后,DiI@PLGA组橙红色荧光强度约为PLT-DiI@PLGA组3倍;泡沫细胞与靶向纳米探针共孵育2h后,PLT-DiI@PLGA组橙红色荧光强度约为DiI@PLGA组4倍;内皮细胞与纳米靶向探针共孵育2h后,PLT-DiI@PLGA组橙红色荧光强度较DiI@PLGA组增强.细胞增殖-毒性实验结果显示,随着RAP浓度增高,游离RAP中细胞增殖活性下降,而RAP@NPs和PLT-RAP@NPs中细胞增殖活性变化较小.体外药物控释实验结果显示,RAP@NPs和PLT-RAP@NPs中RAP均缓慢释放,72 h积累药物释放量分别为42.12%和33.74%,联合UTMD后积累药物释放量分别提升至75.57%和67.54%.结论 成功制备PLT-RAP@NPs,其可抑制巨噬细胞吞噬、增强泡沫细胞摄取和提高内皮细胞黏附,从而实现免疫逃逸及靶向能力,联合UTMD可进行RAP靶向控释.